地膽草腋芽莖段的離體培養(yǎng)研究

1、地膽草腋芽莖段的離體培養(yǎng)研究 摘要 為了探索地膽草組織培養(yǎng)的方法，試驗(yàn)以無菌的地膽草腋芽莖段為外植體，研究6-ba和naa不同激素水平配比對(duì)地膽草芽的誘導(dǎo)和繼代增殖的影響。結(jié)果表明，適宜于地膽草芽誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基配方為ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l，繁殖系數(shù)為2.6倍，適宜于地膽草芽繼代增值的培養(yǎng)基配方為ms+6-ba 0 mg/l，繁殖系數(shù)為2.3倍。 關(guān)鍵詞 地膽草；腑芽莖段；離體培養(yǎng) 中圖分類號(hào) r282.71 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 a 文章編號(hào) 1007-5739（2014）07-0098-02 study on stem segment with axillary bu

2、d culture of elephantopus scaber l. in vitro cheng jing 1 gao hong-hua 1 * gu xiao-chuan 1 zheng ding-hua 1 yu shu-hua 2 zhang yi-shan 2 fan gao-jun 1 wang xiu-quan 1 zhang zhi-yang 1 li yan 1 （1 rubber research institute，chinese academy of tropical agricultural sciences，danzhou hainan 571737； 2 chi

3、nese academy of tropical agricultural sciences） abstract to explore the effects of different time of hormones combination and concentrations in vitro culture of elephantopus scaber l.，using sterile elephantopus scaber l.stem with axillary bud as explants，effect of induction and mulitiplication of el

4、ephantopus scaber l.in different levels of hormone 6-ba and naa ratio was studied.the results showed that the better suitable for shoot induction of explants was culture of ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l，propagation coefficient was 2.6 times，and the better suitable for secondary culture of explants was

5、 culture medium of ms+6-ba 0 mg/l，propagation coefficient was 2.3 times. key words elephantopus scaber l.；axillary bud；culture in vitro 菊科地膽草屬植物地膽草（elephantopus scaber l.）為我國(guó)長(zhǎng)江以南，尤其是華南地區(qū)常用的民間藥物。港澳地區(qū)習(xí)稱土蒲公英、地膽頭。臺(tái)灣民間又稱燈豎朽、丁茄芋，多用于治療胃病、肝炎、腎炎、支氣管炎等1。西南地區(qū)少數(shù)民族民間亦喜用此藥用植物，如中國(guó)民族藥志記載傣、苗、瑤、壯、黎、侗、景頗、拉枯、基諾、布依族人民用此

6、藥治療牙痛、痢疾等病。東南亞國(guó)家傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中均有使用此種植物不同部位治療發(fā)熱、咳嗽、關(guān)節(jié)炎、水腫等的記載。南美洲的巴西民間認(rèn)為它具有利尿、抗炎功效，非洲的尼日利亞、馬達(dá)加斯加土著人則用此藥作解熱劑，治療痢疾、關(guān)節(jié)炎等疾病2。因其較高的藥用價(jià)值，目前在民間應(yīng)用廣泛，其中在廣東、海南和港澳臺(tái)地區(qū)作為藥用食材，使用非常普遍，但由于長(zhǎng)期進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)繁殖，不僅用種量大，擴(kuò)繁速度慢，還因連續(xù)種植使病毒不斷積累導(dǎo)致種性退化，使其種植面積和數(shù)量逐年下降，嚴(yán)重影響了質(zhì)量和產(chǎn)量的提高3-4。本文利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立地膽草離體再生體系，為加快地膽草種苗繁殖速度，提供一定的理論依據(jù)5-6。 1 材料與方法 1.1

7、試驗(yàn)材料 1.1.1 材料處理。12月待地膽草種子全部成熟、果盤變干以后，用剪刀剪取果盤，進(jìn)行收集。將收集好的果盤放在5 mm篩孔的篩子上用手進(jìn)行揉搓，使種子和果盤分離，然后再用2 mm篩孔的篩子，將更純凈的種子篩出。將收集好的種子裝入密封袋中，排掉空氣密封好，放在黑暗干燥的實(shí)驗(yàn)柜中保存待用。外植體的滅菌：取成熟飽滿的地膽草種子，用流動(dòng)水沖洗10 min，在超凈臺(tái)上用75%酒精浸泡1 min，用0.1%升汞滅菌15 min，無菌水漂洗57次，然后用解剖針剝開種子頂尖部位，接種在盛有ms培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中；將種子發(fā)芽的地膽草植株接種到盛有ms培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)50 d左右。芽的誘導(dǎo)分化：將培養(yǎng)出

8、來的地膽草無菌苗，切除葉片，用解剖刀將地膽草截取成2 cm左右?guī)б秆康那o段（圖1），注意不能傷到芽點(diǎn)，放在無菌濾紙上吸干后接入含6-ba和naa的ms培養(yǎng)基中培養(yǎng)45 d左右。繼代增殖：誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌發(fā)出的叢生定芽（圖2）長(zhǎng)到帶2片或2片以上葉片的時(shí)候，切取單芽接種在繼代增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)（圖3）。生根培養(yǎng)：將高2 cm以上、帶有2片葉的健壯小苗切下，轉(zhuǎn)入含0.1 mg/l naa的ms培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)（圖4）。 1.1.2 培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度為（282），光照強(qiáng)度1 2001 500 lx，每天光照16 h，培養(yǎng)基中瓊脂的含量為2.5 g/l，蔗糖的含量為30 g/l，ph值5.8

9、。 1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 1.2.1 芽的誘導(dǎo)分化試驗(yàn)。將無菌的地膽草莖段接種在添加不同濃度的6-ba和naa的ms培養(yǎng)基中，接種30 d后統(tǒng)計(jì)剩余外植體數(shù)、褐死數(shù)、抽芽外植體數(shù)、愈傷數(shù)、抽芽總數(shù)等確定適宜芽分化的培養(yǎng)基。激素濃度設(shè)置9個(gè)處理，分別為：ms+6-ba 0 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 1.0 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 1.0 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0.05 mg/l；m

10、s+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l；ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0.05 mg/l；ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0 mg/l。 1.2.2 繼代增殖試驗(yàn)。誘導(dǎo)培養(yǎng)基上萌發(fā)的不定芽長(zhǎng)到帶2片和2片以上葉片的時(shí)候，切取單芽接種在添加不同濃度的6-ba和naa的ms培養(yǎng)基中，24 d后觀察其增殖倍數(shù)。激素濃度設(shè)置6個(gè)處理。繼代培養(yǎng)基為以下6種，分別為：ms+6-ba 0 mg/l；ms+6-ba 0.05 mg/l；ms+6-ba 0.50 mg/l；ms+6-ba 1.00 mg/l；ms+6-ba 1.50 mg/l；ms+6-ba 2.00 mg/

11、l。 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 分別記錄芽的誘導(dǎo)分化、增殖、生根情況，并用excel 2003進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。 2 結(jié)果與分析 2.1 不同激素配比條件對(duì)誘導(dǎo)芽分化的影響 從表1可以看出，培養(yǎng)基ms+6-ba 0.5 mg/l+naa 0 mg/l、ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l、ms+6-ba 2.0 mg/l+naa 0 mg/誘導(dǎo)的不定芽數(shù)量明顯優(yōu)于其他幾個(gè)培養(yǎng)基，其中以培養(yǎng)基ms+6-ba 1.5 mg/l+naa 0 mg/l誘導(dǎo)的芽數(shù)量最多，誘導(dǎo)率最高達(dá)2.6倍。隨著6-ba濃度的升高，誘導(dǎo)芽的數(shù)量增加，當(dāng)6-ba濃度大于1.5 mg/l時(shí)，誘導(dǎo)芽的數(shù)量開

12、始降低；在同一6-ba濃度水平下，低濃度的naa更有利于芽的誘導(dǎo)。 2.2 不同6-ba濃度對(duì)芽繼代增殖的影響 從表2可以看出，ms+6-ba 0 mg/l、ms+6-ba 1.50 mg/l、ms+6-ba 2.00 mg/l培養(yǎng)基誘導(dǎo)的不定芽數(shù)量明顯優(yōu)于其他幾個(gè)培養(yǎng)基，其中以ms+6-ba 0 mg/l培養(yǎng)基誘導(dǎo)的芽數(shù)量最多，平均抽芽率為260.94%，誘導(dǎo)率最高達(dá)5倍，平均誘導(dǎo)率為2.3倍。 2.3 生根培養(yǎng)效果 將以上獲得的不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根獲得64株強(qiáng)壯的地膽草植株和32株弱小且根小的植株。轉(zhuǎn)入ms培養(yǎng)基中能生根的有93株，生根率達(dá)96.9%。然后轉(zhuǎn)入沙床進(jìn)行煉苗（圖5）

13、，最后進(jìn)行大田移栽（圖6）。 3 結(jié)論與討論 通過不同激素配比試驗(yàn)獲得了適宜于通過組織培養(yǎng)獲取無菌地膽草植株的芽的誘導(dǎo)分化和芽繼代增殖的培養(yǎng)基（下轉(zhuǎn)第103頁） （上接第99頁） 配方，為以后更廣領(lǐng)域的研究提供了條件。通過本試驗(yàn)方案獲得無菌地膽草的增殖系數(shù)為5，由于選擇試驗(yàn)材料及方法的局限，導(dǎo)致繁殖系數(shù)還較低，今后的研究可以考慮運(yùn)用其他幾種激素進(jìn)行配比，可能會(huì)獲得更好的試驗(yàn)結(jié)果。 4 參考文獻(xiàn) 1 曹暉，成文，畢培曦.地膽草屬藥用植物的研究概述j.國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，1998，20（2）：11-15. 2 曹暉.第二屆中國(guó)新醫(yī)藥博士論壇學(xué)術(shù)會(huì)議論文集摘要c/北京：國(guó)家科委生命科學(xué)技術(shù)發(fā)展中心，1996：19. 3 王建軍，劉宇婧，徐家星，等.地膽草屬藥用植物研究進(jìn)展j.