肝抗體譜產(chǎn)品預(yù)期用途.

1、自身免疫性肝病(ALD)檢測試劑盒預(yù)期用途一、產(chǎn)品預(yù)期用途:本品基于酶免斑點(diǎn)方法，蛋白芯片技術(shù)檢測血清中的抗肝抗原抗體。將AMAM2 M2-3E(BPO)、SplOO、PML gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP 和 Ro-52 等 9 種抗原固定在膜上制備成 蛋白芯片；此蛋白芯片用來捕捉被測樣本中的相應(yīng)抗體(igG),并利用過氧辣根化物酶標(biāo)記抗IgG抗體來檢測樣品中的不同抗原 IgG類抗體?？垢慰乖贵w檢測在臨床上是自身免疫性疾病診斷的重要工具。通過對9種抗肝抗原抗體的檢測，可有助于適用于自身免疫性肝炎(AIH)、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC、不明原因的轉(zhuǎn)氨酶增升高等自身免疫性肝病的

2、輔助診斷和鑒別，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生診斷自身免疫疾病提供重要的參考依據(jù)。二、與產(chǎn)品預(yù)期用途相關(guān)的背景情況:(一)產(chǎn)品檢測指標(biāo)的篩選及臨床意義自身免疫性肝病(ALD)是一類原因不明的以肝臟為靶器官的自身免疫性疾病，主要包括以肝細(xì)胞胞實(shí)質(zhì)損害為主的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis ,AIH)、和以膽管病變?yōu)橹鞯脑l(fā)性膽汁性肝硬化(primary billiary cirrhosis,PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(primary scleros in gchola ngitis ,PSC)以及這三種疾病中任意兩者之間的重疊綜合征(overlap syn dromes )等自身免疫性

3、肝病。自身免疫性肝炎患者大多數(shù)起病比較隱匿，臨 床表現(xiàn) 為ALT超 過正常2 7倍，有 輕微黃疸，在臨床表現(xiàn)上基本與其他類型肝炎相似， 在實(shí)驗(yàn)室檢測方面，自身免疫性肝炎的主要特點(diǎn)為血清中存在一系列高滴度的自身抗體，所以自身抗體檢測是診斷 ALD最直接最準(zhǔn)確的方法。常見的自身抗體有 AMA M2SMASp100、 PML gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP和Ro-52等。以下就簡述這些相關(guān)抗體與相關(guān)疾病的關(guān) 系。(1) 。AMA-M2 AMA可分為 M1-M9共9個亞型，與 PBC密切相關(guān)的是 M2、M4 M8 M9其中M2診斷PBC的特異性最高。M2的靶抗原為線粒體上 2-氧酸脫氫

4、酶復(fù)合體（2-0ADC）的一些成分。2-0ADC包括丙酮酸脫氫酶復(fù)合體 E2亞單位（PDC-E2）、支鏈 二酮酸脫氫酶復(fù)合體 E2亞單位（BC0ADC-E2、2-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體 E2亞單位 （0GDC-E2以及二氫硫辛酰胺脫氫酶結(jié)合蛋白（E3BP），最常見的反應(yīng)是針對 PDC-E2PDO的抗原表位主要位于內(nèi)酯酰區(qū)和部分外酯酰區(qū)，在PBC病人血清中陽性率為95%; BCOAD和 OGDC勺抗原表位位于酯酰區(qū)，陽性率分別為38%、39%88%。采用重組技術(shù)表達(dá)融合蛋白BPQ該蛋白具有 BCOADE2 PDH E2、OGDE2的3個硫辛?；Y(jié)合功能區(qū)24，三種抗原之間無交叉反應(yīng)，其聯(lián)合檢測陽性

5、率可達(dá)95%99%。以線粒體內(nèi)膜上的 2-酮酸脫氫酶復(fù)合物為靶抗原的AMAM亞型抗體，是PBC患者的高度特異性自身抗體，敏感性為95%98%，特異性達(dá)97%。有學(xué)者認(rèn)為當(dāng)AMAM亞型抗體高滴度時，確診PBC不再需要肝組織活檢病理證實(shí)。在自身免疫性肝炎、非肝臟原發(fā)性免疫性疾?。? %進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥患者和干燥綜合征患者）、PBC重疊癥、其它慢性肝臟疾病、其它風(fēng)濕性疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡）患者中可檢測到低滴度的 AMA（2）SP100:抗SplOO抗體靶抗原為分子量 100KD的可溶性酸性磷酸化核蛋白 （SplOO）,該抗體在PBC中特異性約為97%,其敏感性為10%30%。抗Sp100抗體亦少

6、見于 風(fēng)濕性自身免疫病患者，但陽性率低（一般3 %），且陽性患者多與 PBC密切相關(guān)，并在臨床上常出現(xiàn)于肝損傷之前，如原發(fā)性干燥綜合征、硬皮病等。抗SP100抗體與PBC的臨床表現(xiàn)密切相關(guān)。該抗體陽性的PBC患者出現(xiàn)肝硬化的幾率明顯增加，血清中膽紅素升高，患者病情進(jìn)展速度快， 預(yù)后較差?？筍p100抗體在AMA陰性PBC 患者中的陽性率（60 % ）顯著高于AMA陽性者（20 % ），該抗體對AMA陰性的PBC患者 的診斷具有重要意義。（3）PML抗PML抗體靶抗原為異常表達(dá)于前髓 （早幼粒）白血病細(xì)胞的蛋白。約 90%的 PBC患者可同時檢測到抗 PML抗體和抗SP100抗體，兩者具有相同的

7、敏感性和特異性。且出現(xiàn)抗Sp100抗體和抗PML抗體的PBC患者病情進(jìn)展快，預(yù)后較差。以上說 明，在PBC中這種特殊的抗 Spl00抗體和抗PML抗體實(shí)際上預(yù)示了 PBC的早期診斷， 提高了 PBC檢出率，并且具有高度特異性，是檢測PBC的重要診斷標(biāo)志。（4）gp210:抗gp210抗體的靶抗原為位于核孔復(fù)合物上的210KD跨膜糖蛋白，所識別的表位是gp210羧基末端上的15個氨基酸殘基。該自身抗體被一致認(rèn)為是PBC的高度特異性抗體。以gp210抗原決定簇的重組蛋白或合成多肽作為抗原，應(yīng)用免疫印跡法或ELISA法檢測抗Gp210抗體，其診斷PBO的特異性可高達(dá)99%,敏感性為10%41%。約1

8、 /4(10 %40% )的PBC患者中，抗gp210抗體可與 AMA同時出現(xiàn)，抗gp210抗體也存在于20 %47% AMA陰性的PBC患者中。對于臨床、生化和組織學(xué)表現(xiàn)疑診PBC而AMA陰性的患者，或AMA陽性而臨床癥狀不典型、存在重疊綜合征(如與干燥綜合征重疊)的患者，抗gp210抗體檢測有重要價值。 抗gp210抗體與PBC患者的 肝外臨床表現(xiàn)具有一定的相關(guān)性，抗體陽性較陰性患者發(fā)生關(guān)節(jié)炎的幾率增高?？?gp210抗體的存在及抗體滴度一般不隨患者診斷的時間及臨床過程而變化，但抗體 陽性與陰性患者的預(yù)后有顯著性差異，陽性患者死于肝衰竭者明顯多于陰性者?？?gp210抗體可能作為一種獨(dú)立的

9、預(yù)后指標(biāo)，陽性提示患者預(yù)后不良。(5) LKM-1 :抗LKM抗體包括三種與微粒體酶細(xì)胞色素P450反應(yīng)的亞型抗體，其中抗LKM-1抗體被認(rèn)為是H型 AIH的特異性抗體。其靶抗原已被證實(shí)為細(xì)胞色素P4502D6(CYP2D6,主要是分子量為50KDa的微粒體抗原結(jié)構(gòu)表位。抗LKM-1抗體為H型AIH血清特異性抗體，敏感性為90%,在AIH中檢出率較低(約10%左右)。AIH 中抗LKM-1抗體陽性患者，多具典型自身免疫現(xiàn)象，大多為兒童和青年女性，自身 抗體滴度較高，血清免疫球蛋白顯著增高，病情比較嚴(yán)重。慢性丙型肝炎患者中約 2%10%也可檢測到抗 LKM-1抗體，HCV感染伴有抗LKM-1抗體

10、陽性患者，大多年 齡較大，女性并不多見，自身抗體滴度較低，血清免疫球蛋白不高，病情為慢性肝 炎表現(xiàn)?？筁KM-1抗體陽性與否對該病的治療有參考意義。在給HCV感染患者進(jìn)行干擾素治療之前應(yīng)先檢測抗LKM-1抗體，如果陽性應(yīng)慎用干擾素，因?yàn)橛醒芯勘砻骺筁KM-1抗體高滴度陽性的 HCV感染患者應(yīng)用干擾素后病情惡化，其機(jī)制可能是由 于干擾素刺激肝臟產(chǎn)生了自身免疫反應(yīng)。(6) LC-1 :抗LC-1抗體被認(rèn)為是H型 AIH的另-個標(biāo)記抗體，屬器官特異性而非種屬特 異性自身抗體，識別的靶抗原存在于肝細(xì)胞的細(xì)胞溶質(zhì)中，其成分為亞甲基轉(zhuǎn)移酶環(huán)化脫氫酶，這是-種分子量為58KD的肝臟特異性代謝酶?？筁C-1抗

11、體為H型AIH的特異性抗體，在n型 AIH患者中的陽性率約為30%，在n型AIH患者的血清中可與抗LKM-1抗體同時存在，也可作為唯一的自身抗體出現(xiàn)。在臨床上，抗LC1抗體多見于年齡小于20歲的年輕AIH患者，年齡大于40歲的AIH患者少見，該抗體的 滴度與n型AIH的疾病活動性具有相關(guān)性，對疾病的早期治療有很大的幫助，為AIH的疾病活動標(biāo)志及預(yù)后指標(biāo)。(7) SLA/LP:目前認(rèn)為SIA和LP是同-抗原，SIA/LP抗原是分子量為 50KDa的細(xì)胞溶質(zhì)分子，被稱為 UGA抑制物tRNA相關(guān)蛋白?？筁P抗體和抗SLA抗體合稱為抗SLA /LP抗體，為I型AIH高度特異性抗體。雖然抗SLA/ L

12、P抗體的確切功能和作用還不清楚，但已發(fā)現(xiàn)它與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，參與了AIH的發(fā)病過程，與 AIH的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。AIH存在種類較多的自身抗體，但多數(shù)自身抗體并非 AIH特異性抗體。 抗SLA/ LP抗體為少數(shù)公認(rèn)的 AIH高度特異性自身抗體，在 AIH所有相關(guān)自身抗體 中最具有診斷價值?？筍LA/ LP抗體在AIH中的陽性率為10%30%,可單獨(dú)存在， 也可與SMA或 ANA同時存在，而且多出現(xiàn)在ANA SMA和抗LKM-1抗體陰性的 AIH患者血清中?？筍LA/LP抗體陽性患者多為年輕女性，有高免疫球蛋白血癥。約30%的I型AIH僅該抗體陽性，而缺乏所有其他自身抗體標(biāo)志，但對免疫抑制治療有效

13、，抗SLA/ LP抗體測定對發(fā)現(xiàn)這一部分 AIH患者有重要意義。(8) RO-52:抗SS-A ( Ro52)抗體在自身免疫性疾病中是一個非特異性指標(biāo)，與多種自身免疫性疾病都有相關(guān)性，在很多疾病處于穩(wěn)定期、控制好的情況下會顯示陰性；如果陽性會提示復(fù)發(fā)或者優(yōu)先于其它指標(biāo)預(yù)警，起到預(yù)防提示作用。此指標(biāo)合并其 它指標(biāo)陽性，常會提示預(yù)后不好。(二)與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥的背景情況介紹如下：自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases, ALD是一組由異常自身免疫介導(dǎo)的肝膽損傷，根據(jù)其臨床表現(xiàn)、生化、免疫學(xué)、影像學(xué)和組織病理學(xué)特點(diǎn)，可簡單分為以肝炎為主型，即自身免疫性肝炎(au

14、toimmu ne hepatitis, AIH)和以膽系損害及膽汁淤積為主型， 即原發(fā)性膽汁性肝硬化 (primary biliary cirrhosis,PBQ和原發(fā)性硬化性膽管炎(primaryscleros ing chola ngitis, PSC )。此外，還有這三種疾病中任意兩者之間的重疊綜合征(overlap syndromes )，主要以AIH-PBC重疊綜合征多見。上述疾病均可表現(xiàn)為嚴(yán)重的肝 臟病變，并可進(jìn)展至肝硬化。(1).自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH ):自身免疫性肝炎(AIH)是一種 累及肝臟實(shí)質(zhì)的特發(fā)性疾病。臨床以高丫球蛋白血癥

15、、波動性黃疸、特征性循環(huán)自身抗體及內(nèi)分泌失常為特點(diǎn)，可發(fā)展為肝硬化，患者或一級親屬常伴有其他被認(rèn)為具有自身免疫基礎(chǔ) 的疾病，特別是甲狀腺疾病及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。AIH無明確病因，形態(tài)學(xué)特征以界面性肝炎和從門脈向周圍肝實(shí)質(zhì)內(nèi)分布密集的淋巴-漿細(xì)胞為主的炎性浸潤，伴有門脈周圍肝細(xì)胞的碎片狀壞死，缺少提示為其他肝病的典型改變?nèi)缒懙罁p害。AIH常為隱形爆發(fā)，疲勞不適，關(guān)節(jié)痛，波動性黃疸，右上腹痛或昏睡，沒有特殊體征，偶有一些病情嚴(yán)重的病例，其表現(xiàn)幾 乎和急性或暴發(fā)性病毒性肝炎相似，相當(dāng)多的患者可無明顯的肝病征兆或癥狀。目前AIH的發(fā)病機(jī)制尚未明了，分類仍有爭議。根據(jù)自身抗體的不同，有多種AIH分型方法，臨

16、床上沿用多年的方法是將AIH分為3個亞型：1型AIH的特點(diǎn)是血清中以 ANA和（或）SMA抗體為主，1型是最常見的類型； 2型AIH以LKM-1和較少出現(xiàn)的LKM-3為主。多見于兒童患者，陽性率為30%如發(fā)病年齡更早，起病就更為嚴(yán)重，也更易發(fā)展為肝硬化3型AIH以抗SLA/LP為主。（2）.原發(fā)性膽汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis, PBC）原發(fā)性膽汁性肝硬化（primary biliary cirrhosi， PBC）是以肝內(nèi)細(xì)小膽管非化膿性進(jìn)行性破壞伴門脈炎癥性改變?yōu)橹饕卣?，并有長期持續(xù)性肝內(nèi)膽汁淤積、最終導(dǎo)致纖維化和肝硬化的慢性進(jìn)展性自身免疫性疾病.PBC

17、在中老年女性中多見.近年來，該病在城市人口中有增高的趨勢.這種 趨勢可能與人們對疾病認(rèn)識的加深和診斷技術(shù)的增高，特別是對自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體篩選的臨床應(yīng)用有關(guān)，但也不排除該病發(fā)病率增加的可能.PBC的病因不明，該病常合并其他器官 自身免疫性疾病.在該病中幾乎所有患者均存在特異性身抗體和自身反應(yīng)性T細(xì)胞反應(yīng)，因此被稱為是一種器官特異性的自身免疫性疾病在疾病的早期治療選用的是熊脫氧膽酸 DCA）,其在臨床中顯示了很好的治療效果.而在疾病的晚期通常使用的是肝移植的方法，術(shù)后患者生活質(zhì)量較高。臨床上可將 PBC分為三型： 無癥狀PBC（A PBC）癥狀性PBC（s PBC）混合 型PBC （CA

18、H-PBC）。叉可根據(jù)病程分為 無癥狀期 皮膚瘙癢期 黃疽期（血清總膽紅 素34.2 mmool / L） 晚期（多在3個月內(nèi)死亡）.PBC的診斷包括肝功能檢測（檢測堿性磷酸酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶）、血清脂質(zhì)的檢測、AMA和 ANA的檢測以及與其它慢性炎癥性肝臟疾?。ㄈ缏圆《拘愿窝?、自 身免疫性肝炎或者原發(fā)性硬化性膽管炎）的區(qū)別診斷。但目前臨床出現(xiàn)AMA-M2陰性PBC患者，SP1O0 GP210 PML的抗體檢測指標(biāo)的出現(xiàn)，彌補(bǔ)了上述檢測缺陷，同時這幾個指標(biāo)聯(lián) 合檢測顯著提高了 PBC患者的檢出率和準(zhǔn)確性。二、相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法自身免疫病的實(shí)驗(yàn)室診斷包括免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)檢查和其

19、他實(shí)驗(yàn)室檢查。免疫學(xué)檢查有細(xì)胞免疫和體液免疫檢測。由于檢測抗原特異性T細(xì)胞技術(shù)較為繁瑣，臨床實(shí)驗(yàn)室難于常規(guī)開展，所以實(shí)際上有關(guān)自身免疫病的特異性實(shí)驗(yàn)室診斷主要是自身抗體的檢測。所有自身免疫病均具有特異或相對特異的自身抗體，為自身抗體檢測的廣泛應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。檢測自身抗體的常用方法包括免疫雙擴(kuò)散法（ DID）、免疫熒光測定法（IIF ）、免疫印跡法（WB、免疫斑點(diǎn) 法（IB）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、蛋白芯片法（Protein chip ）等。這些檢測方法各有 特點(diǎn)，也都存在一定的局限。1免疫雙擴(kuò)散法（DID）免疫雙擴(kuò)散法是經(jīng)典的檢測ENA抗體的方法。此方法是通過抗原與抗體在瓊脂（或瓊脂糖

20、）凝膠中擴(kuò)散形成沉淀線，然后通過對沉淀線的鑒別和用陽性血清作對照來進(jìn)行判斷。該 方法的優(yōu)點(diǎn)是價格低廉，特異性高，但操作費(fèi)時費(fèi)力，需要用肉眼來觀察沉淀環(huán)，結(jié)果判斷帶有一定的主觀性，對實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員技術(shù)水平和經(jīng)驗(yàn)要求較高，操作結(jié)果一致性較差。2、間接免疫熒光法（IIF ）間接免疫熒光分析法是檢測自身抗體的常用技術(shù)。其實(shí)驗(yàn)基質(zhì)是HEp-2細(xì)胞或不同靈長類肝臟組織冰凍切片，含有完整的抗原譜。 許多組織經(jīng)IIF著染可提示自身抗體存在，但不能對自身抗體種類進(jìn)行客觀評價，結(jié)果陽性時應(yīng)進(jìn)一步做特異性抗核抗體項(xiàng)目檢查。且對 IIF著染的鑒定有一定的主觀性，因不同觀察者、新老組織切片不同而有所不同，對試驗(yàn)技 術(shù)人員要求較高。3、免疫印跡法（WB免疫印跡法是一種將凝膠電泳、抗原抗體反應(yīng)和免疫固定技術(shù)結(jié)合在一起的生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。主要用于抗ENA抗體譜的檢測，從抗原的蛋白質(zhì)多肽水平識別不同的抗核抗體。該方法的特異性和敏感性較免疫雙擴(kuò)散法高，且一次檢測能同時完成對多種特異性抗核抗體的識別和過篩。但抗原經(jīng) SDS-PAG萌發(fā)生變性，許多抗原決定簇的構(gòu)象可能遭到破壞，不能 與特異性抗體發(fā)生反應(yīng)或發(fā)生特異性結(jié)