DNA的粗提取與鑒定課件解讀.ppt

1、粗提取與鑒定,DNA,實驗材料的選取,材料：魚卵、豬肝、菜花（花椰菜）、香蕉、雞血、獼猴桃、洋蔥、豌豆、菠菜、在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的大腸桿菌 原則上，凡是含有DNA的生物材料都可以考慮，但是，選用DNA含量相對較高的生物組織，成功的可能性更大,雞是真核生物，真核生物的DNA都在染色體上。 鳥類的血細胞核大，DNA多 不需要破除細胞壁 問題：雞血細胞液在取材之后，到實驗前，是否需要特殊處理嗎？ 檸檬酸鈉抗凝,一、實驗原理,、DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。,、DNA不溶于酒精溶液，

2、但是細胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進一步提取出雜質(zhì)較少的DNA。,、DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{色。因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。,二、目的要求,初步掌握DNA粗提取和鑒定方法，觀察提取出來的DNA物質(zhì)。,三、材料：,雞血細胞液（5-10ml），體積分數(shù)為95%的酒精溶液（冷卻），蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/l和0.015mol/l的氯化鈉溶液，二苯胺試劑,取質(zhì)量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）100ml，置于燒杯中，將新鮮雞血180ml注入，同時用玻璃棒攪拌，以免凝血，然后倒入離心管中用1000r

3、/min的離心機離心2min，此時，血細胞沉淀于離心管的底部，除去上清液，就可以得到雞血細胞液。,問：提取雞血中的DNA時，為什么要除去血液中的上清液？,四、方法步驟：,1、制備雞血細胞液,雞血細胞液,答：上清液是血清，不含有血細胞，而DNA存在于雞血細胞中，所以要把上清液除去。,加入濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液（抗凝劑）：防止雞血細胞液凝固。,新鮮雞血,2、提取雞血細胞的細胞核物質(zhì),將制備好的雞血細胞液5-10ml，注入燒杯中，加入蒸餾水20ml，同時用玻璃棒沿一個方向快速攪拌，使血細胞的細胞膜和核膜加速破裂，過濾，取其濾液。,雞血細胞液,加入蒸餾水20ml。 目的是：使細胞吸水漲破，

4、釋放出細胞中的DNA。,將物質(zhì)的量濃度為2mol/l的氯化鈉溶液40ml加入到濾液中，攪拌使其混合均勻，這時DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。,3、溶解細胞核內(nèi)的DNA,DNA溶解液,加入濃度為2mol/L的氯化鈉溶液40ml,沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入蒸餾水，同時輕輕攪拌，這時會有絲狀物出現(xiàn)，隨著蒸餾水的加入逐漸增多，一直到氯化鈉濃度約為0.14mol/l時，不再繼續(xù)增加。,5、濾取含DNA 的黏稠物,4、析出含DNA的黏稠物,加入蒸餾水。 目的是：降低NaCI的濃度，析出DNA。,獲得DNA的黏稠物(白色乳狀),在燒杯中注入物質(zhì)的量濃度為2mol/l的氯化鈉溶液20ml，使黏稠物盡量多溶解于溶液中。,6、

5、將DNA的黏稠物再溶解,用紗布過濾，取其濾液，DNA溶于濾液中,7、過濾含有DNA的氯化鈉,加入濃度為2mol/l的氯化鈉溶液20ml,獲得含DNA的濾液,在溶液中加入冷卻的酒精溶液50ml，溶液中出現(xiàn)雜質(zhì)較少的絲狀物（它的主要成分就是DNA）。,8、進一步提取含雜質(zhì)較少的DNA,加入冷卻的酒精溶液50ml,含DNA的濾液,雜質(zhì)較少的絲狀物,9、DNA的鑒定,取兩支20mL的試管，各加入濃度為0.015molL的氯化鈉溶液5mL，將絲狀物放入其中一支試管中，用玻璃棒攪拌，使絲狀物溶解。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min，待試管冷卻后，觀察并且比

6、較兩支試管中溶液顏色的變化。,加入0.015氯化鈉溶液5mL,不加入絲狀物,加入4mL的二苯胺試劑,藍色,加入0.015氯化鈉溶液5mL,加入絲狀物,加入4mL的二苯胺試劑,例：下圖為“DNA的粗提取與鑒定”的實驗裝置，請回答問題。,(1)實驗材料選用雞血細胞液，而不用雞全血，主要原因是雞血細胞液中 含量較高。 (2)在圖A所示的實驗步驟中加蒸餾水20 mL的目的是 ，通過圖B所示的步驟取得濾液，再在濾液中加入2 mol/L的NaCl溶液的目的是 ；圖C所示實驗步驟中加蒸餾水的目的是 。 (3)為鑒定實驗所得絲狀物的主要成分是DNA，可按圖D所示進行實驗，滴加 溶液。,(4)a試管為對照組，b

7、試管為實驗組。 a試管現(xiàn)象 ； b試管現(xiàn)象 。 在沸水中加熱的目的是 ，同時說明DNA對高溫有較強的 。 a試管在實驗中的作用是 。 b試管中溶液顏色的變化程度主要與 有關(guān)。,加快顏色反應(yīng)速度,DNA,使血細胞吸水漲破，放出DNA,使濾液中的DNA溶于濃鹽溶液,使DNA析出,二苯胺,溶液不變藍,溶液變藍,耐受性,對照,加入絲狀物的多少,步驟：,提取血細胞核物質(zhì)(蒸餾水漲破),溶解(2 mol/L的NaCl),過濾(含核物質(zhì)濾液),析出(滴蒸餾水，降NaCl濃度至0.14 mol/L),過濾（DNA的黏稠物）,再溶解(2 mol/L的NaCl),過濾（含DNA的濾液）,進一步提純(體積分數(shù)為95%的冷卻酒精),鑒定,制備雞血細胞液,方案二：直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)10-15min 嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶 蛋白酶能分解雜質(zhì)蛋白，但對DNA沒有影響，從而使提取的D