血紅蛋白電泳及臨床意義

1、血紅蛋白電泳及臨床意乂咎昕(黑龍江省鶴崗市人民醫(yī)院154101)【關(guān)鍵詞】血紅蛋白 電泳 臨床意義【中圖分類號】r443+.8【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】a【文章編號】2095-1752 (2013) 30-0164-01血紅蛋白電泳可以將血紅蛋白中各正常成分或異常成分分離，以便進(jìn)一 步鑒定或定量測定。用等電聚焦毛細(xì)管電泳(cief)和區(qū)帶電泳(cze)可分離出十幾 種hb變異鏈，有作者釆用cze法對正常人和地中海貧血患者血液樣品在ph 11.8 堿性磷酸鹽緩沖液(pbs)中進(jìn)行分離，分離的速度很快(<8分鐘)，兩者的電泳圖 譜明顯不同。對胎兒紅細(xì)胞處理后，分離其血紅蛋白，可分離dj&

2、alpha;> β 和γ幾種球蛋白鏈，如采用低ph 3.2的緩沖液，雖然分析時(shí)間延長，但變 異體的分辨效果更佳。顯然ce技術(shù)對鑒別診斷血紅蛋白病起重要作用。1材料與方法1.1檢測對象 收集2011年1月2012年12月受檢300例均為門診 進(jìn)行婚前檢查或前前檢查人員。其中男60例，女240例，年齡2235歲，平均 為29歲。1.2方法 電泳槽中的陽極注入ph9.1的tris緩沖溶液，陰極注入 ph8.6的巴比妥緩沖溶液，要求兩極液面盡量成同一水平。把醋酸纖維素薄膜裁 成4cm×12cm大小，浸入薄膜浸泡液中l(wèi)omin左右，取出，用

3、濾紙吸去多 余浸泡液，把薄膜粗面朝上，貼在電泳槽支架上，用兩層紗布搭橋，不接通電源， 自由平衡5mino用血紅蛋白吸管吸取23μ濃度為1 80100g/l的血紅蛋白 溶液，放在蓋玻片邊緣(蓋玻片長約lcm),把血紅蛋白液用蓋玻片印在醋酸纖維 素薄膜靠陰極一端約1.5cm處(薄膜下襯一片干燥濾紙,吸去多余的血紅蛋白液), 同時(shí)用正常人血紅蛋白液作對照。接通電源，平衡5min,電壓調(diào)至150v,電流 量約為0.2ma/cm簿膜寬，電泳1520mino電泳完畢后，取下薄膜條，置于氨 基黑10b染色液里染色lomin,取出，用漂洗液漂洗，換液數(shù)次，直至薄膜條潔 白為止。2結(jié)果在ph 8.

4、6或ph 8.8電泳吋，正常人的血紅蛋白a及血紅蛋白a2都向正 極方向泳動(dòng)，血紅蛋ha在前，血紅蛋白a2在后。但血紅蛋hf與血紅蛋ha 的位置很靠近，難以準(zhǔn)確地分離和定量，可作lmin堿變性試驗(yàn)，來測定血紅蛋 白f。300例血紅蛋白電泳結(jié)果中檢驗(yàn)異常96例，hba2的平均值為2.3%；范圍 在1.1%3.2%之間。hba2增高是β輕型地中海貧血的一個(gè)重要特征。缺鐵 性貧血及其他血紅蛋白合成障礙性疾病。3討論異常血紅蛋白分子的結(jié)構(gòu)改變使其等電點(diǎn)發(fā)生變化，在電泳吋其泳動(dòng)速 度與正常血紅蛋白不同。一般用以檢出各種異常血紅蛋白的主要電泳方法是在 ph 8.6或ph 8.8條件下進(jìn)行，

5、有吋需要用ph 7.0、6.8、6.5或6.25的條件作進(jìn)一 步的鑒別。作為電泳支持物可采用層析濾紙、醋酸纖維素薄膜、淀粉膠、淀粉板 或瓊脂膠，不同支持物的電泳各有其特點(diǎn)，可根據(jù)需要選擇。在ph 8.6或ph 8.8堿性緩沖液中電泳時(shí)，各種血紅蛋白都向陽極泳動(dòng)， 按其泳速可大致分為6組。血紅蛋白e：血紅蛋白e泳速與血紅蛋白a2相等。 在患者的血紅蛋白中血紅蛋白e的含量超過20%。雖然血紅蛋白c的泳速與血 紅蛋白a2很接近，在此電泳中不能分離，但可進(jìn)一步作ph 6.25瓊脂電泳加以 區(qū)別，這吋血紅蛋白e與血紅蛋a a2電泳位置相同，而與血紅蛋白c分離。血 紅蛋白s在堿性條件下，電泳速度與異常血紅

6、蛋白s相同或接近的異常血紅蛋白 有血紅蛋白d、血紅蛋白g以及某些不穩(wěn)定血紅蛋白（如zürich等），但它 們的鐮變試驗(yàn)陰性及還原血紅蛋白溶解度正常，而血紅蛋白s的鐮變試驗(yàn)陽性及 還原血紅蛋白溶解度降低，可加以區(qū)別2。血紅蛋白g的泳速較血紅蛋白d快。 不穩(wěn)定血紅蛋白可進(jìn)行熱不穩(wěn)定試驗(yàn)加以確診。測定血紅蛋白f是診斷重型和中 間型地中海貧血的重要依據(jù)。淀粉板電泳可以分清血紅蛋白f與血紅蛋白a兩條 區(qū)帶，定量測定結(jié)果與抗堿血紅蛋白測定結(jié)果相似。血紅蛋白h：進(jìn)行電泳時(shí), 可以出現(xiàn)一條快速的異常血紅蛋白區(qū)帶，在ph 6.5淀粉膠電泳中該區(qū)帶仍向陽 極移動(dòng)，結(jié)合h包涵體陽性，可以確診為血紅蛋白h病。血紅蛋白h的等屯點(diǎn) 是ph5.6o在ph 6.5或ph 6.8的條件下，血紅蛋白h向正極泳動(dòng)，而其他血紅 蛋白則向負(fù)極泳動(dòng)，這對進(jìn)一步鑒定血紅蛋白h有特定意義。血紅蛋白m經(jīng)轉(zhuǎn) 變?yōu)檠趸哞F血紅蛋h m后，在ph6.8條件下可與血紅蛋白a分開。利用ph 6.8 電泳，還可以分離血紅蛋白e與血紅蛋白a2及過篩不穩(wěn)定血紅蛋白。在ph 8.6 條件下，有幾種異常血紅蛋白的泳速相同或接近。在ph 6.25吋，可進(jìn)一步區(qū) 分。例如，將血紅蛋h s與血紅蛋白d及血紅蛋白g分開；將血紅蛋hc與血 紅蛋白0、血紅蛋白e及血紅蛋白a2分開；又可將血紅蛋白0與血紅蛋白c、 血