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文檔簡介

1、ELISA的標準曲線一般使用專門的曲線擬合工具，如：Curve Exert1.3下面以Curve Exert1.3為例說明怎么樣制作：1 啟動“Curve Expert1.3”2 X軸輸入標準品的OD值，Y軸輸入所對應的濃度值，如圖：3單擊運行 按鈕（上圖紅圈圈），出現(xiàn)如下對話框 4單擊ok按鈕，出現(xiàn)如下兩個對話框，關閉下面一個對話框 關閉下面一個對話框 5. 在對話框的右上角出現(xiàn)一些曲線的名稱，從“1”開始依次點擊曲線名稱，在右下角會出現(xiàn)相應擬合的曲線，。 根據(jù)擬合的曲線選取ELISA擬合度最佳的曲線雙擊，出現(xiàn)如下對話框：注意：選擇系數(shù)（即“r”值）最好的曲線方程來進行運算。在下面的對話框右

2、上角有“r”值 ，當“r”值越接近1擬合度越好 7按Ctrl鍵+L鍵，（或者在上圖的界面上點擊鼠標右鍵，出現(xiàn)analyze選項），出現(xiàn)如下對話框： 8輸入標準的OD值，單擊Calculate按忸，即可得到待測蛋白的實際含量。（標本稀釋了N倍，運算出的數(shù)值應再乘以N）。9. 如想得到ELISA擬合曲線的方程，可在步驟6的對話框空白處右擊，選擇”Information” 10. 得到如下對話框：點擊“Copy”在你需要的位置粘貼即可得到如下數(shù)據(jù)：Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx2)當抗原或抗體濃度過高時，對應的ELISA讀數(shù)不會再顯著升高，這時會達到一個平臺期，同樣在低濃度時也有一個平臺期。只有在適當?shù)臐舛葧r才會出現(xiàn)類似直線的曲線，所以一般數(shù)據(jù)都要進行多參數(shù)擬和，才能得到能更準

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