葡聚糖檢測(cè)方法

1、葡聚糖檢測(cè)方法(試劑盒法翻譯)一、試劑的提供瓶子1:外切-1，3-葡聚糖酶(100微升/毫升)加-葡萄糖苷酶(20微升/毫升)懸浮液，2.0毫升瓶2:淀粉葡萄糖苷酶(1630u/ml)加轉(zhuǎn)化酶(500u/ml)溶液，50% v/vglycero，20ml瓶子3:gopodriat緩沖液、緩沖液(48毫升，ph 7.4)、對(duì)羥基苯甲酸和吖嗪鈉(0.4% w/v)。瓶子4:地鼠酶。瓶5:在0.2%重量/體積苯甲酸中的d-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(5毫升，1.00毫克/毫升)瓶子6:控制年-葡聚糖制劑。二。試劑的處理1.向瓶1中加入8毫升醋酸鈉緩沖溶液，分裝并在-20下儲(chǔ)存。2.直接使用瓶2中的試劑，并將其穩(wěn)

2、定在4C 2年或-20C 4年。3.用純凈的稀釋水將3號(hào)瓶中的GOPOD試劑的體積固定到1L，并將其穩(wěn)定在4C 2年。4.使用純化的稀釋水將4號(hào)瓶中的GOPOD試劑的體積固定到1L，在黑暗環(huán)境中儲(chǔ)存，并在4下穩(wěn)定2-3個(gè)月、在-20或12個(gè)月。5.直接使用瓶5中的試劑，并在室溫下穩(wěn)定4年。6.直接使用瓶6中的試劑，并在室溫下穩(wěn)定5年。三。未提供試劑的制備(緩沖液的配置)1.乙酸鈉緩沖液(200 mM，pH 5.0)將11.6毫升冰醋酸(1.05克/毫升)加入900毫升去離子水中，用4M氫氧化鈉(16克/100毫升)調(diào)節(jié)ph=5.0，并在4儲(chǔ)存。2.醋酸鈉緩沖液(1.2 M，酸堿度3.8)將69

3、.6毫升冰醋酸加入800毫升去離子水中，用4M氫氧化鈉(16克/100毫升)調(diào)節(jié)ph=3.8，室溫儲(chǔ)存。3.氫氧化鉀(2 M)將112克氫氧化鉀加入800毫升去離子水中，溶解并在室溫下儲(chǔ)存。4.鹽酸(37% v/v；在室溫下穩(wěn)定10年四.檢測(cè)空白試劑的配置1.試劑空白加入0.2毫升乙酸鈉緩沖液(200毫摩爾，pH 5.0)和3毫升OPOD試劑。2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)向0.1毫升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(1毫克/毫升)和0.1毫升緩沖溶液(200毫升，pH 5.0)中加入3.0毫升OPOD試劑溶液。V.1，3:1，6-6-葡聚糖的測(cè)量和待測(cè)樣品的制備答：測(cè)量總葡聚糖1.壓碎待測(cè)樣品。用20-30目篩過(guò)篩。2.準(zhǔn)確

4、稱(chēng)取100毫克待測(cè)粉碎樣品，放入培養(yǎng)管中，確保樣品沉入培養(yǎng)管底部。3.向培養(yǎng)管中加入濃鹽酸(37% v/v)，密封并用渦流混合器充分混合。置于30水浴中45分鐘，每15分鐘攪拌一次(確保樣品完全溶解)4.向每個(gè)培養(yǎng)管中加入10毫升去離子水，并混合均勻。5.在100的沸水浴中培養(yǎng)2小時(shí)。6.冷卻至室溫，加入10毫升氫氧化鉀(2毫升)。7.使用乙酸鈉緩沖液(200 mM，pH 5.0)將體積固定至100毫升，沖洗培養(yǎng)管，并混合均勻。8.1800轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，得到離心溶液。9.將0.1毫升離心機(jī)移至試管(2份)。10.從瓶子1中加入0.1毫升處理溶液，在40水浴1小時(shí)。11.加入3毫升OP

5、OD試劑，40水浴20min。12.測(cè)量510nm處的吸光度。-葡聚糖含量的測(cè)定1.準(zhǔn)確稱(chēng)取100毫克待測(cè)粉碎樣品，放入培養(yǎng)管中，確保樣品沉入培養(yǎng)管底部。2.加入2Ml 2m氫氧化鉀溶液，在冰浴中攪拌20分鐘。3.加入8毫升1.2m醋酸鈉緩沖液(酸堿度=3.8)并攪拌。立即加入0.2毫升小瓶2試劑，攪拌均勻，在40水浴30分鐘，用渦旋混合器間歇混合。4.當(dāng)樣品含有10%的-葡聚糖時(shí)，將上述溶液轉(zhuǎn)移至100毫升容量瓶中(使用洗瓶水)定容，充分混合，1800轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘。5.當(dāng)樣品含有10%的-葡聚糖時(shí)，該樣品的最終體積約為10.3毫升，1800轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘(不稀釋)6.將0.1毫升離心機(jī)移至試管(2份)。7.從1號(hào)瓶中加入0.1毫升處理液，加入3毫升OPOD試劑，40水浴20min8.測(cè)量510nm處的吸光度。六.計(jì)算公式和描述右旋糖酐總量(% W/W)=E x F/W x 90。-葡聚糖(% w/w)=e x