市第二人民醫(yī)院BD960結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)儀操作維護規(guī)程

1、市第二人民醫(yī)院BD960結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)儀操作維護規(guī)程1技術(shù)參數(shù)物理參數(shù)高53 inches (134.62 cm)寬36 inches (91.84 cm)深28 inches (71.12 cm)周邊應(yīng)留空間左，后，右 12 inches (30.48 cm)前 48 inches (121.9 cm)重量（沒有測試管）754 lbs. (342 kg)重量（有測試管）794 lbs. (360.2 kg)電氣要求輸入電壓100 - 120 或 200 - 240 VAC輸入電流最大 10.0 Amp輸入頻率50 or 60 Hz 3 Hz散熱4000 BTU/hr功耗2000 Watts

2、環(huán)境要求非操作狀態(tài)溫度-17.8 C - 65.0 C (0 F -149s F)濕度30% - 80% RH, non-condensing操作狀態(tài)溫度24 C - 28 C (66.2 F - 86 F)濕度30% - 80% RH, non-condensing定位水平放置，避免陽光直射，避免發(fā)熱裝置海拔高度海拔 0-4,000 M2適用范圍適用于該儀器操作手冊所列的分支桿菌的培養(yǎng)鑒定和藥 敏。3工作原理若接種的MGIT培養(yǎng)管中有分支桿菌生長，管中的營養(yǎng) 成分和氧氣將不斷被消耗，MGIT培養(yǎng)管中的熒光顯示劑將隨著管內(nèi)氧氣濃度的變化而發(fā)生反應(yīng)。一旦培養(yǎng)管內(nèi)氧氣被利 用，管內(nèi)熒光指示劑將在特

3、定光源的激活下釋放熒光。BACTECMGIT960熒光強度記憶探測器將每隔 60min連續(xù)測定 培養(yǎng)管內(nèi)熒光強度，從而判斷管內(nèi)分支桿菌生長情況。4試齊（J（1）試劑名稱： Middlebrook7H9 培養(yǎng)肉湯，OAD中養(yǎng)添加劑，抑菌劑PANTA。（2）試劑生產(chǎn)廠家：美國BD生物技術(shù)有限公司（ 3）包裝規(guī)格：7X100（ 4）試劑盒組成：培養(yǎng)肉湯，營養(yǎng)添加劑，抑菌劑5 操作步驟（ 1） 標(biāo)本的采集和處理：吸1ml 的痰液加1 ： 1 的 4%的氫氧化鈉消化15 分鐘， 取消化液離心10 分鐘。 棄去上清液，加入PH6.8的無菌PBS液5ml,溫和混勻。再離心， 棄去上清液，加入無菌 PBS液1

4、ml充分混勻。（ 2） 胃液、腦脊液、骨膜液、胸膜液和膀胱穿刺尿等標(biāo)本要先去污染處理。（ 3） 在MGIT管標(biāo)簽上直接標(biāo)記，在無菌條件下用滴管加入0.5mlMGIT OADC營養(yǎng)添加劑；在無菌條件下加入 0.1mlMGIT PANTA抗菌素混合溶液。（ 4） 加入 0.5ml 處理好的標(biāo)本（注意： 標(biāo)本量超過0.5ml會增加污染機會）。（ 5） 旋緊管蓋、適當(dāng)混勻。（6） 將MGIT培養(yǎng)管置入 BACTEC MGIT96瞠自動分支桿菌培養(yǎng)儀孵育培養(yǎng)。（7） BACTEC MGIT960熒光強度記憶探測器每隔 60min連續(xù)測定培養(yǎng)管內(nèi)熒光強度，從而判斷管內(nèi)分支桿菌生長情況。（ 8）陽性標(biāo)本進行

5、涂片，確認(rèn)為分枝桿菌進行藥敏試驗后發(fā)出報告。樣品要求：（ 1）標(biāo)本類型：深部痰液。（ 2）標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊（ 3）標(biāo)本儲存和運輸：室溫放置，室溫運輸并立即送檢。（ 4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：非無菌方式采集的標(biāo)本。6 藥敏試驗（ 1）試劑及試劑制備：MGIT AST SIRE 藥敏試劑盒為凍干試劑，28c保存，溶解后可-70C保存6個月。建議溶解后立即使用。SM 160ugINH 20 ugRFP200 ugEMB700 ug試劑制備方法：分別在每一抗菌素試劑瓶內(nèi)加入4ml 滅菌蒸餾水或去離子水后混勻，得到以下各試劑濃度。SM 40ug/mlINH 5 ug/mlRFP 50 ug/ml(2)陽

6、性管MGIT管的制備：MGIT陽性管13d的陽性培養(yǎng) 物。如陽性管超過 4d陽性的培養(yǎng)物，則需立即振蕩 MGIT管 10s后，取1 ml均勻培養(yǎng)物用4 ml生理鹽水稀釋(1: 5稀 釋)轉(zhuǎn)種。(3陽性對照管的制備：取未接種的MGIT培養(yǎng)管并除去管內(nèi)肉湯。將該空培養(yǎng)管標(biāo)記為陽性對照管并標(biāo)記配置日期。配置0.4 %亞硫酸鈉(0.4g亞硫酸鈉溶于100ml無菌蒸 儲水或去離子水中)。將5ml亞硫酸鈉溶液加入管內(nèi)，將蓋旋緊。使用前至少 應(yīng)在室溫放置1h。陽性對照管能多次使用(4)藥敏操作步驟：將MGIT管分別標(biāo)記生長對照(G。，SM、INH、RFR EMB 等。每管中分別加入 0.5mlMGIT OA

7、DC營養(yǎng)添加劑。每管中分別加入對應(yīng)量的已稀釋的S、H、R、E,至終濃度為表1所示。表1抗生素終濃度抗生素名終濃度稱SM0.8ug/mlINH0.1ug/mlRFP1.0 ug/mlEMB3.5g/m分別在5管中加入0.5ml 1 : 5稀釋的陽性培養(yǎng)菌液。BACTEC MGIT96瞠自動分支桿菌培養(yǎng)儀孵育。取0.1 ml 1 : 5稀釋的陽性培養(yǎng)菌液接種一血平板，裝入一塑料袋中于 3537 C孵育。48h后檢查該平血平板是否有其它雜菌生長。如血平板未見有雜菌生長則可以讀取BACTEC MGIT960吉果。如血平板有雜菌生長則需重復(fù)實驗步驟。(5)判讀MGIT管MGITGC生長對照管和陽性對照管

8、為陽性，陰性管為陰性。當(dāng)GC生長對照管為陽性時則開始判讀藥敏管，并且連續(xù)判讀后續(xù)2d的結(jié)果。耐藥：藥敏管和 GC管在同一天被判讀儀判讀為結(jié)果陽性， 或比GC管晚12d。敏感：藥敏管在GC由現(xiàn)陽性后2d內(nèi)仍未見生長則為敏感。7 MTCf MOT定法(1)凡制備作分支桿菌藥敏實驗的實驗室均需進行分支桿菌菌種鑒定。PNBW養(yǎng)基：PNB用二甲基甲酰胺或丙二醇溶解稀釋后加入BBL MGIT分支桿菌生長指示管中，使最終濃度為 0.5mg/ml ,制備方法同藥敏試驗培養(yǎng)基配制法。TCH培養(yǎng)基：TCH5m潞于10ml無菌蒸儲水，取 80 ul加入BBL MGIT分支桿菌生長指示培養(yǎng)管中，使最終濃度為5ug/ml ,制備方法同藥敏試驗培養(yǎng)基配制法。接種方法：與藥敏試驗相同，且與藥敏試驗同步進行。(2)結(jié)果與報告見表2表2 :分支桿菌菌種初步鑒定TCHPNB牛 分 支桿 菌-十人型結(jié)核分支桿菌+- MOTT + 8注意事項環(huán)境要求：BACTEOMGIT960全自動分支桿菌培養(yǎng)儀，應(yīng)安放在穩(wěn)固工作臺上， 保持通風(fēng)，避免震動，避免陽光直射， 避免灰塵，避免無線電波干擾，電源條件應(yīng)滿足117/220/240VAC 10%； 50/6