病理制片過程

1、目前能做病理組織切片的地方很多，但要數(shù)上海舜田生物做出的病 理切片相對質(zhì)量上比較好， 該公司有 1 位專業(yè)從事病理實驗的老師及相關實驗技 術人員，積累了豐富的實驗經(jīng)驗，所作出的切片及染色效果相當不錯。1 正確處理標本的重要性固定正確的固定是病理制片技術中最重要的一步， 這個步驟會影響到后續(xù)的每 個環(huán)節(jié)。如果固定不充分，樣品的質(zhì)量就會有欠缺。組織必須在 選定的固定劑 中浸泡足夠長的時間， 使大分子保持固有形態(tài)。 正確的固定可以防止樣品在脫水 劑中發(fā)生變性以及后期處理步驟對于樣品造 成的損害。固定不充分可能增加切 片的困難，表現(xiàn)出過度收縮，并且會導致細胞核染色不足和 / 或胞核呈現(xiàn)“泡沫” 狀。巨

2、檢樣品需要修切成薄片， 并盡可能做到均勻， 否則很難在切片機上切出好的 片子。如果樣品太厚以至于無法滲透充分， 則必須經(jīng)過再次處理 才能進行切片。 這樣會影響樣品的質(zhì)量， 更浪費時間。 從最初的步驟開始就正確處理會使后面的 工作更簡單，因此在大體取材的時候多花 些功夫會為以后的步驟節(jié)省大量時間 和精力。備注：包埋盒塞滿組織且組織過厚就無法很好的固定， 后續(xù)的處理步驟也會效果 欠佳。脫鈣為了后期進行石蠟包埋切片， 骨組織需要進行脫鈣， 鈣必須被完全去除才 能確保切片的完整，并且可以防止刀具的損壞。在用酸溶液進行 脫鈣之前，骨 組織必須經(jīng)過徹底的固定， 這樣其中的軟組織成分才能夠被保護， 且防止細

3、胞核 在酸的作用下被破壞，比如蛋白質(zhì)水解作用 。組織處理（脫水）組織經(jīng)過一系列經(jīng)典的處理過程， 是使原本親水性的組織最終可以用疏水性的介質(zhì)進行包埋，比如石蠟，火棉膠和絕大多數(shù)樹酯。 備注：樣品無論是處理不充分還是處理過度，都可能導致切片效果不理想。脫水機 旋轉(zhuǎn)升降式脫水機目前仍有一些病理工作者使用，但是全自動全封閉負壓 /壓力式脫水機逐漸占據(jù)主導地位。后者更有利于保護工作環(huán)境 ，更確保組織和 試劑的充分作用， 可以更有效縮短脫水時間。 一些更先進的全自動全封閉脫水機 還可以自動記錄 試劑的使用情況，并對試 劑進行智能監(jiān)控和更 換。有一點非常重要，就是處理過度對組織造成破壞絕對不亞于處理不充分造

4、成 的后果。多種因素，比如試劑的種類，處理步驟的多寡，處理 時間的長短，試 劑的清潔度以及加熱、 真空和/ 或壓力的使用都會影響具體某個樣品的處理程度。 注：不同來源和不同大小的樣品最好不要共用同一個處理程序， 這樣可以避免其 中部分樣品處理過度，而部分處理還不充分。處理步驟：（一）脫水：脫水的關鍵就是將樣品置于脫水試劑中足夠長的時間，其中的游離水分子被除 去，但是脫水時間也不宜過長，否則結合水分子也會被除去 ，會導致結構的變 化。而脫水時間過短致使水分還殘留在樣品中， 就會導致包埋介質(zhì)無法很好滲透 入樣品。但是，脫水過度會導致樣品的 皺縮變脆。從過度脫水的組織塊上切到 的切片，一旦放入水中，

5、切片就會膨脹最后破碎。如果將整個組織塊浸入水中， 則組織的表面會因 為水化而膨脹，這樣再進行切片，雖然片子的性狀會有所改 善，但是形態(tài)學會發(fā)生改變， 而且染色后會發(fā)生色彩偏淡， 對比度較弱。 最常 用 的脫水劑是乙醇和變性酒精。 甲基酒精有毒性， 會破壞肝臟中的甲醛， 因此不太 單獨使用。異丙醇是乙醇最佳替代物，常規(guī)在微波處理 中使用。丁醇，劇毒， 適用于較慢的組織處理過程，而且多用在植物和動物組織。無水酒精往往會含有水分， 因此最好能檢測一下試劑的純度。 可以用液體 比重計來測定，也可以將幾毫升酒精滴入幾毫升二甲苯或甲苯， 如果混合液出 現(xiàn)混濁就表示酒精中至少含有 2的水分。（二）透明： 用

6、來進行透明的試劑和脫水劑以及包埋介質(zhì)必須非常容易混合。 如果組織在透明 劑中時間不夠， 那么組織就會發(fā)軟甚至呈糊狀。 略微延長 時間并/ 或定期更換新 鮮溶液可以避免透明不足的問題。最常用的透明試劑如下：二甲苯：目前仍被廣泛使用的一種芳香烴類化合物，能夠快速替換組織中的乙醇。 在正確的脫水步驟后，芳香烴能夠改變樣品的折射率并使組織變 透明。當有水 分存在的時候，二甲苯會變混濁， 這時必須更換。作用時間過長會導致組織變硬， 尤其一些纖維、肌肉中樞神經(jīng)系統(tǒng)或軟骨 組織更容易變硬。如果發(fā)現(xiàn)組織在完 成處理后變得太硬或發(fā)脆，請減少透明的時間或者尋找二甲苯替代物。請注意， 微波處理過程不需要 使用透明劑

7、，可以降低組織處理過度的風險。 二甲苯替代物：苯烯試劑或者短鏈脂肪酸碳氫化合物 （烷烴） 也得到了快速普及。 苯烯試 劑不會像二甲苯那樣使組織發(fā)生硬化，但是前者更容易污染石蠟 ，因此石蠟需 要更頻繁的更換。 脂肪族化合物更容易滲透入組織， 相對二甲苯而言， 更容易去 除組織中的脂肪。然而，這類化合物不能接 觸到水分，因此在比較潮濕的地區(qū) 很難使用。 若放棄二甲苯而使用其替代物， 則重新調(diào)整處理的時間和溶液循環(huán)使 用次數(shù)就顯得尤為重要 。 其他透明試劑例如苯，甲苯，氯仿和香精油的應用并不多見。（三）浸蠟（石蠟滲透）： 石蠟是石油裂解物的提取物，屬于惰性的碳氫化合物的混合物。在脫水機中使用石蠟，溫

8、度最好設定在熔點以上 2 4， 在最后一步石蠟滲透完成后， 脫水缸必須用透明劑徹底清洗， 不能有任何石蠟的殘留。 負壓可以增強滲透的效果，但是在處理活檢樣本的 時候，負壓和加熱都必須慎用。另外還需要注意，即便 有些脫水機增加到了 4 個蠟缸，總的滲透時間不能延長。 在確保滲透效果的基礎 上 ，組織在石蠟中停留的時間越短越好。石蠟包埋包埋是將正確定位的組織包裹在一種介質(zhì)中 （此處以石蠟為例） 然后固化。 每個實驗室都會創(chuàng)建一套特有的處理方法，這就決定了樣品在 處理后的硬度。 用來包埋的石蠟必須能夠和樣品的硬度相匹配， 這樣才能確保進行切片的蠟塊質(zhì) 地盡可能均勻。另外有兩點對于切片也至關重要： 溫

9、度和樣品的定位。 組織包埋機已被廣 泛使用，機器最大的優(yōu)點就是能夠在每個步驟上都達到確的溫控 。石蠟熔化并 保持熔化狀態(tài)的這個溫度非常重要， 必須確保一些添加劑完全溶解入石蠟。 模具， 樣品和石蠟之間的溫差必須控制在幾度以 內(nèi)，這樣才能確保石蠟充分包圍并支 撐樣品。已經(jīng)包埋的模具最好放置在包埋機的冷臺上而不是冰塊上， 這樣可以使 石蠟固化且不產(chǎn)生裂 縫。樣品必須進行正確定位， 從而保證正確的面被切到， 但是對于樣品和刀刃 接觸的方式必須要經(jīng)過考慮。對于不同類型的樣品，有很多種方 法可供參考， 用來正確定位樣品。提高包埋效果的技巧 有些石蠟特別適合用于滲透，有些更適合用于包埋，而有些都適合?？梢?/p>

10、向供應商查詢。石蠟應當在高于其熔點2C至4C的溫度下進行熔化和儲存，這樣其中的 添加劑才能溶解入液體。 如果溫度太低， 其中一些較重的添加劑， 比如聚合物就 會沉在底部 ，然后最先流出。熔化的石蠟在流出以前最好先進行攪拌。設定包埋機的參數(shù)，確保石蠟流出口過夜的時候處于保溫狀態(tài)。經(jīng)常清空并 清洗流出口。始終確保流出蠟缸的石蠟是過濾后的。和以往的觀點相反，將石蠟設定在高溫（大約 85 C）持續(xù)數(shù)星期，反而是 無害的。盡管石蠟中添加了穩(wěn)定劑，在氧化作用下，石蠟仍然會變質(zhì)。最初的征兆就 是顏色轉(zhuǎn)變?yōu)椴蔹S色直到黃色。隨后可能有異味產(chǎn)生。選擇尺寸恰當?shù)哪＞?，確保樣品的四周都被石蠟包圍，樣品置于中心。用壓

11、平裝置或者彎頭鑷子的背部輕柔地將樣品展平（易碎樣品可能 會被壓碎）。不 要讓樣品在模具中撐太滿。大或硬的樣品必須按照一定角度放置在模具中。如果同一個樣品包含多種不 同密度的成分，則包埋的時候要確保樣品最硬的部分必須最后 接觸到鋒利的刀 刃。皮膚往往帶有毛發(fā)，則包埋的時候必須保證毛發(fā)最后才被切到。動物樣本中，如果組織的來源不同但是切片的性狀相似則可以包埋在同一個 蠟塊中，比如肝臟和脾臟，腦組織和脊髓。脫鈣的骨組織必須包埋在“硬”石蠟中，樣品最窄的一端必須位于蠟塊的底邊，從而在切片的時候，最先接觸到刀刃。（見下圖）為了切片的穩(wěn)定性，模具中必須添加足夠的石蠟，確保包埋盒至少充盈一半。如果石蠟漏出，那

12、么在蠟塊完全固化之前，必須添加石蠟。石蠟添加劑： 絕大多數(shù)市售的用于組織學的石蠟是含有添加劑的，目的在于改善切片的質(zhì)量，改變硬度或者有利于連片。常見的添加劑如下： 蜂蠟降低結晶的大小，增加粘度和附著力。 橡膠降低脆性，增加粘度，有助于連片 其他石蠟降低結晶大小，使質(zhì)地更平滑，可以在不改變?nèi)埸c的前提下提高硬度。塑料增加硬度，對硬組織起到很好的支撐作用，得到更薄的切片DMSQ二甲基亞砜）增強滲透（警告！腐蝕性）熔點和凝固點： 絕大多數(shù)用于組織學的石蠟是多種石蠟的混合物，這樣可以確保的硬度和指定的凝固點。“凝固點”是制造商使用的術語，其實相當于“ 熔點”。這個溫 度是指在石蠟中插入小木棒后， 石蠟開

13、始在木棒上凝固的那個溫度。 凝固點和熔點溫度往往是同一個溫度或者在兩個溫度 之間。 市售石蠟的特性往往根據(jù)其添加物和熔點的不同而有一定差異。56C 到58C這個范圍被常規(guī)實驗室中普遍應用。 較低熔點的石蠟（50 C到53 C）往 往有其特殊的應用 一般情況，低熔點的石蠟往往比較柔軟，因此更適合包埋較軟的組織。進行 較薄的切片比較困難，但是很容易連片。（可以選購質(zhì)地較硬 但是熔點較低的 石蠟。）相反的，高熔點的石蠟一般比較硬。對于質(zhì)地較硬的樣品，這樣的石蠟有更 好的支撐效果，而且很容易得到薄切片，但是連片就比較困難 了。樣品夾具在切片以前，完成包埋的蠟塊必須固定到切片機的樣品夾具上。夾持力必須

14、確保樣品能被完全固定，因此蠟塊往往會附著在一個支持物上 ，比如塑料包埋 框或者環(huán)行樣品夾。 在不使石蠟變形且避免造成切片形狀不規(guī)則的前提下， 用最 大的力量夾持支撐物。請注意，石蠟塊必 須牢固附著于支撐物（例如，在包埋 盒中必須有足夠的石蠟充填），并且支撐物的背后必須接觸實心物體的表面。塑料最常用的支撐物就是簡單并獨立使用的一次性包埋盒。與市售的模具配套使用，蠟塊的平面會很平整，且邊緣能在 X和丫軸向上保持平行。用相同方法包埋的一批組織塊不需要對表面進行調(diào)節(jié)或僅需要很小的調(diào)節(jié)。環(huán)行模具也偶爾會用到，其中必須充填足夠的包埋劑，而且不能夾持太緊。 圓形的支撐物經(jīng)常在塑料包埋時使用。木塊：這是廉價的

15、包埋盒替代物。盡可能使用硬質(zhì)木材（避免使用松軟的松木）并進行切割以適合夾具的形狀。木塊的表面可以開槽，從而增加 黏附力。注意： 木制的支撐物在水中浸泡后會膨脹，導致在樣品夾上固定效果欠佳。金屬： 金屬支撐物在塑料包埋時使用較多。金屬支撐物可以重復使用，但是相對比較貴，在使用時需要進行 X/Y 向的定位調(diào)節(jié)。 而且調(diào)節(jié)這個 平面有一定的難度。如果組織塊附著恰當，這種夾具的穩(wěn)定性非常好。 使用切片機必須遵從最佳的工作秩序，無論使用鋼刀還是一次性刀片，切緣必須鋒利，并且不能有任何缺口或雜質(zhì)附著。2. 切片機及相關附件耗材簡介切片機的類型輪轉(zhuǎn)式：輪轉(zhuǎn)式切片機有一個控制精確進樣的手輪，手輪進行 360的

16、旋轉(zhuǎn)，控制 樣品頭豎直向下經(jīng)過刀刃然后豎直向上回到處于最高點的起始 位置。在到達切 片行程最高點的時候， 樣品頭會按照設定的切片厚度水平向朝前運動， 然后再開 始向下的行程。這類切片機常規(guī)進行石蠟 或塑料包埋樣品的切片。 平推滑動式：平推滑動式切片機是一種水平向運動的切片機， 其刀架固定不動。 樣品位 于刀的下方，進行切片。這種切片機通常用來切特別大或者特別 硬的樣品。 平推雪橇式：平推滑雪橇式切片機是一種水平向運動的切片機， 其樣品頭固定不動。 刀架在樣 品的上方運動，進行切片。一些輕型的切片機可以進行常 規(guī)切片，而重型切片 機可以用來切特別硬或者特別大的樣品。切片機常見的功能回縮功能：無回

17、縮功能：沒有回縮功能的切片機，當樣品頭下降的時候，組織塊就經(jīng)過刀鋒， 隨后沿同一平面上返回到起始位置，然后樣品頭按照指 定的厚度前進重復下進 行下一個動作。有回縮功能：帶回縮功能的切片機，當樣品頭向下移動時和無回縮切片機的動作 完全一樣，但是在樣品頭上升時，樣品頭會離開原來的平面，朝刀刃的反向移動，從而防止樣品表面和刀鋒接觸。這個功能有很大的好處，因為首先可以延長 刀的使用壽命，還可以減少樣品表面 可能的摩擦（從而降低熱膨脹），并且防 止碎屑積聚在的刀刃背面并確保切片的一致性。安全功能：手輪鎖：切片機一般都配備手輪鎖，可以將手輪鎖定于任意位置，防止機器閑置 期間意外觸及手輪，導致人員意外傷害樣

18、或品頭撞擊刀具 。更人性化的切片機 往往還配備第二手輪鎖，手輪把手只能被鎖定于最高點，便于在切片過程中隨時 更換樣品或刀具。刀架護刀器：無論鋼刀刀架還是一次性刀片架， 都應當配有牢固的護刀器，在更 換樣品或機器閑置的時候用戶一定要養(yǎng)成良好習慣， 將護 刀器覆蓋在刀刃上方， 對人員和刀具都是一種保護。好的的護刀器必須能安全地覆蓋刀刃的全長。自動切片機安全性：自動切片機必須有緊急制動裝置，防止在自動操作過程中有 意外發(fā)生。人性化的切片機往往無法一鍵啟動，必須依靠 組合鍵才能使馬達運 轉(zhuǎn)，這樣可以最大限度避免意外啟動造成的人員傷害或機器損壞。操作特點：手動：手動切片機不具備電動切片功能。粗修和切片都

19、必須由操作者手動完成。半自動：半自動切片機往往只有一個驅(qū)動馬達控制進樣，沒有切片馬達。全自動：全自動切片機有兩個驅(qū)動馬達，既能控制粗進樣也能進行切片。刀具分類：重復使用型刀要長時間保持刀刃的鋒利，刀必須在不同的階段進行很好的鍛造以達到恰當?shù)钠胶狻Ｙ|(zhì)地較軟的刀往往刀刃不鋒利，而質(zhì)地很硬的刀比較脆，容易在切 片過程中刀刃崩裂。 經(jīng)過鍛造的刀通常用來切石蠟包埋、 火棉膠包埋、 冰凍和較 軟的工業(yè)樣品。鋒利而無暇的刀刃是獲得一張好切片的基礎。 磨得比較好的刀， 斜面很小， 從側(cè)面觀察，斜邊筆直，不會出現(xiàn)錐形。斜邊上出現(xiàn)錐形會使 刀刃發(fā)生彎曲， 導致刀刃只在某個點上貼近蠟塊，而其余部分相對遠離。所以減小

20、斜面很重要， 否則刀刃更多的區(qū)域就需要進行打磨以避 免刀對樣品的刮擦。刀刃上的擦痕顯 然會影響切片的質(zhì)量。放大 100 倍對刀刃進行觀察，應該看到一道很細的反光， 呈筆直、不間斷的 明亮的細線。 不理想的刀刃看上去是不規(guī)則并有中斷的線條。刀的角度： 刀刃上用來進行切片的區(qū)域是由兩個相交的平面組成， 叫做切 面。在這兩個平面之間形成的夾角叫做斜角，（通常 27-3 2 ），這個角度 通常大于楔角（通常 15- 18）在切片機上進行角度的調(diào)節(jié)： 當?shù)栋惭b到切片機的刀架上時， 必須呈一定 角度，這樣才能在刀刃接觸組織平面的那個小平面和組織塊平面 之間形成一個 間隙。這個角度就是間隙角。 在切片機上都

21、一個數(shù)字刻度表示間隙角的大小， 這 個讀數(shù)在不同的切片機上可能會有差別。更 換了不同的切片刀后，這個數(shù)值可 能需要調(diào)節(jié)。尋找合適角度的方法，最好采取試錯法。刀片的寬度同樣會影響到間隙角。 經(jīng)過多次磨刀后， 刀的寬度會變窄， 為 了和樣品有一個正確的切入點，刀必須被抬高。刀架必須經(jīng)過調(diào) 節(jié)，這樣被磨 過（變窄）的刀的刀鋒必須處在和新（寬的）的刀鋒一樣高低的位置。 不同的剖面：“ B型刀的剖面略向下凹，刀刃處很薄?，F(xiàn)在除了在柔軟的石蠟包埋或者火棉 膠包埋切片中使用外，很少再用到?！癈型刀是一種剖面為楔形的標準刀具， 兩側(cè)面是一個平整的面（剖面為等腰三 角形）。在常規(guī)石蠟切片、 冰凍切片、硬質(zhì)火棉膠

22、和較 軟的工業(yè)樣品切片中使用。“D型刀剖面呈楔形，兩條側(cè)邊不對稱，刀刃非常鋒利。這類刀在較硬組織的 切片時使用，例如塑料包埋樣品或者較硬的工業(yè)樣品。不同的長度：重復使用型切片刀有很多不同的長度。 長度在120mm勺短刀 推薦在冰凍切片時使用，160mn和185mm勺勺刀常規(guī) 應用于輪轉(zhuǎn)式切片機，而更 長的刀通常在平推式滑行切片機或平推雪橇式切片機。 注：所有的刀都應當表面涂抹油脂后存放，以免生銹。一次性刀片一次性刀片， 采用優(yōu)質(zhì)的不銹鋼， 由于其便利性和經(jīng)濟性， 在絕大多數(shù)實 驗室里作為重復使用型刀的替代品。大多數(shù)的切片機都帶有集成 的刀片刀架， 但是一次性刀片也可以插入安裝在標準鋼刀刀架上的

23、刀片夾內(nèi)使用。 寬型和窄型刀片： 一次性刀片通常區(qū)分為寬型和窄型， 這就表明了刀的寬度。 大多數(shù)窄型刀寬度為 1/4英寸（約6mm，厚度為英寸（約0 .23mm）;也有制造商采用厚度為英寸 （約）的規(guī)格。寬型刀大約寬度為 1/2 英寸（約）， 常規(guī)的刀片厚度通常在英 寸（約），重力刀片（硬組織切片專用）厚度可達英寸（約） 。實際的尺寸可 能因為不同的制造商會有很大的差別， 其中可能有些刀片在寬度和厚度上無法適 應刀架。請確保刀片和刀架之間兼容性。無涂層 vs. 帶涂層：一次性刀片的表面可以帶有很薄的鍍層或涂層。 不同制造商可能采用不同 的涂層，但是幾乎所有的涂層中都會含有聚四氟乙烯（ PTFE

24、 ）類聚合物中的一 種，這是一種類似 Teflon 的環(huán)保型涂層。涂層的好處在于可以防止刀刃氧化， 延長刀片的使用壽命并且可以降低 摩擦力從而減少切片壓力。但是如果涂層過 厚也會有壞處， 最初的幾張切片可能卷曲或者打卷， 給人造成刀片“過于鋒利” 的感覺。 當?shù)?片切過數(shù)張片子后， 涂層被磨去部分， 則卷曲的現(xiàn)象會有所改善。 在一些物體的表面摩擦刀片這種方法不是很值得推薦。有時候，降低涂 層所造 成的摩擦反而會導致連片的困難，切片很容易互相分開。無涂層的寬型或窄型刀片和有涂層刀片除了表面缺少保護性涂層， 通常是 一樣的，前者往往涂抹優(yōu)質(zhì)的油。這種無涂層刀片有時也被稱作 “經(jīng)濟型”刀 片，因為它

25、們比有涂層刀片價格便宜。刀刃夾角：絕大多數(shù)窄型刀片會有一個大約35的夾角 （ 每個側(cè)面各自夾角則為17½ ） ，而寬型刀片的夾角為 32到 35。在 制造過程中，夾角可能 會有細微的變化。 刀片一側(cè)的夾角甚至可能和另一側(cè)的角度略有不同。 這就可以 解釋為什么有時候刀片某一面切片 的效果比另一面好，或者不及另一面。 切片機上的角度調(diào)節(jié)：不論是嵌入鋼刀架內(nèi)的一次性刀片夾還是一體化的刀片夾都會有一個用 來調(diào)節(jié)間隙角的讀數(shù)指示，這個讀數(shù)在不同的切片機，不同的刀架 可以有所不 同。當使用不同制造商提供的刀片或者使用不同高度的刀片時， 間隙角可能會需 要進行相應調(diào)節(jié)。確定一個適當?shù)慕嵌茸詈玫?/p>

26、 方法可能就是“試錯法”。（試 錯法即不斷嘗試并排除錯誤可能的方法）。刀片壓板的狀態(tài)： 壓板的作用是將一次性刀片固定在恰當?shù)奈恢?，因此壓力板必須保持?潔，也不能有任何損壞。如果在壓板表面有明顯可見的弧度，而這 部分又會和 刀片接觸， 并導致刀片發(fā)生彎曲。 因此刀刃會以一種不正常的方式接觸阻止塊的 表面。同樣，刀片上的碎屑也會導致同樣的效 果。刀夾的夾力：作用在刀片上的壓力必須均勻分布在刀片被覆蓋的全部長度。 力度必須足 夠大以確保刀片的穩(wěn)定，防止任何可能的振動。但是也不能夾持 過緊，否則會 導致刀片彎曲而切出不規(guī)則的切片。 為了達到這種微妙的平衡， 需要在反復實踐 中提高技巧。3. 正確的切

27、片技術：人體工程學和因工造成的肌肉骨骼損傷：工作習慣合并日常生活方式很可能導致職業(yè)相關的肌肉骨骼損傷，比如腕管綜合癥，實用的小訣竅：a. 添置一把符合人體工程學的座椅。 調(diào)節(jié)座椅高度， 保證手可以輕松夠到手輪， 且不占用擱 置腿腳的空間。如果腳不能踏到地板，請使 用腳凳。b. 將水浴缸放置在切片機區(qū)域旁L型的延伸段，這樣只需要稍微轉(zhuǎn)動身體和椅子就可以夠到水浴缸，不必頻繁傾斜身體。c. 轉(zhuǎn)動手輪最好完成一周的旋轉(zhuǎn)。最好不要以擺動方式搖手輪（即半刀法）。d. 將精確進樣手輪的把手的直徑增加到英寸（約35mr）包裹把手的材料可以是有彈性并光滑的物質(zhì)。e. 使手臂盡量貼近身體， 不要將手靠在工作臺的邊

28、緣或者任何尖銳的表面。 不要將肘部外展 側(cè)伸出。f. 在進行切片時，保持肩膀處于放松的位置。不要扛著肩膀工作。盡量使頸部的肌肉放松。 頸部肌肉處于緊張狀態(tài)會阻斷該區(qū)域的血液 循環(huán)，導致神經(jīng)被壓迫。g. 經(jīng)常稍事休息。做體操或者自我按摩以便恢復血液循環(huán)并消除緊張。h. 如果可能，盡量采用自動化。切片機的設置：在切片機上設定的切片厚度即表示了手輪旋轉(zhuǎn)一圈后樣品頭精確進樣的距離。但這并不意味每張切片一定是這個厚度。有很多因素都會影 響到切片的厚度，比如溫度、切片速 度、切片壓力、 刀的角度、 儀器的潤滑程度等。 判斷切片厚度的最好辦法就是在顯微鏡下觀 察。當然 ，有經(jīng)驗的病理技師在切片時，將切片漂浮

29、在水浴缸中，此時就可以隨時識別切 片厚度的變化。樣品塊的放置（水平 vs. 垂直定位）：樣品的定位往往由操作者的判斷來決定， 但是實際情況往往是樣品塊的底部先接觸到 刀刃，因此定位應當根據(jù)這個實際情況出發(fā)。如果樣品是包埋在塑料包埋盒上的話，應當轉(zhuǎn) 90。確保夾具均勻夾住兩個對等的表面， 即包埋的兩個側(cè)面。 如果樣品夾豎直夾住包埋盒印有標 記的那個 側(cè)面，這會導致一些樣品變得不穩(wěn)定，因為作標記的側(cè)面往往帶有角度并且面積 相對較小。如果切片時發(fā)現(xiàn)效果很差，可以嘗試將樣品旋刀的角度：當?shù)痘蛘叩镀惭b在切片機合適的刀架上以后， 刀架必須有一定的傾斜度， 這樣刀的 夾角才能和樣品表面之間形成一個間隙，這就是間隙 角。如果傾斜度不恰當，刀刃夾角會 因為楔入效應而對組織塊的表面造成擠壓， 就會導致跳片或者厚薄不均切片的產(chǎn)生。 間隙角 的讀數(shù)在 不同的切片機會有各種差別。 使用不同的刀或者不同的刀片或者更換不同制造商， 都需要對間隙角進行略微的調(diào)節(jié)。要找倒合適的角度， 最好的辦法就是試錯法。 修片厚度：在修塊的時候一定要非常小心， 避免把蠟塊中的組織不小心剝離出來， 切片上就會出 現(xiàn)一個空洞。修塊的厚度