NG-MAST在淋球菌耐藥監(jiān)測工作中的應(yīng)用 - 中國疾病預(yù)防控制中心 ...[課資內(nèi)容]

1、淋球菌耐藥機制的初步研究以及多抗原測序分型（NG-MAST）在耐藥監(jiān)測工作中的應(yīng)用,-中國CDC性病控制中心 參比實驗室 陳紹椿,1,課資分享,研究背景 耐藥機制的初步研究 NG-MAST在淋球菌耐藥監(jiān)測工作中的應(yīng)用研究,概 要,2,課資分享,高發(fā)病率，且在不斷增長 診斷、報病的不足導(dǎo)致發(fā)病率的低估 嚴重危害健康：不孕不育，異位妊娠，增加HIV感染幾率 抗生素耐藥！,淋病全球性公共衛(wèi)生問題,World Health Organization (WHO). Global incidence and prevalence of selected curable sexually transmitt

2、ed infections2008. Geneva, Switzerland; 2012.,3,課資分享,Penicillins Tetracyclines Quinolones (Ciprofloxacin) Macrolides (Azithromycin) Spectinomycin Cephalosporins (Ceftriaxone,cefixime),淋病的治療藥物,4,課資分享,頭孢菌素敏感性下降和臨床治療失敗病例的出現(xiàn),World Health Organization (WHO). Antimicrobial resistance global report on surv

3、eillance. Geneva, Switzerland; 2014.,5,課資分享,口服類Cefixime治療失敗病例： Japan,1 Norway,2 United Kingdom,3 Austria,4 France,5 Canada,6 and South Africa.7 頭孢曲松治療淋菌性咽炎失敗病例：Japan,8,9 Australia,10-12 Sweden,13 and Slovenia14,治療失敗案例匯總,1. Yokoi S et al. Emerg Infect Dis 2007; 13: 1275-1277. 2. Unemo M et al. Euro S

4、urveill 2010; 15. 3. Ison CA et al. Euro Surveill 2011; 16. 4. Unemo M et al. Euro Surveill 2011; 16: pii= 19998. 5. Unemo M et al. Antimicrobial Agents Chemother 2012; 56: 1273-1280. 6. Allen VG et al. JAMA 2013; 309: 163-170. 7. Lewis DA et al. J Antimicrob Chemother 2013; 68: 1267-1270. 8. Ohnish

5、i M et al. Emerg Infect Dis 2011; 17: 148-149.,9. Ohnishi M et al. Antimicrob Agents Chemother 2011; 55: 3538-3545. 10. Tapsall J et al. J Med Microbiol 2009; 58: 683-687. 11. Chen MY et al. J Antimicrob Chemother 2013; 68: 1445-1447. 12. Read PJ et al. Sex Health 2013; 10: 460-462. 13. Unemo M et a

6、l. July 2010. Euro Surveill 2011; 16. 14. Unemo M et al. Euro Surveill 2012; 17. 15. Camara J et al. J Antimicrob Chemother 2012; 67: 1858-1860.,6,課資分享,超級淋球菌的出現(xiàn),第一株高度耐頭孢曲松的“超級淋球菌”H041： XDR, MLST7363, NG-MAST ST4220 咽部感染，1g頭孢曲松治療失敗,MIC 1-2 mg/L 在法國和西班牙也發(fā)現(xiàn)了對頭孢菌素高度耐藥的淋球菌MLST1901 NG-MAST ST1407,7,課資分享,U

7、RGENT!,8,課資分享,應(yīng)對策略,9,課資分享,1.深入了解耐藥機制 2.加強淋球菌耐藥監(jiān)測： （1）加強已有淋球菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)絡(luò) （2）分子流行病學(xué)方法應(yīng)用于淋球菌耐藥監(jiān)測 （3）淋球菌臨床治療失敗病例的篩查,中國的應(yīng)對策略,10,課資分享,耐藥機制的初步研究,11,課資分享,Unemo M, Nicholas RA. Emergence of multidrug-resistant, extensively drug-resistant and untreatable gonorrhea. Future Microbiol 2012; 7: 1401-1422.,淋球菌耐藥的可能機制,1

8、2,課資分享,頭孢低敏耐藥菌株（MIC0.25g/ml）的特征,表1. MIC0.25 g/ml 菌株相關(guān)基因特征,13,課資分享,頭孢低敏或耐藥相關(guān)基因突變篩查,CROS, isolates with susceptibility to ceftriaxone; CROI/R, isolates with decreased susceptibility or resistance to ceftriaxone; A, alanine; WT, wild-type; T, threonine; V, valine; G, glycine; S, serine; P, proline; L,

9、leucine; D, aspartic acid; I, isoleucine; H, histidine; Y, tyrosine; K, lysine; N, asparagine; *P0.05 for t-test (comparison between two groups) , ANOVA (comparison among three or more groups) or chi-square test.,表2. 所有菌株根據(jù)不同基因突變分組后MIC均值比較及低敏耐藥與特定基因相關(guān)性研究,14,課資分享,NG-MAST在淋球菌耐藥監(jiān)測工作中的應(yīng)用,15,課資分享,1、追蹤特定菌

10、株的傳播（如耐藥菌株） 2、追蹤特定人群中菌株的傳播（如MSM人群) 3、監(jiān)測菌株的爆發(fā)流行 4、確定治療失敗病例和重復(fù)感染病例,NG-MAST分型的意義,16,課資分享,一、分型表現(xiàn)： 1、區(qū)分度 2、結(jié)果可比性 二、操作的可行性： 1、耗時 2、費用 3、操作難易程度：硬件+軟件,NG-MAST分型的優(yōu)點,17,課資分享,NG-MAST分型過程,臨床分離株,DNA提取,porB基因PCR,porB基因測序,根據(jù)標準序列選取490bp,NG-MAST網(wǎng)站獲取等位基因號,tbpB基因PCR,tbpB基因測序,根據(jù)標準序列選取390bp,NG-MAST網(wǎng)站獲取等位基因號,獲取ST型別,18,課資

11、分享,MIC值與NG-MAST型別的對應(yīng)關(guān)系,19,表3. 某監(jiān)測點不同MIC值菌株的NG-MAST型別分布,19,課資分享,全國不同監(jiān)測點2012年度NG-MAST型別分布,表4. 全國不同監(jiān)測點NG-MAST優(yōu)勢型別分布,20,課資分享,porB-908, tbpB-110: ST1407 同一監(jiān)測點兩例，都為男性 涂片陽性，培養(yǎng)陽性 具有Mosaic penA結(jié)構(gòu)，penA A501-WT, G542-WT 頭孢曲松MIC-0.016, MIC-0.060，PPNG，環(huán)丙沙星耐藥，大觀霉素敏感,ST1407菌株的發(fā)現(xiàn),21,課資分享,總 結(jié),1. 淋球菌頭孢低敏耐藥菌株出現(xiàn)，需要進行跟蹤監(jiān)測。 2.頭孢低敏耐藥與以下氨基酸替換有關(guān)：A102D altera