大實(shí)驗三米曲體發(fā)酵制曲

1、大實(shí)驗三大實(shí)驗三 米曲霉固體發(fā)酵制曲米曲霉固體發(fā)酵制曲 1 1、學(xué)習(xí)固體發(fā)酵工藝學(xué)習(xí)固體發(fā)酵工藝 2 2、制備米曲霉固體曲，測定蛋白酶活力制備米曲霉固體曲，測定蛋白酶活力 實(shí)驗?zāi)康囊髮?shí)驗?zāi)康囊髮?shí)實(shí) 驗驗 原原 理理實(shí)實(shí) 驗驗 步步 驟驟1、制備麩皮固體培養(yǎng)基：、制備麩皮固體培養(yǎng)基：25g麩皮，加麩皮，加15ml水（加水量水（加水量40%60%），拌勻；），拌勻；裝茄瓶。裝茄瓶。 2、滅菌：、滅菌：0.1mpa 滅菌滅菌2030min，冷卻至室溫。，冷卻至室溫。 已培養(yǎng)好的米曲霉孢子斜面一支，加入約已培養(yǎng)好的米曲霉孢子斜面一支，加入約10ml無菌水，無菌水，洗下孢子，制成孢子懸液。洗下孢子，

2、制成孢子懸液。 注意：勿使孢子飄落實(shí)驗室注意：勿使孢子飄落實(shí)驗室 3、制備孢子懸液菌種：、制備孢子懸液菌種：實(shí)驗步驟 (continued)實(shí)驗步驟 (continued)每茄瓶加入孢子懸液每茄瓶加入孢子懸液2ml，抖動茄瓶，使孢子懸液與麩，抖動茄瓶，使孢子懸液與麩皮培養(yǎng)基混勻。皮培養(yǎng)基混勻。 4 4、接種：、接種：28培養(yǎng)培養(yǎng)4天天其間，于接種其間，于接種2448h左右抖動茄瓶翻曲一次左右抖動茄瓶翻曲一次觀察記錄菌絲生長及孢子形成情況觀察記錄菌絲生長及孢子形成情況5 5、培養(yǎng)：、培養(yǎng)：實(shí)驗步驟 (continued)另一次實(shí)驗另一次實(shí)驗實(shí)驗步驟 (continued)6 6、蛋白酶活力測定：

3、、蛋白酶活力測定： 1 1）粗酶液制備：）粗酶液制備：向一茄瓶中加入無菌水約向一茄瓶中加入無菌水約100ml，浸泡固體曲，浸泡固體曲1h；過濾得；過濾得粗酶液。粗酶液。 2 2）倒平板：）倒平板：融化酪蛋白明膠雙基質(zhì)固體培養(yǎng)基，每人倒一平板。融化酪蛋白明膠雙基質(zhì)固體培養(yǎng)基，每人倒一平板。 實(shí)驗步驟 (continued)3 3）打孔：）打孔：打孔器經(jīng)酒精燃燒滅菌后，每平板打打孔器經(jīng)酒精燃燒滅菌后，每平板打13孔，并在酒精燈孔，并在酒精燈火焰上稍稍加熱打孔處，使孔周圍的培養(yǎng)基微融，然后平火焰上稍稍加熱打孔處，使孔周圍的培養(yǎng)基微融，然后平放冷卻。放冷卻。 4 4）加樣：）加樣：往孔內(nèi)加入粗酶液適量

4、（約往孔內(nèi)加入粗酶液適量（約100ul），可設(shè)對照。），可設(shè)對照。 實(shí)驗步驟 (continued)5 5）培養(yǎng)（反應(yīng)）：）培養(yǎng)（反應(yīng)）：將加樣后的平板小心平端放入將加樣后的平板小心平端放入30培養(yǎng)箱，放置培養(yǎng)箱，放置20小時左右。小時左右。 6 6）觀察結(jié)果：）觀察結(jié)果：可直接觀察透明圈有無、測定透明圈直徑；也可向平板可直接觀察透明圈有無、測定透明圈直徑；也可向平板滴加少量滴加少量10%三氯乙酸，以增強(qiáng)觀察效果。三氯乙酸，以增強(qiáng)觀察效果。 實(shí)驗結(jié)果實(shí)驗結(jié)果 實(shí)驗報告實(shí)驗報告1 1、實(shí)驗原理、方法步驟、結(jié)果及分析、實(shí)驗原理、方法步驟、結(jié)果及分析 2、思考題、思考題準(zhǔn)準(zhǔn) 備：備：1、10%三氯乙

5、酸三氯乙酸 2 2、雙基質(zhì)固體培養(yǎng)基、雙基質(zhì)固體培養(yǎng)基 （以對應(yīng)的（以對應(yīng)的l-r組配制，每組配制，每l-r組配組配400ml，分裝，分裝3瓶）瓶） 配方：配方：10g干酪素，干酪素，10g明膠，明膠，18g瓊脂，瓊脂，1000ml， ph7.0 配法：配法：干酪素先用干酪素先用0.2n naoh溶解，倒入熱水中加熱攪拌溶解，倒入熱水中加熱攪拌至完全溶解；適量至完全溶解；適量1n hcl調(diào)至調(diào)至ph7.0；加入明膠和瓊脂，；加入明膠和瓊脂，繼續(xù)加熱至完全融化。繼續(xù)加熱至完全融化。 附：附：大實(shí)驗四大實(shí)驗四“蘇云金芽孢桿菌（蘇云金芽孢桿菌（bacillus thuringiensis; b.t）殺蟲劑液體搖瓶發(fā)酵）殺蟲劑液體搖瓶發(fā)酵”方案設(shè)計方案設(shè)計 研究內(nèi)容：研究內(nèi)容：1）培養(yǎng)基組成對）培養(yǎng)基組成對b.t芽孢形成的影響芽孢形成的影響 2）通氣狀況對）通氣狀況對b.t芽孢形成的影響芽孢形成的影響 以實(shí)驗小組為單位，根據(jù)研究內(nèi)容自行查閱