米糠中阿魏酸的提取及熒光分光光度法檢測

1、米糠中阿魏酸的提取及熒光分米糠中阿魏酸的提取及熒光分 光光度法檢測光光度法檢測 文章引自：食品科學(xué)文章引自：食品科學(xué) 20072007年年 第第2828卷卷 第第3 3期期 廖廖 律，周明達(dá)律，周明達(dá) ，肖，肖 勁勁 中南大學(xué)化學(xué)化工大學(xué)中南大學(xué)化學(xué)化工大學(xué) Page 2 摘要摘要 確定了新鮮米糠中阿魏酸的最佳提取工藝。確定了新鮮米糠中阿魏酸的最佳提取工藝。 采用高效液相色譜法對提取產(chǎn)品的定性檢測采用高效液相色譜法對提取產(chǎn)品的定性檢測 ，熒光分光光度法對提取產(chǎn)品的定量檢測。，熒光分光光度法對提取產(chǎn)品的定量檢測。 此法具有準(zhǔn)確、簡便、快速、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。此法具有準(zhǔn)確、簡便、快速、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。 Pa

2、ge 3 引言引言 阿魏酸(Ferulic acid，簡稱FA)的 化學(xué)名稱為4-羥基-3甲氧基-2-苯丙 稀酸，其廣泛存在于植物細(xì)胞壁中 ，多以酯的形式存在，游離態(tài)的阿 魏酸含量很低。 Page 4 引言引言 目前，從天然植物體中直接提取阿 魏酸的方法主要為堿解提取法和生 物提取法，對阿魏酸的檢測研究多 使用高效液相色譜法及紫外可見分 光光度法，目前采用熒光光度法對 阿魏酸進(jìn)行檢測所做的研究很少。 Page 5 引言引言 由于阿魏酸自身可激發(fā)出熒光，采用熒光分 光光度法可直接進(jìn)行測定，具有簡便易行， 準(zhǔn)確度高, 重現(xiàn)好的特點(diǎn)。 高效液相色譜法是目前較為先進(jìn)的分析手段， 具有靈敏度高和重復(fù)性好

3、等優(yōu)點(diǎn)，但高效液相 色譜儀價(jià)格昂貴，限制了其廣泛應(yīng)用。紫外可 見分光光度法測定簡便，但是易受其它成分干 擾，準(zhǔn)確度較差。 1 1 實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)部分 1 1 儀器與試劑儀器與試劑 儀器：儀器： 日本日立日本日立FL-4500 FL-4500 熒光分光光度計(jì)；熒光分光光度計(jì)； 800B 800B 離心機(jī)；離心機(jī)； 高效液相色譜儀高效液相色譜儀(LC-2010A)(LC-2010A) Page 7 Page 8 Page 9 Page 10 試劑： 新鮮米糠 ；阿魏酸 ； 氫氧化鈉 ； 無水乙醇 ； 乙酸乙酯 ； 碳酸鈉； 無水亞硫酸鈉； Page 11 取新鮮米糠50g，加入350ml水煮沸10m

4、in，以除去米糠中的 懸浮雜質(zhì)，并使阿魏酸易于釋放出來，然后加入3倍的無水 乙醚(W/V)浸漬2次，每次3h，脫去米糠中的脂。預(yù)處理后 的米糠擠壓過濾，水洗兩次，棄濾液，濾渣置于500ml圓底 燒瓶中，加入一定比例的堿和乙醇以及少量無水亞硫酸鈉 ，在85下回流一定時(shí)間，再次擠壓過濾，濾渣水洗兩次 ，合并濾液，用濃鹽酸調(diào)pH值為2.5左右，抽濾，取一定量 上清液，在4000r/min下離心分離5min，以乙酸乙酯萃取三 次，合并乙酸乙酯萃取液，減壓蒸餾至乙酸乙酯全部分出 ，殘?jiān)鼮榘⑽核峋w。 2 2 阿魏酸的提取阿魏酸的提取 3 3 定性定量檢測定性定量檢測 液相色譜定性檢測液相色譜定性檢測 熒

5、光光度法定量檢測熒光光度法定量檢測 Page 13 液相色譜定性檢測液相色譜定性檢測 按選定的色譜條件測定，得到標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶 液色譜圖見圖1和圖2 。由圖可見，阿魏酸的保留時(shí) 間約為15.6min Page 14 熒光光度法定量檢測熒光光度法定量檢測 1 激發(fā)波長與發(fā)射波長的確定 精確稱量0.2mg 標(biāo)準(zhǔn)阿 魏酸，以2% Na2CO3 溶 液定容于100ml 容量瓶 中，室溫下熒光掃描得 阿魏酸的標(biāo)準(zhǔn)品激發(fā)波 長為344nm，發(fā)射波長為 462nm。比色皿厚度為 2cm，2% Na2CO3 為空白 溶液，激發(fā)光和發(fā)射光 狹縫寬度均為5.0nm，掃 描速度為240nm/min。 Page

6、15 熒光光度法定量檢測熒光光度法定量檢測 2 線性范圍的確定與標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 、 1 . 4 、 1 . 6 、 1 . 8 、 2 . 0 、 2.2g/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以對照 品濃度(g/ml)為橫坐標(biāo)，以光 強(qiáng)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，在 0.22.2g/ml 范圍內(nèi)，濃度 與光強(qiáng)呈良好的線性關(guān)系，回歸 方程為： y=43.47143+224.41071x，相關(guān) 系數(shù)r=0.99957。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 Page 16 熒光光度法定量檢測熒光光度法定量檢測 3 樣品制備與測定 取5ml阿魏酸樣品上清液，乙酸乙酯萃取

7、三次(每次5ml)，合 并乙酸乙酯萃取液，再用2%碳酸鈉溶液萃取三次(每次5ml), 合并碳酸鈉溶液。以2%碳酸鈉溶液定容至50ml容量瓶中。精 密量取2ml上述溶液，再以2%碳酸鈉溶液定容至100ml容量瓶 中，照熒光光度法測定光強(qiáng)(平行測定n=5)，其結(jié)果見表1。 Page 17 熒光光度法定量檢測熒光光度法定量檢測 為了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，在已知濃度的適量樣品溶液加入一 定量的阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法處理和實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收 率，其結(jié)果見表2 。 由表2可知，熒光分析法測定米糠提取出來的阿魏酸的平 均回收率在98.4%至101.1% 之間。 4 4 結(jié)果與討論結(jié)果與討論 1 1 阿魏酸的測定方法有很多種，由于熒光分光阿魏酸的測定方法有很多種，由于熒光分光 光度法測定的同時(shí)限定了最大激發(fā)波長和最大發(fā)光度法測定的同時(shí)限定了最大激發(fā)波長和最大發(fā) 射波長射波長2 2個測定參數(shù)，故而可排除一些其他的化個測定參數(shù)，故而可排除一些其他的化 學(xué)物質(zhì)的干擾，具有靈敏度高，重現(xiàn)性好，快速學(xué)物質(zhì)的干擾，具有靈敏度高，重現(xiàn)性好，快速 簡便等特點(diǎn)。簡便等特點(diǎn)。 Page 19 2 2 采用一定比例的氫氧化鈉和無水乙醇為提取溶劑采用一定比例的氫氧