輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程

1、【檢驗(yàn)方法】首先將質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清及ABC血型反定型紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（平板法、試管法、微柱凝膠法）具體如下:1.平板法：在玻片上（或紙片上）按表1加樣各1滴（50ul），混勻（直徑約20mm大?。?， 前后緩慢搖晃玻片，2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果，并記錄。2.試管法：取13支（95mm 12mn或75mm 12mm試管做好標(biāo)記，按表1加樣各1滴（50ul）, 混勻，離心（離心速度和時(shí)間可以選擇轉(zhuǎn)速1000rpm時(shí)間1分鐘或轉(zhuǎn)速3400rpm時(shí)間15秒）， 判定結(jié)果，并記錄。表1平板法、試管法ABC及RhD血型室內(nèi)質(zhì)控加樣表抗A+樣本1抗B+樣本1抗D+樣本14%A

2、c +樣本34%Bc +樣本34%Cc +樣本3輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【目 的】規(guī)范輸血科各級檢驗(yàn)人員室內(nèi)質(zhì)控操作程序，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠?！具m用范圍】 適用于輸血相容性檢測項(xiàng)目。【職 責(zé)】輸血科全體員工均遵守執(zhí)行。（一）ABC、RhD血型室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】A抗B、抗D ABO血型選擇已知型別的紅細(xì)胞和血清，根據(jù)其與在用試劑標(biāo)準(zhǔn)血清：抗反定型紅細(xì)胞及ABC血型抗原檢測卡（微柱凝膠）陽性及陰性檢測結(jié)果，通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行ABC RhD血型檢測過程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1.質(zhì)控品：

3、樣本樣本2B型RhD（ +）紅細(xì)胞樣本3A血清樣本4B血清樣本5C型RhD（ +）紅細(xì)胞樣本6RhD（-）紅細(xì)胞血型鑒定試劑：型RhD（ +）紅細(xì)胞1A1標(biāo)準(zhǔn)血清：抗A,抗B,抗D2.ABC血型反定型紅細(xì)胞:Ac,Be,CcABC血型抗原檢測卡（微柱凝膠）【主要儀器】卡式專用離心機(jī)抗A+樣本2抗B+樣本2抗D+樣本24%Ac +樣本44%Bc +樣本44%Cc +樣本4抗A+樣本5抗B+樣本5抗D+樣本5抗D +樣本63.柱凝膠法:取4張待檢ABC血型抗原檢測卡 （微柱凝膠） 做好標(biāo)記。 將樣本1分別加入第1張卡的1-3孔中各1滴 （50ul） ，將樣本2分別加入第2張卡的1-3孔中各1滴（5

4、0ul），將樣本5分別加入第3張卡的1-3孔中各1滴（50ul），將樣本6加入第4張卡的第3孔內(nèi)。使用卡式專用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄。建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更 換不同批號質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一 致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控判定】陽性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，均視為

5、失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。記錄表格】4.密理博（上海）貿(mào)易有限公司康D （IgM+IgG）血型定型試劑（單克隆抗體）說明書二）不規(guī)則抗體篩檢室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程檢驗(yàn)原理】選擇已知血清，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測卡（微柱凝膠）中的陽性及陰性結(jié)果， 通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行不規(guī)則抗體篩檢過 程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性。主要試劑組成】輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控登記表SXK-JL66輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控失控

6、及失控處理記錄表SXK-JL67注意事項(xiàng)】1.室內(nèi)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞保存在28C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2.用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用。3.紅細(xì)胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴(yán)重溶血，不得使用；若出現(xiàn)輕微溶血可用生理鹽水對其進(jìn)行洗滌，重新懸浮后使用。4.質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí)，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心， 去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用。參考資料】1.長春愽迅生物技術(shù)有限公司ABO、RhD血型檢測質(zhì)控品（微柱凝膠法）說明書2.長春愽迅生物技術(shù)有限公司ABO、RhD血型檢測卡（微柱凝膠法）說明書3.上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任

7、公司抗A抗B血型定型試劑（單克隆抗體）說明書1.質(zhì)控品：樣本1 O型血清樣本2 IgG型抗D(+)AB血清2.不規(guī)則抗體篩檢試劑：抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡(微柱凝膠)I、H、m抗體篩檢紅細(xì)胞檢驗(yàn)方法】 微柱凝膠法，具體操作步驟如下：16管中，50ul/管。分別在前3管加入樣本1，后3管加入樣本2，50ul/管。即刻使用卡式專用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄。建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號試劑同

8、時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一 致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控判定】陽性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。記錄表格】輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表注意事項(xiàng)1.室內(nèi)質(zhì)控品、抗篩細(xì)胞、保存在28C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2.用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用。3.質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí)， 應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心， 去除雜物后將上清液移至潔凈容器

9、中使用。參考資料1.長春愽迅生物技術(shù)有限公司不規(guī)則抗體篩檢質(zhì)控品說明書主要儀器】卡式專用離心機(jī)1.將質(zhì)控品、抗體篩檢紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫。2.取1張抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡做好標(biāo)記。3.將I、n、m抗體篩檢細(xì)胞用低離子強(qiáng)度鹽溶液稀釋至0.8%，對應(yīng)加入上述檢測4.5.將檢測卡置37C孵育器中15分鐘。6.輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表SXK-JL65輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控登記表SXK-JL66SXK-JL672.長春愽迅生物技術(shù)有限公司抗人球蛋白檢測卡不規(guī)則抗體篩檢操作說明書3.長春愽徳生物技術(shù)有限責(zé)任公司不規(guī)則抗體檢測試劑（人紅細(xì)胞）使用說明書三）交叉配血室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程檢驗(yàn)原

10、理】凝聚胺介質(zhì)法：紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，其懸浮在電解 質(zhì)中形成Zeta電位，Zeta電位決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。而凝聚胺介質(zhì)法則是首先利用低 離子溶液降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體結(jié)合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，為高價(jià)陽離子多聚物、肝素中和劑），以中和 紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞 之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚，最后加入懸浮液（ 中和凝聚胺（Polybrene）陽離子作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝聚散開，試驗(yàn)結(jié)果為陰性， 但如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會被凝

11、聚胺凝結(jié)，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。微柱凝膠法：選擇已知的血清和相應(yīng)的細(xì)胞，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測卡（微柱 凝膠）中的陽性及陰性結(jié)果，通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測，以監(jiān)控 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行交叉配血過程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性。主要試劑組成】O型RhD（+）紅細(xì)胞RhD（-）紅細(xì)胞O血清IgG抗DAB血清2.交叉配血檢測試劑：凝聚胺介質(zhì)試劑：低離子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybre ne八 懸浮液（Resus pen di ng） 抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）主要儀器】 卡式專用離心機(jī)檢驗(yàn)方法】 首先將質(zhì)控品、凝聚胺介質(zhì)從冰箱取出后平衡至室溫。

12、操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（試管法、微 柱凝膠法）進(jìn)行。1.凝聚胺介質(zhì)法 為試管法，操作步驟如下：1.1取4支（95mm 12mn或75mm 12mm試管做好標(biāo)記.1.2按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3）分別加入各管，各1滴（50ul）。1.3各管加入低離子溶液（LIM）0.65ml，混合均勻后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液2滴（100ul），并混合均勻。1.4用離心機(jī)3400rpm時(shí)間10秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約1.5輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝聚，如無凝聚，則必須重做。Zeta電位降低，縮

13、短紅細(xì)胞Resuspending），1.質(zhì)控品：樣本AB型RhD（+）紅細(xì)胞樣本樣本樣本樣本0.1ml液體。1.6最后加入懸浮液（Resus pen di ng）2滴（lOOul），輕輕搖動試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如 凝聚散開，表示由Polybrene弓I起的非特異性凝集，抗體篩檢結(jié)果為陰性。如果凝集不散開,則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)果的特異性反應(yīng)，抗體篩檢結(jié)果為陽性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。2、微柱凝膠法 操作步驟如下:2.1取1張待檢抗人球蛋白交叉配血檢測卡（微柱凝膠）做好標(biāo)記。2.2交叉配血實(shí)驗(yàn)按照組合1（樣本4+樣本1）、組合2（樣本4+樣本2）、組合3（樣本5+樣本1）、組合4（樣本5+樣本3

14、）加樣，各50ul。2.3將檢測卡置37C孵育器中15分鐘。2.4即刻使用卡式專用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘Y(jié)果解釋】交叉配血室內(nèi)質(zhì)控根據(jù)其檢測作用可分為IgG組和IgM組如表2。首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更 換不同批號質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號質(zhì)控品在控，新批號質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一 致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā筷栃越Y(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過1+凝集強(qiáng)度的差

15、異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛?.室內(nèi)質(zhì)控品保存在28C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2.用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號質(zhì)控品不得混用。3.紅細(xì)胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴(yán)重溶血，不得使用;組合質(zhì)控品組合檢測結(jié)果檢測作用組合1樣本4 +樣本1+檢測IgM類抗原抗體反應(yīng)組合2樣本4 +樣本2-檢測IgM類抗原抗體反應(yīng)組合3樣本5 +樣本1+檢測IgG類抗原抗體反應(yīng)組合4樣本5 +樣本3-檢測IgG類抗原抗體反應(yīng)交叉配血室內(nèi)質(zhì)控IgG、IgM分組表表2【建立參考值】輸血相容性檢測室內(nèi)質(zhì)控