蛋白質(zhì)測定方法的比較

1、原理時間應(yīng)用范圍優(yōu)缺占八、樣品與濃硫酸共熱。810適用于用于含氮有機(jī)物即分解產(chǎn)小時氮，標(biāo)準(zhǔn)生氨（消化），氨又與誤差為蛋白硫酸作用，變成硫酸± 2%質(zhì)含氨。經(jīng)強堿堿化使之量的分解放出氨，借烝汽準(zhǔn)確將氨蒸至酸液中，根測據(jù)此酸液被中和的程定；度可計算得樣品之氮干擾含量。少;費時太長雙縮脲2030適用于用于(NH3CONHCONH3分鐘110mg快速是兩個分子脲經(jīng)蛋白質(zhì)測180 C左右加熱，放出定,個分子氨后得到的但不產(chǎn)物。在強堿性溶液太靈蛋白質(zhì)測定方法的比較凱氏定氮法雙縮尿法中，雙縮脲與CuSO4敏；形成紫色絡(luò)合物，稱不同為雙縮脲反應(yīng)。凡具蛋白有兩個酰胺基或兩個質(zhì)顯直接連接的肽鍵，或色相冃

2、匕過個中間碳原了 相連的肽鍵，這類化 合物都有雙縮脲反 應(yīng)。似Folin此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是40適用于5mg蛋靈敏加入了第二種試劑，即Folin 酚試劑，以增加白質(zhì)-酚顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度O60分度試劑這兩7種顯色反應(yīng)產(chǎn)鐘咼，法生深監(jiān)色的原犬是：倍）耗費在堿性條件、，蛋白時間質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)長；合生成復(fù)合物。操作Folin 酚試劑中的磷要嚴(yán)鉬酸鹽一磷鎢酸鹽被格計蛋白質(zhì)中的酪氨酸時；和苯丙氨酸殘基還顏色原，產(chǎn)生深藍(lán)色（鉬深淺蘭和鎢蘭的混合隨不紫外 吸收 法物）。在一定的條件 下，藍(lán)色深度與蛋白 的量成正比。司蛋 白質(zhì) 變 化; 標(biāo)準(zhǔn) 曲線 不是 嚴(yán)格 的直 線

3、形 式， 且專 性 差蛋白質(zhì)分子中，酪氨 酸、苯丙氨酸和色氨 酸殘基的苯環(huán)含有共 軛雙鍵，使蛋白質(zhì)具 有吸收紫外光的性 質(zhì)。吸收咼峰在280nm處，其吸光度510分鐘適用于50100mg蛋白質(zhì)用于 層析 柱流 出液 的檢 測； 核酸（即光密度值）與蛋 白質(zhì)含量成正比。此 夕、，蛋白質(zhì)溶液在 238nm的光吸收值與 肽鍵含量成正比。利 用定波長下，蛋白 質(zhì)溶液的光吸收值與 蛋白質(zhì)濃度的正比關(guān) 系，可以進(jìn)行蛋白質(zhì) 含量的測定。的吸 收可 以校 正； 不消 Uy* L、A 耗樣 品， 測定 后樣 品仍 能回 收利 用考馬 斯亮 藍(lán)法考馬斯亮蘭G-250染 料，在酸性溶液中與 蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料 的最大吸收峰的位置（Imax），二由 465nm 變?yōu)?95nm，溶液的 顏色也由棕黑色變?yōu)?蘭色。經(jīng)研究認(rèn)為，515分鐘適用于1 5mg蛋白質(zhì)較好 的方 法;干擾 物質(zhì) 少;顏色 穩(wěn)疋； 顏色 深淺 隨不 司蛋 白質(zhì) 變 化; 標(biāo)準(zhǔn) 曲線 有輕 微的 非線染料主要是與蛋白質(zhì) 中的堿性氨基酸（特 別是精氨酸）和芳香 族氨基酸殘基相結(jié) 合。在595nm下測定的吸 光度值A(chǔ)595,與蛋白 質(zhì)濃度成正比。我的看法：關(guān)于蛋白質(zhì)的鑒定方法在不 斷的更新進(jìn)步，技術(shù)也在不斷革新?？捡R斯 亮藍(lán)法