柑橘黃龍病的預(yù)警及防治技術(shù)

1、柑橘黃龍病的預(yù)警及防治技術(shù)摘 要2第一章 前 言31.2 國內(nèi)外相關(guān)研究進(jìn)展31.2.1 柑橘黃龍病病原研究31.2.2 柑橘黃龍病防治措施的研究進(jìn)展41.2.3 黃龍病檢測方法進(jìn)展5第二章 黃龍病特性剖析72.1 黃龍病概況82.1.1 癥狀特點82.1.2 生物學(xué)特性82.2 病發(fā)媒介及條件92.2.1 蟲媒簡介92.2.2 柑橘木虱習(xí)性92.2.3 流行條件102.3 病情分級102.3.1 舊型分級標(biāo)準(zhǔn)102.3.2 新型分級標(biāo)準(zhǔn)11第三章 疫情檢測及防護(hù)措施113.1 檢疫方法113.1.1田間簡易檢測113.1.2生化指標(biāo)檢測113.1.3顯微鏡檢測123.1.4 血清學(xué)檢測123

2、.1.5 生物分子檢測133.2 擬采用的防治措施153.2.1 化學(xué)防治153.2.2 莖尖微芽嫁接（STG）脫毒153.2.3 利用砧木的耐病性防治柑橘黃龍病163.2.4 從病源地和運輸途徑控制柑橘黃龍病163.2.5 熱處理163.2.6 RGA 法克隆候選抗病基因17第四章 實案研究184.1 調(diào)查對象概況184.1.1往年柑橘黃龍病防控工作開展情況184.1.2 當(dāng)前疫情發(fā)生情況及工作打算204.2 通道縣柑橘黃龍病普查情況214.3 通道縣柑橘木虱的發(fā)生及綜合防治技術(shù)234.3.1 通道縣柑橘木虱概況234.3.2 通道縣柑橘木虱的發(fā)生和危害234.3.3 通道縣柑橘木虱發(fā)生規(guī)律

3、234.3.4 柑橘木虱綜合防治技術(shù)244.4 柑橘黃龍病發(fā)生危害與防治指標(biāo)研究254.4.1柑橘黃龍病發(fā)生危害簡介254.4.2 防治指標(biāo)254.4.3 材料與方法254.4.4 結(jié)果與分析264.4.5 本章小結(jié)與討論29第五章 展望34致 謝34參考文獻(xiàn)35摘 要 橘黃龍病被稱作柑橘病害中的不治之癥，本文主要從柑橘黃龍病的危害情況以及產(chǎn)生的影響兩個方面對其進(jìn)行了詳細(xì)的介紹，并對近年來的柑橘黃龍病綜合防治的研究成果進(jìn)行了總結(jié)，從物理防治層面和化學(xué)防治層面分別對柑橘黃龍病的防治技術(shù)的進(jìn)展進(jìn)行了詳細(xì)的闡述，并以通道縣的柑橘黃龍病防治工作作為實例進(jìn)行分析，對其提出具有針對性的防治著重點，希望可以

4、為柑橘黃龍病的防治提供有力的理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：柑橘黃龍病；預(yù)警; 防治指標(biāo); 綜合治理AbstractCitrus Huanglongbing has become the most serious threat for citrus farming.This paper make a detailed introduction to the two aspects of the damage of Citrus Huanglongbing and its impact.And the research results of the comprehensive prevention and c

5、ontrol of Citrus Huanglongbing in recent years are summarized.This paper is analyzed as an example of Citrus Huanglongbing prevention and control in Tongdao Town.At last,this paper puts forward the target of prevention and cure of Huanglongbing and hopes to provide a powerful theoretical basis for t

6、he prevention and treatment of citrus Huanglongbing.Key words: Hanglongbing;early warning;prevention index第一章 前 言1.1引言柑橘作為世界上交易量最大的商業(yè)類瓜果產(chǎn)品之一，它的種植范圍出現(xiàn)在138個國家或地區(qū)，如巴西、美國、中國、墨西哥、西班牙等（祁春節(jié)，2009），根據(jù)王秋萍的大數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，在世界范圍內(nèi)柑桔的年總產(chǎn)量早在2013年度就實現(xiàn)了三千萬噸的歷史性突破。在中國柑橘種植模式是“垂直和水平四帶基地”（鄧秀欣2004），柑橘生產(chǎn)已對中國的農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量做出了巨大的貢獻(xiàn)，而在生產(chǎn)工程中

7、不時有一些要素限制著柑橘產(chǎn)量和品格的改善，病蟲害的影響是嚴(yán)重?fù)p害柑橘經(jīng)濟(jì)價值的主要原因。2008年四川廣元大食蠅造成柑橘內(nèi)部生長蛆蟲，柑桔病蟲害造成品質(zhì)下降、商品滯銷，黑點病與黑霉病等病害造成柑橘外觀品質(zhì)降低、丑化，致使產(chǎn)品價錢下跌（陳國慶，2014）。就目前對柑桔病害的了解情況來看，柑橘黃龍病是眾多病害中造成疫情最為嚴(yán)重的一種。早期出現(xiàn)的，疑似是黃龍病的描述是在1700年的印度，當(dāng)時這種病被人們命名為頂梢枯死病，國內(nèi)最先發(fā)現(xiàn)這種病是在潮汕地區(qū)，20世紀(jì)中期被林孔湘驗證這種病的傳播方式包括嫁接。21 世紀(jì)初再次研究統(tǒng)計時發(fā)現(xiàn)，國內(nèi)僅有的十九個具有生產(chǎn)柑橘能力的省市地域中，11個省市地域都出現(xiàn)了

8、黃龍病的身影，對國內(nèi)柑橘產(chǎn)業(yè)的長期發(fā)展戰(zhàn)略起到了很大的阻礙作用(黃麗，2013）。在2004 年時在巴西也發(fā)現(xiàn)黃龍病，2005年該病害成功入侵了美國的佛羅里達(dá)地區(qū)，之后黃龍病更是傳染了整個佛羅里達(dá)和喬治亞州，令佛羅里達(dá)的柑橘產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)70余億美元（Elizabeth et al., 2014）。黃龍病在世界范圍內(nèi)傳播的越來越廣，對柑桔產(chǎn)業(yè)鏈造成了很大的損害，各區(qū)域的柑橘園受損程度不同，損失較小的產(chǎn)品數(shù)量減半，損失較大的破園停產(chǎn)。經(jīng)過技術(shù)的改善和科技的發(fā)展，當(dāng)下對黃龍病的研究在每個領(lǐng)域都取得了突破性的進(jìn)展，如病原物基因組序列的測定、一系列早期檢測手段的建立、分子手段對新藥物的研發(fā)等，但是在

9、對柑桔黃龍病防控方面的研究成果依然很是匱乏，目前普遍采用的方法措施還是清理病株、預(yù)防柑桔木虱的發(fā)生以及培育無毒幼苗這三大類（周常勇，2014）。為了更好的做到對黃龍病的防護(hù)，我們的研究視線應(yīng)該放在前期快速準(zhǔn)確的檢測手段和擁有實際防護(hù)成效的方法之上。 1.2 國內(nèi)外相關(guān)研究進(jìn)展1.2.1 柑橘黃龍病病原研究歷年來，相關(guān)研究對柑橘黃龍病病原體的類支原體、類立克次體、類細(xì)菌的三個階段進(jìn)行了探索（Jagoueix et al.,1994）。現(xiàn)階段通過對黃龍病的顯微鏡觀察、單株數(shù)據(jù)分析、基因組測序等方法，初步定論黃龍病病原體外的這層膜是一種僅在柑橘韌皮部內(nèi)寄生的革蘭氏陰性細(xì)菌，到現(xiàn)在也未建立其相關(guān)的培養(yǎng)

10、體系(Doetal.,2005)。柑桔黃龍病主要靠蟲媒來進(jìn)行大范圍的傳播，其傳播媒介為木虱（Diaphorina citri），以病原熱敏感性的不同、傳播的媒介以及病原菌在16S r DNA 區(qū)的差異為分類標(biāo)準(zhǔn)可以將木虱大致分為亞洲種、非洲種和美洲種三個品種。2009 年 Duan等同系列目的基因的測序工作成功得到了“Ca. L. asiaticus”的全基因組序列，該資料的獲取為研究黃龍病的相關(guān)人員提供了可研究其多態(tài)性的基因位點，從此之后柑橘黃龍病病原分化研究進(jìn)入了一個新的領(lǐng)域。1.2.2 柑橘黃龍病防治工作的歷史進(jìn)程1.2.2.1 黃龍病傳統(tǒng)脫毒方法擴(kuò)展研究黃龍病很早就被世人所知，對其進(jìn)行

11、的研究也不在少數(shù)。在傳統(tǒng)成熟的脫毒方法基礎(chǔ)上，各地域秉著弘揚和改善的態(tài)度為其無毒幼苗的生產(chǎn)系統(tǒng)做出了進(jìn)一步的努力和探索。 經(jīng)過前人努力研究發(fā)現(xiàn)，如果能夠在合適的條件下對植株進(jìn)行高溫處理，那么就可以有效的消除黃龍病所帶來的毒性，在 48-51的濕熱空氣環(huán)境中對其處理 45-65 min 可以明顯降低椪柑和焦柑病株體內(nèi)黃龍病菌數(shù)量（林孔湘，1965）。此外，關(guān)磊的研究團(tuán)隊以樹齡為八年的柑桔樹為實驗對象，對該樹進(jìn)行覆蓋薄膜操作后又進(jìn)行熱處理，在和對照組即未覆蓋薄膜的樹本對比后發(fā)現(xiàn)：熱處理方法稀釋黃龍病濃度的效果比較顯著（關(guān)磊等，2012）。Sharma 等人還將熱處理方法和微芽嫁接技術(shù)混合施用，以環(huán)

12、斑病毒為實驗對象得出結(jié)論：熱處理方法是一種效果明顯的脫毒手段（Sharmaetal., 2011）。 藥劑篩選方面，有效藥劑處理方面的報道鮮有出現(xiàn)，一般情況下，大多使用四環(huán)素等抗生素進(jìn)行藥物處理，然而，現(xiàn)階段還未生產(chǎn)出針對黃龍病的特效藥?？聸_將 500-l000 ppm 的四環(huán)素和青霉素混合在一起對病芽進(jìn)行處理，效果顯著，沒有發(fā)病的案例出現(xiàn)（柯沖等，1979）。陳仕欽利將三種備選藥劑分別利用韌皮部輸液的方法注入植株之中，對實驗材料的數(shù)據(jù)收集持續(xù)了八個月，進(jìn)行對照實驗后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1 g/L的2,2-二溴-3-次氮基丙酰胺（DBNPA）、氨芐青霉素和異噻唑啉酮對黃龍病菌的的相對防效分別達(dá)到89.7

13、5%、87.27%、83.72%（陳仕欽，2013）。張木清的研究團(tuán)隊使用對比的研究方法，第一種配方是硫酸鏈霉素和青霉素混合使用；第二種配方是春日霉素和四環(huán)素混合使用，采用兩種配方分別對患黃龍病的柑橘植株進(jìn)行處理，結(jié)果表明兩種配方皆可以降低黃龍病病原的濃度（Zhangetal.,2013），依照結(jié)果對實驗用抗生素進(jìn)行分級定義，可將抗生素分為三大類：強效型、中效型、弱效型（Zhanget al., 2014）；有資料表明植物抗病毒劑在其他作物上使用可以起到不錯的效果，將這種方法轉(zhuǎn)嫁到柑橘植株上，喬芬的研究團(tuán)隊使用這種方法，首先將板藍(lán)根中藥材與黃芩進(jìn)行水浴加熱處理，然后利用微芽嫁接技術(shù)將處理過的中

14、藥材轉(zhuǎn)嫁到染病植株上，最后的結(jié)果表明使用這種方法可以成功的使黃龍病的脫毒率達(dá)到80%以上（喬芬等，2011）。 在微芽嫁接這一技術(shù)領(lǐng)域，1975年的Navarro 的莖尖微芽嫁接方法是最先得到證明可以成功脫毒的鼻祖，延續(xù)到現(xiàn)在已經(jīng)有了40余年的歷史（Navarro et al.,1975; 1991）?？萍剂α枯^為雄厚的地域利用柑橘良種無毒幼苗的方法進(jìn)行生產(chǎn)，借用這種方法希望可以增加單位面積產(chǎn)量，但是國內(nèi)技術(shù)力量不足，無病毒苗木生產(chǎn)技術(shù)還處于開發(fā)階段（周常勇等,2006）。失去微芽嫁接技術(shù)的柑橘無毒幼苗生產(chǎn)難以達(dá)到穩(wěn)定的產(chǎn)業(yè)鏈，該技術(shù)的意義在于能夠?qū)o毒的組織結(jié)構(gòu)完整分離出來。經(jīng)各方專員努力探

15、究，事實已經(jīng)證明莖尖微芽嫁接技術(shù)是短時間內(nèi)能夠滿足無毒幼苗生產(chǎn)的最佳方法(宋瑞琳等，1990；姜玲，2007；廖祥六等，2007）。但是這種方法也有弊端，因為需要嫁接嫩芽的原因，這種方法受到季節(jié)的限制，而且苗木的成活率得不到保障，在進(jìn)行實際應(yīng)用時并不可靠。前任已經(jīng)研究出了許多利用成熟組織培養(yǎng)獲得嫩芽的辦法，并且這種培養(yǎng)體系幾近完善（洪磊等，2009)，然而還是沒有突破季節(jié)的限制。1.2.2.2 拮抗黃龍病的相關(guān)化學(xué)藥劑的研究 科技力量愈發(fā)的強大，分子生物化學(xué)技術(shù)也得到了長足的進(jìn)展，目前還是主要使用人工或天然化學(xué)藥劑的方法來進(jìn)行柑橘黃龍病的防護(hù)與治療。值得一提的是，王林婧等針對革蘭氏陽性菌合成的

16、平板霉素能很好地與脂肪酸代謝中FabF 酶的 17 個殘基結(jié)合從而抑制脂肪酸的合成（王林婧等，2011）。此外，類似于 Fab H、Fab B 酶的這樣可以在生理生化過程起一定影響的藥劑逐漸被開發(fā)出來（Young et al., 2006），對黃龍病菌的防治同樣可以采取類似的原理來進(jìn)行模擬試驗，然而現(xiàn)實中受到研究經(jīng)費的限制，借此研究有較大的困難。1.2.3 黃龍病檢測方法進(jìn)展 在田間進(jìn)行對黃龍病判斷主要查看葉片是否黃梢、斑駁型黃化、缺素狀黃化癥狀，產(chǎn)看黃龍病成熟的果實等現(xiàn)象，例如果子泛青果以及紅鼻子等癥狀，在這些癥狀中辨別度最高的是黃梢和斑駁的癥狀，在田間進(jìn)行診斷時，以這兩個癥狀作為柑橘的黃龍

17、病有力證據(jù)。但是這很容易被誤診，因為其他的病害又或者是橘園的營養(yǎng)不良也會造成這些癥狀的產(chǎn)生，因此在黃龍病的診斷上比較容易出現(xiàn)失誤。由于以上原因，專業(yè)學(xué)者特意為此研究出一套辨別度較高的診斷方法，比如指示植物檢測法（Schwarz, 1968），單克隆抗體檢測技術(shù)（Garnieret al., 1982）以及免疫學(xué)檢測（柯穗等，1989），但是這些方法在靈敏度、特異性又或者是應(yīng)用上都或多或少地存在一些瑕疵，實用性并不是很強。 這些年來，科技力量的大幅增強，致使更多的分子生物學(xué)技術(shù)可以在黃龍病檢測這一方面起到作用。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的技術(shù)優(yōu)點在于高特異性、高靈敏性以及操作很是簡便，這是現(xiàn)階段在黃龍病檢測

18、上最常規(guī)使用的方法。除了常規(guī)方法之外，當(dāng)下使用較多的的柑橘黃龍病分子診斷手法還有常規(guī) PCR、熒光定量 PCR 及巢式 PCR 技術(shù)。除了國外的研究之外，國內(nèi)的相關(guān)研究院也設(shè)計了實用性很強的特異性引物（田亞南等，1996）。常規(guī) PCR 技術(shù)的發(fā)展，可以更快、更準(zhǔn)的檢測出黃龍病病原，瓷技術(shù)特異性以及靈敏度都有良好的表現(xiàn)，可在黃龍病基礎(chǔ)診斷上大肆推廣（鄧曉玲等，1999；董高峰等，2003）。以常規(guī)PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，針對性提高靈敏度和特異性的巢式PCR技術(shù)（Nested-PCR）表現(xiàn)更加優(yōu)良，別名套式 PCR，實質(zhì)就是使用兩套 PCR 引物分別進(jìn)行兩次擴(kuò)增反應(yīng)。另外，有研究表明采用 Nested

19、-PCR 可以比常規(guī) PCR方法更加快速的檢測到感黃龍病植株中的病原，并且具有更高的靈敏度（丁芳等，2004）。但是，因為 Nested-PCR 靈敏度很高而且容易被污染的原因，假陽性現(xiàn)象在檢測過程中出現(xiàn)的次數(shù)較多，客觀性不足。由此可見，是用這個辦法進(jìn)行黃龍病原菌監(jiān)測需小心實驗操作。這些年來還開發(fā)了名為實時熒光定量 PCR（q PCR）的新興技術(shù)，在準(zhǔn)確定量黃龍病病原的檢測研究上取得了較好的成績，此手段檢測黃龍病病原原的靈敏度要比常規(guī) PCR 和 Nested-PCR方法效果更好，特異性和重復(fù)性也更加出色。和常規(guī)的PCR技術(shù)比較，q PCR 方法更加具備操作簡化、不易污染、高靈敏度和高穩(wěn)定性的

20、優(yōu)勢，在其他資料中驗證了此效果的真實性（Wanget al等, 2006）。Kawabe 的研究團(tuán)隊（2006）使用熒光定量 PCR 對患有黃龍病植株的不同部位分別做了檢測，目的是找出菌體附著濃度最高的部位，最終的研究成果顯示感病植株的葉柄處和葉中脈的菌體濃度最高，樹皮部位次之，而樹根部位最少，最后得出病原菌在寄主體內(nèi)呈不均勻分布的結(jié)論。劉曉露（2014）從田間感黃龍病砂糖橘植株上采集不同部位的葉片樣品，利用基于 Taq Man 探針法的 q PCR 技術(shù)檢測“Ca. L. asiaticus”濃度，研究結(jié)果顯示，在確定患有黃龍病的病株枝條上，老葉所含的病原菌濃度最低，嫩葉所含的濃度相對較高，

21、而成熟的葉片所含的濃度最高，沒有發(fā)病跡象的枝條上幾乎檢測不出來病原菌的存在。 1.3 選題的目的和意義 柑橘黃龍病（Candidatus liberobacter asiaticum）的發(fā)病跡象較為明顯，各地果農(nóng)根據(jù)發(fā)病特征也將黃龍病稱為黃梢病或者是青果病。因為現(xiàn)階段并沒有針對此病的特效藥劑，在植株感病后只能整株挖除，因此特稱為柑橘的不治之癥。得病的柑橘會出現(xiàn)葉片斑駁、葉片黃化、脫葉落果、發(fā)育減緩以及品質(zhì)下降的現(xiàn)象，這對該產(chǎn)業(yè)鏈的經(jīng)濟(jì)效應(yīng)造成了沉重的打擊。目前，柑橘黃龍病流傳較廣，在世界范圍內(nèi)，亞洲等四個州以及 40多個國家和地區(qū)都發(fā)現(xiàn)了柑橘黃龍病的身影1。最初人們誤以為柑橘黃龍病的出現(xiàn)是病毒

22、造成的，經(jīng)過長久的科學(xué)試驗發(fā)現(xiàn)柑橘黃龍病是由原核生物變形菌門亞綱韌皮部桿菌待定屬(Liberobacter) 難純培養(yǎng)細(xì)菌造成的2，其病原菌目前為止也沒有辦法可以得到純培養(yǎng)，所以進(jìn)一步的實驗研究難以展開?，F(xiàn)階段對柑橘黃龍病的防護(hù)和控制還沒有實質(zhì)性的方法措施，只能依靠限制柑橘木虱、整株挖除病株和培育無毒幼苗三種主要辦法來防控3，盡管效果不明顯，但是相關(guān)人員依然在積極研究對柑橘黃龍病的防控措施。第二屆國際柑橘黃龍病研討會在兩千零一年的時候在美國成功舉辦，雖然在該研討會上并沒有研究人員拿出具有抗病特性的柑橘幼苗，但是經(jīng)過技術(shù)共享還是得出了一些成果，找到了不同品種對黃龍病抗病性與感病性的不同之處，所以

23、我們可以根據(jù)這一點來進(jìn)行黃龍病的防治，在專業(yè)領(lǐng)域?qū)τ诟涕俚姆肿涌剐杂N工作也正在不斷的研發(fā)之中4。本人依據(jù)國內(nèi)外現(xiàn)階段的研究現(xiàn)狀，對柑橘黃龍病的防治研究工作進(jìn)行相關(guān)陳述。第二章 黃龍病特性剖析2.1 黃龍病概況 中國最早發(fā)現(xiàn)柑橘黃龍病的年份紀(jì)錄是在1919年，最早的發(fā)生地是在廣東5。30年以后，在廣東等地的柑橘產(chǎn)區(qū)也有此病的出現(xiàn)；在1970年到1980年這個時間范圍內(nèi),柑橘黃龍病又在國內(nèi)其他產(chǎn)區(qū)有所發(fā)現(xiàn)，病害程度有所加強。黃龍病不僅僅發(fā)生在國內(nèi)產(chǎn)區(qū),在南亞、東南亞以及阿拉伯島等地也均有發(fā)現(xiàn)6。2.1.1 癥狀特點黃龍病在早期的表現(xiàn)并不是很明顯，常常只出現(xiàn) 12條黃梢，民間戲稱為“雞頭黃”或“插

24、金花”，逐漸的黃梢越來越多，到了后期病株黃化枯死。黃梢上的葉片黃化不均勻，有時是整體的黃化，有時僅僅是黃綠相間的斑駁，直到秋季末期病葉會逐漸脫落。第二年春季，染病的植株相較正常植株發(fā)芽更早，而且新生出的梢比較短小、纖細(xì)，葉子變小且更具有硬度，葉片的主脈和側(cè)脈皆呈現(xiàn)綠色，但是其它部位呈現(xiàn)出異常的黃色。染病植株的花期相對較早，并且開花很多，但是花朵不易成果，大部分會自動脫離母本。2.1.2 生物學(xué)特性 歷史上曾經(jīng)誤以為柑橘黃龍病菌是類菌原體或類立克次氏體，后來經(jīng)過與其它細(xì)菌結(jié)構(gòu)的對比才發(fā)現(xiàn)，黃龍病的病原屬于革蘭氏陰性細(xì)菌中的其中一種。該細(xì)菌屬于韌皮部桿菌屬，有亞洲種 （Candidatus lib

25、erobacter asiaticum）、非洲種（Candi -datus liberobacter africanum）和美洲種（Candidatus Liberibacter americanum）3個種7。巴西的柑橘黃龍病有亞洲種和美洲種 2 種，美洲種占的比例較大，然而大多數(shù)是混合侵染8。柑橘黃龍病菌屬于專性寄生菌中的一種，當(dāng)下還沒有研究出人工培養(yǎng)的辦法。柑橘黃龍病病菌的主要傳播方式有嫁接、幼苗和木虱蟲媒，其中蟲媒傳播是最主要的傳播方式。以熱敏感性、蟲媒的種類以及地區(qū)分布為標(biāo)準(zhǔn)，可以將柑橘黃龍病病原細(xì)菌分為兩個株系。在亞洲發(fā)病的柑橘病株，經(jīng)過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)在2732區(qū)間是該品種最易感病的溫度

26、閾值，柑橘木虱（Diaphorina citri Kuwayama）是其傳播病菌的媒介，病原為柑橘黃龍病原亞洲株系（Liberobacter asiaticum）；在非洲發(fā)病的柑橘病株，經(jīng)過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)在2024區(qū)間是該品種最易感病的溫度閾值，非洲木虱Trioza erytreae（Del G.）是其傳播媒介，病原為柑橘黃龍病非洲株系（Liberobacter africanum）。2.2 病發(fā)媒介及條件2.2.1 蟲媒簡介 柑橘黃龍病主要依靠蟲媒的方式進(jìn)行大規(guī)模的病菌傳播，而橘黃龍病的蟲媒媒介是柑橘木虱。柑橘木虱屬同翅目木虱科，主要對寬皮橘、甜橙、金橘、檸檬等蕓香科植物造成危害,是對植株新梢造成

27、脅迫最大的害蟲之一。此害蟲主要分布在運、貴、川等南方地區(qū)。從2002年開設(shè)為柑桔黃龍病疫區(qū)，為了使柑桔黃龍病控制在疫區(qū)范圍內(nèi)，不向外擴(kuò)散，保護(hù)好湘西、湘南等柑橘產(chǎn)區(qū)，守好湖南西南關(guān)卡具有重要戰(zhàn)略意義。2.2.2 柑橘木虱習(xí)性1 傳病性許長藩（1988）等報道，橘木虱傳播疾病不需要結(jié)群，單體即可傳播，研究顯示柑橘苗的發(fā)病率高達(dá) 80%，攜毒成蟲完整的傳毒過程最少需要5 h，13 齡幼蟲不具備傳病能力，45 齡害蟲具有傳病能力，高齡害蟲可以將自身的病原傳染給成蟲，但是病原不能經(jīng)過繁殖的途徑傳染給子代。2 耐寒力柑橘木虱的生態(tài)幅較廣，可以在零下18的強低溫中存活十?dāng)?shù)分鐘， 在零下10的低溫中可以存活

28、四個小時以上。周啟明（1990）經(jīng)過研究提出假設(shè)，越冬的柑橘木虱成蟲具有短時間內(nèi)強行提高自身抗寒性的能力，只有在外界溫度低于某零界點時，該機(jī)能才能觸發(fā)，所以他們得出定論，逐級降溫以及持久低溫可以影響到木虱越冬成蟲的成功率。3 生活史陳循淵（1982）等人的研究表明，柑橘木虱在廣東地區(qū)一年內(nèi)可發(fā)生12代左右；而在華南地區(qū)柑橘木虱在一年內(nèi)只發(fā)生7代左右，且在九里香上比在柑橘上多34代。一般初代發(fā)生于3月中旬至5月上旬這段時期，末代發(fā)生于10月上旬至12月上旬這段時期。4 寄主植物柑橘木虱的寄生部位大部分是柑橘、月橘或者是九里香等蕓香科植物新發(fā)的枝芽。2.2.3 流行條件1 幼苗帶病、田間病株以及蟲

29、媒的種群數(shù)量是影響柑橘黃龍病發(fā)生的根本原因。 通常情況下，10%以上的幼苗帶病率又或者是20以上的田間病株率的產(chǎn)區(qū)，在此前提下蟲媒木虱的數(shù)量比較大，那么基本會發(fā)生嚴(yán)重的病害；但是如果蟲媒木虱不存在，則病害不會廣泛傳播，證明與病株數(shù)量無關(guān)。2 黃龍病的發(fā)生流行與氣象條件有重要關(guān)系。黃龍病病菌在3至35中皆可正常繁育。溫度 2228、相對濕度 80%90%條件下，可提高病菌的生長和傳播的能力。如果日均溫度在23之上，則病情擴(kuò)散嚴(yán)重；如果日均溫度在25之上且相對溫度達(dá)80%之上，則黃龍病的發(fā)生和流行將會最大限度增強。3 田間管理和植株保護(hù)是預(yù)防黃龍病的有效措施如果能夠長期保持挖除病樹，并且嚴(yán)格遵守檢

30、疫法規(guī)和苗木、接穗等繁殖材料的檢疫管理，將對蟲媒木虱的害情監(jiān)測與防治做到位，嚴(yán)格按照指導(dǎo)技術(shù)進(jìn)行栽培，并嚴(yán)格把控產(chǎn)區(qū)的肥料使用情況以及病蟲防治等過程，產(chǎn)區(qū)病情發(fā)作就會減少減慢。如果是開放式管理，病情無疑會不可控制。4 良好的生態(tài)條件有利阻止病害蔓延。在海拔較高的產(chǎn)區(qū)，由于溫度低下的原因，黃龍病發(fā)病率較低，病情傳播也比較慢；又由于日照短，濕度大的原因，致使該產(chǎn)區(qū)擁有較好的防護(hù)林，這樣就可以減緩木虱的生長、繁殖和傳播速度，病情得到了抑制，流行速度也較為遲緩。5 不同種類和品種的柑橘樹抗病或耐病性有差異。研究統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，蕉柑、大紅柑以及福橘等品種比較容易的得病，而且傳播速度很快，最終導(dǎo)致大面積的植株死

31、亡；溫州蜜柑和甜橙則具有較高的耐病性；官溪蜜柚和金柑對黃龍病抗性較好。枳在種植時并沒有明顯的癥狀表現(xiàn)，但是換做砧木品種時，并不能增加接穗品種的耐病性。除此之外的紅柑橘和酸橘等比較容易感染黃龍病的砧木品種，由于自身感病性過強的原因，因此對增強抗病性并沒有顯著的效果。2.3 病情分級2.3.1 舊型分級標(biāo)準(zhǔn)據(jù)文獻(xiàn)記載舊型分級標(biāo)準(zhǔn)將病情分為6級。0級：全樹無病；第1等級：感病植株上存在一兩個帶有斑駁黃化葉的梢；第2等級：一些枝干出現(xiàn)斑駁黃化的現(xiàn)象，感病枝干所占比例為全株的13及以下；第3等級：感病枝干所占比例為全株的13至23范圍；第4等級：感病植株所占比例為全株的23以上；第5等級：整個植株完全死

32、亡。2.3.2 新型分級標(biāo)準(zhǔn)新型分級標(biāo)準(zhǔn)將病情分為4級。0級：全樹無??；第1等級(輕度)：部分枝干存在斑駁黃化的現(xiàn)象，感病枝干所占比例為全株的13以下；第2等級(中度)：感病枝干所占比例為全株的13至23；第3等級(重度)：感病枝干所占比例為全株的23以上至整株完全死亡。理論上應(yīng)該在蟲媒控制較好的地方采取多種方法混合對柑橘黃龍病進(jìn)行防控處理。第2、3等級病樹全株挖除，第l等級修剪病枝、加強管理。通過這樣的方法可以有效地防止柑橘黃龍病的發(fā)生，此外還可以同時增強柑橘的品質(zhì)和產(chǎn)量，減少產(chǎn)區(qū)的經(jīng)濟(jì)損失。第三章 疫情檢測及防護(hù)措施3.1 檢疫方法3.1.1田間簡易檢測柑橘黃龍病外在表現(xiàn)最明顯的特征就是葉

33、片斑駁黃化，其發(fā)生時期不受限制，對柑橘的品種也沒有特殊的針對性，任何品種任何發(fā)育時期的任何部位都有發(fā)病的可能，現(xiàn)階段對柑橘黃龍病的診斷以葉片斑駁為主。田間檢測方法，把成熟期的新梢作為主要的觀察對象，最佳觀察時期是在每年的10到12月秋梢成熟之后，在這期間黃龍病的發(fā)病跡象最容易被肉眼分辨出來，以春梢葉片的斑駁情況來判定產(chǎn)區(qū)的黃龍病病樹的成功率很高。而然隨著病情的發(fā)展，黃龍病的癥狀也會隨著環(huán)境的變化而產(chǎn)生變化，進(jìn)一步發(fā)展的病情癥狀容易與其它病蟲害的癥狀相混合，感病植株如果沒有典型的感病特征則很難以被分辯出，這就又增加了對病情診斷的難度。所以，多種方法相結(jié)合的診斷手段更有利于病樹的鑒別。初步的診斷是

34、觀察植物外觀而判定，將枝條嫁接到目標(biāo)苗木枝干上，每次嫁接20株,3-4個月表現(xiàn)癥狀。張?zhí)祉档难芯繉嶒灡砻?，椏柑最為適合當(dāng)做柑橘黃龍病的指示植物，蕉柑的癥狀表現(xiàn)次之，歐柑的表現(xiàn)最差。3.1.2生化指標(biāo)檢測經(jīng)相關(guān)研究，柑橘黃龍病現(xiàn)階段無法實現(xiàn)人工分離培養(yǎng)，但受經(jīng)濟(jì)效益的影響，黃龍病的診斷需要快速且準(zhǔn)確的方法，因而相關(guān)研究轉(zhuǎn)向感染植株的生理變化層面，繼而以感病植株的生化指標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)。利用能從感病植株樹皮或病果白皮層中提取正常植株沒有的熒光物質(zhì)一龍膽葡糖苷(gentisoyl-glucoside)，經(jīng)nbutanol：aceticaeid：water(5：1：1)紙層析或薄層層析法進(jìn)行鑒別,IJHLB和

35、裂皮病，對于HLB在365nm波長下可以觀察到亮藍(lán)紫色斑點，在發(fā)病初期有效。然而這種辦法的缺點在于特異性不足，加州某一橘的受損組織中也發(fā)現(xiàn)了這種生化物質(zhì)的存在。1975年國內(nèi)首次使用熒光顯微鏡檢測的辦法，發(fā)現(xiàn)在感病植株的韌皮部中發(fā)現(xiàn)到了黃色熒光的存在，這種熒光在健康的植株又或者是其它受傷部位并沒有出現(xiàn)過，除此之外研究人員還發(fā)現(xiàn)使用蕃紅染料對患病柑橘進(jìn)行染色能夠令其韌皮部呈現(xiàn)紅色。3.1.3顯微鏡檢測在顯微鏡的鏡頭下，無論是菌體的形態(tài)、大小又或者是菌的壁膜結(jié)構(gòu)都可以清晰的表現(xiàn)出來，可以通過這些外在表現(xiàn)來進(jìn)行黃龍病的辨別9。但是這種觀察法也存在缺點，因為黃龍病病原在樹體上存在的菌量很少而且呈不均勻

36、分布狀態(tài)，這些因素導(dǎo)致電鏡成功率只有6070，實用性不強。隨后有關(guān)研究人員使用投射式熒光顯微鏡來對黃龍病的病原進(jìn)行觀察研究，但是此方法依然有缺憾，缺點在于觀察的材料必須是完全成熟的葉片才行。而且在同一個病株上，利用這種方法可以在秋梢葉上檢查出病原，但是并不能用于在春梢葉片和花柄上的檢查10。而使用FBA染色法的注意事項在于要以各梢期的新梢主葉或嫩莖為實驗對象，樣品切片厚度以3040pm最佳11。顯微鏡觀察法優(yōu)點在于簡單、直觀，但是試驗過程中所受限制過多，失誤率較高，實用性不強。3.1.4 血清學(xué)檢測80年代有關(guān)研究表明使用兔絲子做材料能夠使病原體完成從柑橘到長春花上的轉(zhuǎn)移，從而使病原體得到更佳

37、的環(huán)境進(jìn)行繁育，所以病原體的濃度很高，更有利于獲取菌體較為完整的粗提純物12。1987年原核生物抗血清和單克隆抗體成功問世，但是實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清不具備很好的特異性，其與黃龍病病原反應(yīng)之外，還具有其它可以與之產(chǎn)生原核生物反應(yīng)的物質(zhì)存在13。隨著科技的發(fā)展，黃龍病病原的單克隆抗體也逐漸問世，但是這樣的單克隆抗體依然有其短板，單克隆抗體的特性只允許其和相似的抗原產(chǎn)生反應(yīng)，甚至有時只與特定的抗原發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，這樣容易出現(xiàn)假陰性的現(xiàn)象。國內(nèi)李德望14等研究人員先后使用血清學(xué)方法對國內(nèi)的柑橘黃龍病進(jìn)行試驗檢測，依然沒能令檢測范圍過小等實際困難得到完美的解決。3.1.5 生物分子檢測（1）分子雜交分子雜交技

38、術(shù)原理：待測核酸及標(biāo)記探針充分利用核酸單鏈間核苷酸鍵之間的同源親和性，由此來展開分子之間的雜交，通常情況下，在雜交過程中，兩條單鏈形成雙鏈主要是利用堿基互補原則。其中，放射性同位素通常作為標(biāo)記物，除此之外，還可能會利用非放射性物質(zhì)，例如生物素等等。在完成整個雜交過程以后，可以利用標(biāo)記探針放射自顯影來進(jìn)行檢測。根據(jù)不同的應(yīng)用范圍，主要將核酸分子雜交分為兩類：膜上印跡雜交以及原位雜交。具體來看，膜上印跡雜交主要是指細(xì)胞中的核酸進(jìn)行分化并由此在相關(guān)支持物上面進(jìn)行結(jié)合，在體外，核酸和液相中標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交。而膜上印跡雜交具體又能夠分成兩類，又可分為兩種，主要是斑點或狹線雜交以及Southern雜

39、交或Northern雜交。Southern雜交或Northern雜交則主要是需要首先把大分子DNA或RNA進(jìn)行變性處理，然后再借助瓊脂糖電泳的方式把核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)印，讓它轉(zhuǎn)移到膜上，如此就能夠完成這種雜交反應(yīng)。就原位雜交而言，這種雜交方式主要是指標(biāo)記探針以及核酸進(jìn)行雜交，其中，核酸指細(xì)胞或組織切片中的核酸，在完成雜交以后還需要進(jìn)行檢測。目前，該方法在病原檢測中運用廣泛，一個原因是這種檢測方法具有特異性，另一個原因是這種方法可以對目標(biāo)結(jié)構(gòu)的DNA或RNA進(jìn)行精確的定位。（2）PCR反應(yīng)PCR又被叫做無細(xì)胞分子克隆，其主要是通過體外酶促擴(kuò)增特異。通常情況下，我們所說的PCR反應(yīng)過程包括三個步驟，得到新

40、合成的DNA鏈，其主要可以作為以后DNA合成的新的模板，整個過程需要進(jìn)行30.35次的重復(fù)，只有這樣，才能達(dá)到剮示DNA片段拷貝數(shù)呈指數(shù)級增長的目的。具體來看，PCR技術(shù)的特點多樣，主要具體表現(xiàn)為：具有比較強的特異性。主要是將核酸作為靶標(biāo)，由此來進(jìn)行一定的選擇性擴(kuò)增；模板用量少，并具有非常高的檢測靈敏度?？墒侨绱酥叩撵`敏度也會在污染環(huán)境中引起假陽性，因此，在操作過程中必須要嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)心；操作反應(yīng)快速，不會出現(xiàn)放射性標(biāo)記。通常情況下，三小時的時間范圍內(nèi)可以完成30次以上的循環(huán)擴(kuò)增；沒有很高的樣品要求。好處在于只要樣品中含有靶序列核酸就可以自動開始擴(kuò)增。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，PCR技術(shù)的整體水平也在不

41、斷的提高，其建立和發(fā)展促進(jìn)了分子生物學(xué)的變革發(fā)展，具有充足的活力，已經(jīng)擴(kuò)展到分子生物學(xué)的各個領(lǐng)域。廣泛地運用于病原物檢測，還實現(xiàn)了基因序列多態(tài)性的檢測，并越來越多的應(yīng)用到了疾病的早期診斷。黃龍病的PCR檢測已經(jīng)廣泛的運用到了國際上的諸多實驗室。就目前而言，柑橘黃龍病可以說是已經(jīng)廣泛的采用了PCR檢測方法進(jìn)行檢測，而PCR檢測方法又具體分為了三類，主要包括常規(guī)PCR、定量PcR以及巢式PCR。在1996年，法國Jagoueix運用了常規(guī)PCR擴(kuò)增柑橘黃龍病，實現(xiàn)了1160bp的特異性片段長度。法國的Hocquellet等人在1999年則進(jìn)行了引物的設(shè)計，主要是具體根據(jù)柑橘黃龍病的亞洲種以及非洲種

42、的核蛋白而言的。這種引物意義價值重大，具體可以擴(kuò)增柑橘黃龍病的亞洲種以及非洲種，其中，擴(kuò)增以后的亞洲種的PCR產(chǎn)物長度具體能夠達(dá)到700bp，相應(yīng)的，非洲種則主要可以擴(kuò)增到650bp的PCR產(chǎn)物長度。區(qū)別柑橘黃龍病的方法主要是PCR產(chǎn)物長度的不同。在PCR定性技術(shù)的基礎(chǔ)上，又進(jìn)行了一系列的發(fā)展創(chuàng)新，創(chuàng)造出了定量PCR技術(shù)。PCR定性技術(shù)作為一種基因定量技術(shù)，解決了很多問題，實現(xiàn)了很大的發(fā)展，能夠針對于模板濃度及檢鋇I基因變異動態(tài)進(jìn)行準(zhǔn)確的測定。在此之后，很多科學(xué)工作者對該技術(shù)進(jìn)行了研究運用，在1996年，田亞南等人設(shè)計出了引物，并運用定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測，主要是針對于柑橘黃龍病進(jìn)行檢測，檢測

43、對象是中國以及泰國的柑橘黃龍病。根據(jù)檢測結(jié)果可知，蟲媒柑橘木虱體內(nèi)含有比較多的病原，除此之外還有長春花體內(nèi)病原含量多，柑橘中則含有比較少的病原含量。在2000年，Harakava等人也針對于此進(jìn)行了研究，研究具有一定的開創(chuàng)性，具體針對于柑橘黃龍病巢式PCR檢測方法進(jìn)行實驗研究，實驗結(jié)果表明，巢式PCR檢驗和常規(guī)PCR相比較而言具有更高的靈敏度。在2002年，還有更多的科研工作者進(jìn)行了研究，例如李韜、柯沖，他們針對于此也做出了一定的研究，主要針對于柑橘木虱及九里香上黃龍病帶菌率，并運用巢式PCR檢測方法進(jìn)行檢測，根據(jù)研究結(jié)果顯示，巢式PCRI比常規(guī)PCR具有更高的靈敏度。3.2 擬采用的防治措施

44、3.2.1 化學(xué)防治關(guān)于黃龍病的化學(xué)防治方法，現(xiàn)階段的研究水平并沒有研制出作用性較強的化學(xué)試劑。1970年至1980年，國內(nèi)外的研究人員陸續(xù)嘗試性的使用抗生素來做實驗，試圖找到抑制柑橘黃龍病的方法，經(jīng)過一系列的研究發(fā)現(xiàn)，抗生素能夠在一定程度上對柑橘黃龍病的發(fā)生起到抑制作用，但是作用很有限。國內(nèi)的廣西柑橘黃龍病研究團(tuán)隊經(jīng)過多次實驗成功的驗證出四環(huán)素對抑制柑橘黃龍病的發(fā)展有一定的效果，證明了四環(huán)素可以抑制柑橘黃龍病的發(fā)生，并且經(jīng)過對照實驗發(fā)現(xiàn)，采用樹干打洞灌注法能使抗生素發(fā)揮出最大作用20。此外,趙學(xué)源的研究實驗表明，病株接穗再經(jīng)四環(huán)素處理后，被嫁接的植株不會感染黃龍病，用青霉素處理后的植株的發(fā)病

45、率也有所降低21。羅志達(dá)等研究人員發(fā)現(xiàn)，使用加熱后的四環(huán)素對病樹的芽條進(jìn)行再處理，相比于常溫的四環(huán)素又或者是單純的熱水處理，這樣的方法可以達(dá)到更好的治愈目的22?？股氐姆椒m有奇效，但是治標(biāo)不治本，僅僅是暫時壓制了黃龍病的發(fā)展，最晚三年后病情會復(fù)發(fā)，因此在使用抗生素對柑橘黃龍病進(jìn)行治療的方法上仍然需要科研人員投入更多的努力。3.2.2 莖尖微芽嫁接（STG）脫毒保證幼苗百分百無毒，才是最佳防治黃龍病的辦法。柑橘莖尖微芽嫁接法（STG）經(jīng)過實際檢測證明其具有很強的實用性，柑橘莖尖微芽嫁接法實質(zhì)是將柑橘幼苗的莖尖分生組織嫁接在試管中，然后經(jīng)脫毒培養(yǎng)的砧木上獲取整棵植株。自從該技術(shù)問世以來，至今已

46、經(jīng)是柑橘產(chǎn)區(qū)使用次數(shù)最多的方法，同時STG技術(shù)也是培養(yǎng)柑橘無毒幼苗的核心方法，在育種繁育中也起到了很重要的作用23。此外，STG法也妥善解決了柑橘莖尖培養(yǎng)不易生根的困難，大幅度縮小了柑橘無毒幼苗童期，并且經(jīng)此辦法得到的幼苗沒有產(chǎn)生惡性變異的情況，實用性很強。Navarro在西班牙使用這個方法成功培育出不具備毒性的柑橘母本，并以此為前提進(jìn)行廣泛的推廣運用，實現(xiàn)了柑橘全面工業(yè)化生產(chǎn)，而且此類柑橘的產(chǎn)量和質(zhì)量都得到了實質(zhì)性的提升24。1980年，國內(nèi)的研究員著手柑橘莖尖嫁接技術(shù)的探究，蔣元暉等人更是成功利用這個辦法得到了沒有柑橘黃龍病的植株25;陳駉從脫除病原這一方面進(jìn)行研究，經(jīng)過試驗也成功得到了無

47、病柑橘植株26。隨后的姜玲等人在前人基礎(chǔ)上調(diào)整和改善，成功增加了植株的成活率27。3.2.3 利用砧木的耐病性防治柑橘黃龍病嫁接是柑橘進(jìn)行繁殖進(jìn)行的主要方法，而砧木作為樹本的根基，它對柑橘的病狀研究以及育種研究起到很重要的作用28。通過Albrecht等人的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，砧木的品種并不會對柑橘黃龍病的發(fā)生造成影響，但是會影響到柑橘黃龍病的發(fā)病程度29。在1960年，國內(nèi)研究人員嘗試使用九里香來當(dāng)做柑橘砧木，試圖對柑橘黃龍病進(jìn)行防治，但是實驗并不成功，主因是親緣關(guān)系過遠(yuǎn)，柑橘樹的成活率不足以達(dá)到預(yù)期目標(biāo)30; 隨后Shinozaki 等研究人員依然想從九里香下手，它們采用細(xì)胞融合的方法，獲取了兩

48、者的體細(xì)胞從而取得雜種體細(xì)胞，這樣的雜種細(xì)胞確實擁有耐黃龍病的生物特性，但是又因其生長周期過長且育出的小苗多畸形，這種方法以失敗結(jié)尾31。九里香的優(yōu)點在于其具有抵抗柑橘黃龍病的生物特性，而九里香的缺點在于其生理生化結(jié)構(gòu)和遺傳特性與柑橘大不相同，所以使用九里香作為砧木的可能性和實用性還有待進(jìn)一步的考證。國外對培育出對柑橘黃龍病具有耐性的砧木品種這一方面一直很是關(guān)注，而且已經(jīng)取得了一些進(jìn)展，培育出來的雜交品種通過實際驗證確實對柑橘黃龍病具有一定的抗病性26.33。3.2.4 從病源地和運輸途徑控制柑橘黃龍病經(jīng)過實踐檢驗后發(fā)現(xiàn)對黃龍病防治的最有效的方法是去根挖除和清剪病枝。從根源上減少了黃龍病發(fā)病的

49、可能，同時也限制了蟲媒木虱的繁育，從這點而言，在進(jìn)行新產(chǎn)區(qū)的開辟時一定要注意不能流入帶病植株。在運輸途徑這一方面，最容易出現(xiàn)情況的就是異地引種的問題，只有持有合法的植物檢疫部門的證書，反復(fù)確認(rèn)苗種確實沒有黃龍病時才能放行。此外，幼苗的生產(chǎn)和銷售也要完全符合制度規(guī)定，一切違規(guī)的幼苗一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，必須燒毀處理。3.2.5 熱處理經(jīng)過前人的研究發(fā)現(xiàn)，柑橘黃龍病的病原細(xì)菌對熱度很是敏感，在1960 年，林孔湘的研究團(tuán)隊在熱處理這一方面進(jìn)行了相關(guān)研究，研究結(jié)果顯示，在4851的高溫環(huán)境下對柑橘的枝條或幼苗進(jìn)行45至60min的處理，可以有效滅殺柑橘黃龍病的病原，并且可以在一定程度上促進(jìn)柑橘組織的生長發(fā)育34

50、。后來隨后，國內(nèi)的福建農(nóng)科院采用覆蓋薄膜法對染有柑橘黃龍病的病樹進(jìn)行熱處理，實驗結(jié)果顯示，熱處理對染有黃龍病的病樹也同樣有著作用效果，對減緩病情和抑制病害的擴(kuò)散有一定的積極作用。熱處理法雖有奇效但也有缺點，考慮到成本，這種方法并不具備實用性，而且熱處理對幼苗有消極作用，幼苗成活率并不高，很難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)35-38?？偟膩碇v，近階段經(jīng)過國內(nèi)相關(guān)人員的努力研究，在對柑橘黃龍病防治這一領(lǐng)域上已經(jīng)取得了突破性的進(jìn)展39，總結(jié)為以下幾點：一是從根源上杜絕發(fā)病的可能性，挑選無病區(qū)域進(jìn)行大規(guī)模繁育種植。二是合理使用脫菌苗，以健康幼苗為基礎(chǔ)進(jìn)行后代的繁育。三是對發(fā)病植株完全挖根處理，不能因經(jīng)濟(jì)損失而心存僥

51、幸。四是在容易發(fā)病的季節(jié)預(yù)先使用化學(xué)藥劑對嫩芽施用進(jìn)行防治，在各個抽梢期進(jìn)行最少兩次、最多三次噴藥處理。五是增大有機(jī)肥料的投入量，并進(jìn)行合理的搭配。此外，黃龍病的防治也離不開相關(guān)政府部門和農(nóng)業(yè)部門的協(xié)助，加大宣傳力度，增加果農(nóng)預(yù)防黃龍病熱情，積極參與防治內(nèi)容，政府理應(yīng)為果農(nóng)實施惠農(nóng)政策，鼓勵農(nóng)戶購買無病幼苗，減輕農(nóng)戶的經(jīng)濟(jì)壓力，從根源上防止柑橘黃龍病發(fā)生的可能性。第四章 實案研究4.1 調(diào)查對象概況 2002年通道縣進(jìn)行柑橘黃龍病調(diào)查工作時，調(diào)查的范圍主要是東江、孟龍、老寨、新江、三盤、城旋6這個村莊，數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示這6個村皆有柑橘黃龍病疫情的發(fā)生。6個行政村共有28個村民小組、740戶、317

52、0人。有柑桔面積1742畝，其中夏橙873畝、椪柑764畝、蜜桔105畝，戶平有柑桔面積2.3畝，柑桔生產(chǎn)收入已經(jīng)成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的主要經(jīng)濟(jì)來源。柑桔黃龍病發(fā)生面積373.5畝，柑橘黃龍病的出現(xiàn)不僅給果農(nóng)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，甚至對產(chǎn)區(qū)范圍內(nèi)的城鎮(zhèn)的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)能都造成了一定的影響。最近幾年，國內(nèi)對綠色環(huán)保等方面愈發(fā)的重視，追求的本質(zhì)是實現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，加深了對預(yù)防工作的認(rèn)識程度，對防控工作有了較大的人力和物力的投入，并且獲取了不錯的實際效果，牢牢的把柑橘黃龍病的發(fā)病范圍限制在了原發(fā)區(qū)域，有效阻止了病情的進(jìn)一步擴(kuò)散和蔓延，完成了保護(hù)未發(fā)病區(qū)的戰(zhàn)略目標(biāo)，消除了潛在的經(jīng)濟(jì)隱患。4.1.1往年柑橘黃龍病防控工

53、作開展情況（一）加強組織領(lǐng)導(dǎo)，落實保障措施1、加強組織領(lǐng)導(dǎo)在通道縣重大植物有害生物疫情控防領(lǐng)導(dǎo)小組統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)和指揮下開展防控工作，進(jìn)一步加強柑桔黃龍病防控工作的組織領(lǐng)導(dǎo)。實行行政領(lǐng)導(dǎo)負(fù)責(zé)制和技術(shù)工作負(fù)責(zé)制，層層建立崗位責(zé)任制，使領(lǐng)導(dǎo)工作、部門工作相結(jié)合?？h、鄉(xiāng)、村工作層層分解，落實到組、農(nóng)戶桔園，全方位的監(jiān)督管理堅決令黃龍病的防護(hù)措施落到實處。由坪陽鄉(xiāng)柑桔黃龍病監(jiān)測控防工作實施小組具體負(fù)責(zé)組織防控工作的實施。2、做好技術(shù)保障。由專業(yè)技術(shù)人員組成技術(shù)顧問，負(fù)責(zé)解決柑橘黃龍病的相關(guān)技術(shù)問題。辦公室負(fù)責(zé)各股站的工作統(tǒng)一協(xié)調(diào)，植保植檢站抓防控技術(shù)措施落實，經(jīng)作站負(fù)責(zé)改種的技術(shù)指導(dǎo)，執(zhí)法大隊負(fù)責(zé)防控農(nóng)資的

54、監(jiān)督檢查，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)技站參與實施。3、積極籌措資金。柑桔黃龍病重大疫情監(jiān)測控防是一項系統(tǒng)工程，需要一定的資金保障?？h農(nóng)業(yè)局積極向縣委、縣政府領(lǐng)導(dǎo)做好工作匯報，得到縣領(lǐng)導(dǎo)的高度重視，并得到縣財政50萬元的防控資金支持，疫情阻截、公共場所的無害化處理和疫情控防所需經(jīng)費得到了落實，確保了通道縣柑桔黃龍病控防工作的順利開展。（二）制定了柑桔黃龍病控防工作實施方案根據(jù)省植保植檢站柑桔黃龍病重大疫情監(jiān)測控防工作部署，通道縣屬全省柑桔黃龍病重點控防區(qū)域縣。增強對柑橘黃龍病的預(yù)防措施和檢測強度，掌握控制病情的主動權(quán)，保證柑橘產(chǎn)業(yè)的良好運行，依據(jù)實際情況制定出符合實情的柑橘黃龍病的預(yù)防方案，核實柑橘黃龍病預(yù)防工作

55、的核心思想，確定工作內(nèi)容和預(yù)期目標(biāo)，從實際上行動，完成預(yù)防任務(wù)。（三）實事求是，著手開始柑橘黃龍病的預(yù)防和防控工作1、加強植物檢疫工作，抓好疫區(qū)病源封鎖不允許任何組織或者個人采購或者培育攜菌柑橘幼苗，流入產(chǎn)區(qū)的柑橘幼苗和用于育種的繁殖材料必須經(jīng)過一系列的檢疫流程方可入園。2、抓好柑桔黃龍病的監(jiān)測預(yù)警從每年4月上旬開始，分別在坪陽鄉(xiāng)東江村、新江村和甘溪鄉(xiāng)甘溪村、隴城鎮(zhèn)路塘村設(shè)立了4個疫情監(jiān)測點。每個監(jiān)測點都需要派遣專人值守，以15天為一個周期，每一個周期都需要做一次田間調(diào)查，用以監(jiān)測疫情發(fā)生動態(tài)。根據(jù)4個監(jiān)測點的監(jiān)測調(diào)查，除東江片外未發(fā)現(xiàn)新的柑桔黃龍病疫情。3、認(rèn)真開展疫情普查工作2012年4月

56、20日農(nóng)業(yè)局組織召開了全縣鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)技員會議，集中進(jìn)行了技術(shù)培訓(xùn)，統(tǒng)一安排了柑桔黃龍病的普查工作。對全縣21個鄉(xiāng)鎮(zhèn)開展了普查工作，重點是和坪陽鄉(xiāng)接壤的甘溪、隴城兩個鄉(xiāng)鎮(zhèn)。全縣共計普查面積22085畝，除坪陽東江片外，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)均未發(fā)現(xiàn)有柑桔黃龍病疫情發(fā)生。4、認(rèn)真開展宣傳和培訓(xùn)工作，提高群眾控防水平柑桔黃龍病在通道縣的坪陽鄉(xiāng)已發(fā)生危害多年，但是很多柑桔種植戶還是不了解。為此，采取培訓(xùn)、張貼標(biāo)語、印發(fā)技術(shù)資料等多種形式開展宣傳工作，使廣大桔農(nóng)認(rèn)識到柑桔黃龍病發(fā)生和危害的嚴(yán)重性以及控防工作的緊迫性和重要性。在坪陽東江開展培訓(xùn)5期，培訓(xùn)人數(shù)1000人次，懸掛橫幅6條，張貼宣傳標(biāo)語40條，印發(fā)技術(shù)資料200

57、0余份。5、積極做好柑桔黃龍病的控害防治工作。（1）開展柑桔木虱防治，消滅傳毒媒介。每年組織農(nóng)戶開展柑橘木虱防治活動多達(dá)十次。其中春防2次，夏防3次，秋防3次，冬防2次。免費提供吡蟲啉、啶蟲脒、阿維菌素等價值13萬多元的對口農(nóng)藥防治柑桔木虱13500畝次。（2）砍伐病樹。組織桔農(nóng)及時進(jìn)行清園，砍伐燒毀柑桔黃龍病病樹，并對病樹蔸進(jìn)行藥劑處理，砍伐病樹每株給予20元補貼，補貼直接打入農(nóng)戶的“良種補貼一卡通”存折中。累計砍伐病樹5000余株，共計發(fā)放補貼10余萬元到桔農(nóng)手中。（3）抓好柑桔黃龍病檢疫堵截。一是設(shè)點堵截。在馬龍邊境檢疫監(jiān)督檢查站設(shè)立柑桔黃龍病檢疫堵截點，凡從疫區(qū)運出的果苗都必須進(jìn)行檢疫

58、檢查，發(fā)現(xiàn)問題及時進(jìn)行查封，防止疫情擴(kuò)散。通過檢查未發(fā)現(xiàn)帶有檢疫對象柑桔黃龍病。二是對2010年4月份未經(jīng)檢疫從廣西融安縣調(diào)入的金桔苗木14360株繼續(xù)進(jìn)行疫情監(jiān)測。其中溪口鎮(zhèn)坪頭村8500株，北麻村400株，馬龍鄉(xiāng)瑤團(tuán)村3500株，下鄉(xiāng)鄉(xiāng)城坪村1000株，雙江鎮(zhèn)芋頭村860株，播陽鎮(zhèn)上寨村100株。（四）存在的不足通道縣柑桔黃龍病經(jīng)過認(rèn)真控防，取得了一定的成效，但也存在一些問題。1、 檢疫意識不強。部分群眾對植物檢疫法律法的認(rèn)識不到位，不了解植物檢疫的價值和重要程度，未經(jīng)檢疫隨意調(diào)運幼苗和成品柑橘的現(xiàn)象常有發(fā)生。2、 控防工作不到位。部分群眾對柑桔黃龍病控防工作意識不強，特別是近幾年受柑桔價格