槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定

1、.槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（一）一、實驗?zāi)康?、通過蘆丁的提取與精制掌握堿酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2、通過蘆丁結(jié)構(gòu)的鑒定，了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。二、實驗原理蘆?。簻\黃色針狀結(jié)晶，mp174-178 。溶解度： 1：8000；熱水1:200 ；冷乙醇 1:300 ；熱乙醇 1:30 ；冷甲醇 1:100 ；熱甲醇 1:10.槲皮素：黃色結(jié)晶， mp313-314 （ 2 分子結(jié)晶水），能溶解于冷乙醇（ 1:650 ），易溶于沸乙醇（ 1:60 ），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；難溶于水，實驗室以稀硫酸水解，乙醇重結(jié)晶制得。本實驗主要是利用蘆丁分子中含有較多的酚羥基， 顯弱酸性

2、，可溶于堿中，加酸酸化后又可析出結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。三、藥品材料槐米、石灰乳、鹽酸、廣泛PH試紙四、實驗操作蘆丁的的提取和精制蘆丁的提?。喝』泵?0g 置 500ml 燒杯中，加入沸水400ml 及 1g 硼砂，攪拌下加入石灰乳調(diào)至PH8-9, 保持微沸30 分鐘（注意保持精品.PH8-9），并隨時補充蒸發(fā)掉的水分， 趁熱用雙層紗布濾過， 收集濾液，藥渣再用 200ml 水按同樣的操作再提取20 分鐘，合并兩次濾液。濃縮至 1/2 體積，濾液在 60精品.-70 再用鹽酸調(diào)至PH4-5，靜置一周，析出蘆丁。五、實驗說明及注意事項1、

3、本實驗采用堿溶液酸沉法從槐米中提取蘆丁，收率穩(wěn)定，且操作簡便。在提取前應(yīng)注意將槐米搗碎，使蘆丁易于被熱水溶出?；被ㄖ泻写罅空骋嘿|(zhì)，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除去。PH 應(yīng)嚴(yán)格控制8-9 ，不得超過10, 。因為在強堿條件下煮沸，時間稍長可促使蘆丁水解破壞，使提取率明顯下降。酸沉淀時PH4-5，不宜過低，否則會使蕓香苷成烊鹽溶于水，降低了收率。2、提取過程中加入硼砂作用：保護蘆丁分子中的鄰二酚羥基不被氧化，亦保護鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蘆丁不受損失?；泵字刑J丁的提取、分離與鑒定（二）一、實驗?zāi)康?、掌握蘆丁水解生成苷元的方法及二者之間的分離。2、熟悉蘆丁、槲皮素的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、檢識方法和紙層析鑒

4、定方法。二實驗原理精品.蘆丁粗品可利用蘆丁對冷、 熱水 的溶解度相差懸殊的特性進行精制。蘆丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，并能通過紙層析鑒定。蘆丁及槲皮素還可以通過化學(xué)反應(yīng)及紫外光譜鑒定。三、藥品材料蘆丁粗品、 硫酸、 鹽酸、 氫氧化鈉、 鎂粉、 - 萘酚、 三氯化鋁、 葡萄糖溶液、 鼠李糖溶液、 95%乙醇、 碳酸鋇、 廣泛 PH試紙、 層析濾紙等。四、實驗操作（一） 蘆丁的提取和精制1、蘆丁的提取：取前次操作蘆丁沉淀液，慢慢傾去上清液后，抽濾，沉淀用少量冷水洗滌2-3 次，抽干，得到蘆丁的粗產(chǎn)物。2、重結(jié)晶：稱定粗品蘆丁的重量，按約 1:200 的比例懸浮于蒸餾水中，煮沸 10

5、 分鐘使蘆丁全部溶解，趁熱抽濾，冷卻濾液，靜置析晶。抽濾，置于空氣中晾干或 60-70 干燥，得精制蘆丁，稱重，計算收率。3、蘆丁的水解：取蘆丁 1g，置于 250ml 圓底燒瓶中，加入 2%硫酸溶液 80ml 直火微沸回流 1 小時，至析出的黃色沉淀不再增加為止，放精品.冷抽濾，濾液保留作糖檢查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干稱重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇約 15ml）重結(jié)晶即得精制槲皮素。精品.取水解后的母液 20ml，加入碳酸鋇細粉中和至 PH7，濾除生成的碳酸鋇沉淀。濾液置水浴上濃縮至 1-2ml ，供紙色譜用。（二）鑒定1、性質(zhì)實驗（1）鹽酸 - 鎂粉反應(yīng)：取蘆丁少量

6、置于試管中，加1ml 乙醇使溶解，加 5 滴濃鹽酸，再加少許鎂粉，注意觀察顏色變化的情況。（2）Molisch 反應(yīng)：取蘆丁和槲皮素少量，分別置試管中各加 1ml 乙醇使溶解，加幾滴 - 萘酚乙醇溶液，搖勻，沿管壁加濃硫酸 10 滴，注意觀察兩液面間產(chǎn)生的顏色變化，并比較蘆丁和槲皮素的區(qū)別。2、色譜鑒定（1）蘆丁及槲皮素的紙色譜檢識點樣：取新華1 號濾紙；距下端3cm 處用鉛筆劃線，為起始線，隔1.5cm 處點樣品。將點好的樣品的濾紙掛在層析杠中飽和半個小時，再上行展開。支持劑：層析濾液（ 5cm*10cm）展開劑：正丁醇 - 醋酸 - 水（ 4:1:5 ）上層精品.樣品：自制槲皮素的乙醇溶液

7、自制蘆丁的乙醇溶液對照品：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)的乙醇溶液顯色劑： a、可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點b、 噴霧三氯化鋁乙醇溶液，紫外燈下觀察熒光斑點（ 2）糖的紙色譜檢識支持劑：層析濾紙（ 5cm*10cm）展開劑：正丁醇 - 醋酸 - 水（ 4:1:5 ）上層樣品：水溶液對照品： 1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品醇溶液及 1%鼠李糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液顯色劑：噴以鄰苯二甲酸苯胺溶液， 105烘焙 5 分鐘至斑點顯色清晰（ 3）蘆丁及槲皮素的薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠 G板， 105-110 活化 1 小時展開劑：氯仿 - 甲醇 - 甲酸（ 15:5:1 ）樣品：自制槲皮素的乙醇溶液自制蘆丁的乙醇溶液對照品蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液顯色劑： a、可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點b