基因多態(tài)性分析

1、精品文檔人基因多態(tài)性分析一、實驗?zāi)康?. 了解基因多態(tài)性在闡明人體對疾病、毒物的易感性與耐受性、疾病臨床 表現(xiàn)的多樣性以及對藥物治療的反應(yīng)性中的重要作用。2. 了解分析基因多態(tài)性的基本原理和研究方法。二、實驗原理基因多態(tài)性(gene polymorphism )是指在一個生物群體中，同時存在兩種 及以上的變異型或基因型或等位基因，也稱為遺傳多態(tài)性(genetic polymorphism)。人類基因多態(tài)性對于闡明人體對疾病的易感性、毒物的耐受性、藥物代謝差異及遺傳性疾病的分子機制有重大意義；與致病基因連鎖的多態(tài)性位點可作為遺傳病的診斷標(biāo)記，并為分離克隆致病基因提供依據(jù)；病因未知的疾病 與候選基

2、因多態(tài)性的相關(guān)性分析，可用于輔助篩選致病易感基因。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction Restriction Fragment Length Polymorphism， PCR-RFLF分析是一種常用的DNA分子標(biāo)記。原理是通過PCFT增獲得目的基因。若目的基因存在等 位變異(多態(tài)性)，且變異正好發(fā)生在某種限制性內(nèi)切酶識別位點上，使酶切位 點增加或者消失，則酶切結(jié)果就會產(chǎn)生大小不同的片段，即片段長度多態(tài)性，再利用瓊脂糖凝膠電泳分離，可呈現(xiàn)出多態(tài)性電泳圖譜。若將患者與正常的多態(tài)性 圖譜比較，可確定是否變異。應(yīng)用PCR-RFLP可檢測某一致病基因

3、已知的點突變，進行直接基因診斷，也可以此為遺傳標(biāo)記進行連鎖分析進行間接基因診斷。三、器材與試劑1. 器材離心機。DNAT增儀。電泳儀。水平電泳槽。紫外檢測儀。移液器。2試劑口腔拭子DNA抽提試劑盒。瓊脂糖。1XTAE電泳緩沖液：980ml蒸餾水中加入50XTAE母液20ml。50XTAE母液：Tris 121g, 0.5M EDTA(pH8.0) 50ml，冰醋酸 28.55ml ,定容至 500ml。上樣緩沖液(6X) ： 30mM EDT,40%(V/V)甘油，0.05% (W/V)二甲苯青 FF, 0.05% (W/V 溴酚藍。10 mg/ml 溴化乙錠( EB)。 DNA Marker

4、。四、實驗方法1. 基因組DNA抽提細胞采集：口腔拭子(消毒后的棉簽) 擦拭兩側(cè)臉頰各 10 次，采集口腔粘膜脫落細胞， 將拭子轉(zhuǎn)置于2mL離心管中，用剪刀將棉簽部分剪下，加入DNAtt提試劑盒中的 400丄緩沖液GA注意：為了保證樣本不被食物或者飲料污染， 取樣前 30 分鐘內(nèi)請勿進食和飲水。dnA提?。簠⒄赵噭┖姓f明書操作。樣品保存：DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20 C,以防DNA降解。下次實驗再用。2. DNA濃度及純度檢測可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測 DNA樣品的濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳法定性檢測 DNA參照實驗16 DNA瓊脂糖電泳。紫外分光光度法定量檢測DNA濃度及純度參照實驗

5、20動物肝臟DNA的提取和檢測。測定濃度后，稀釋至0.25ug/uL 備用。3. 聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP分析查找基因序列選擇你感興趣的目的基因，首先查閱文獻，如果已有報道并提供了該基因在Gen ba nk中的ID號，可直接在美國國立生物技術(shù)信息中心（Natio nal Center forBiotech no logy In formatio n）中搜索。登陸 http:/www. ncbi. nl m. ，先選擇核酸數(shù)據(jù)庫，點擊下拉框選擇Nucleotide，再把GenbankID號輸入搜索框，點擊Search，如（圖25-1）：|Resonces

6、 HowTo-帥lir2ncbi*1 Dalaoase;工Nabnai Center foe0iote(jKi(Hogy 圖25-1查找目的基因步驟 1如果只是知道基因的名字，貝U搜索框中輸入基因名稱，點擊search。通常會產(chǎn)生大量的搜索結(jié)果，例如搜索人乙醛脫氫酶基因，search后進入如下界面-11(737： Tup OffHomt ScRaitus n(nanift mm（圖25-2），共有700余條結(jié)果：2 NCBI ResourcesHewr To -Nucltotid*Nudeotide-LDH2Save search Limns AdvancedDisplay Setlmcis:

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8、58 1 Gl 195882443G豹E朗比FAST A Gf抽hi岱 P”Q胡尺亡燼刖電is圖25-2查找目的基因步驟 2真核生物基因通常是斷裂基因，含有大量間隔區(qū)，序列龐大，若查看全基因 序列，可點擊 Geno mic,如果只想獲取轉(zhuǎn)錄區(qū)，點擊 Tran script 查看轉(zhuǎn)錄本， 點擊后進入如下界面（圖25-3）:3歡迎下載精品文檔-h i hnyour r&nKtEUltB： 21 1.9356n linearAccion NM_0DlfO44S3 1 QI 5910003Ail 2Eatterte 0.il-.3DCiGt( rTRNi&M)旦?2_?第0常 劃昶附辭：武9塑牡吩訂：

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12、亠 I - g 覽境次303642465460667276肌眈品0206202632箕4450ES62Be74s086號attgget gee gctctcggtc gggccccgcc MG前舉 glcigcagga. gctgagggg ciggtggatt lace acgga scegtgt ctggcceag cloaoegece a直CHttgtgc gaciagtg q耳匚agtaacc catgcg Sgccagtgct g.gacgga accgagcagg 包ug蓉g莓注*&匚 tact tdatcc： gagttetteg agagceaaca gccattcc ttit

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