蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)

1、整理整理ppt1第三章蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)第三章蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)整理整理ppt2蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)一、兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)一、兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)二、膠體性質(zhì)二、膠體性質(zhì)三、變性與復(fù)性作用三、變性與復(fù)性作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用五、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)五、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)六、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)整理整理ppt3一、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈側(cè)鏈上存在游離的上存在游離的氨基氨基和和羧基羧基，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩性解離性質(zhì)，具有特定的性解離性質(zhì)，具有特定的等電點(diǎn)（

2、等電點(diǎn)（pI）。溶液溶液pHpI時(shí)時(shí)，蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷相等；，蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷相等； pHpI時(shí)時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈負(fù)電荷；，蛋白質(zhì)帶凈負(fù)電荷； pHpI時(shí)時(shí)，蛋白質(zhì)帶凈正電荷。，蛋白質(zhì)帶凈正電荷。整理整理ppt4& 等電點(diǎn)時(shí)特點(diǎn)等電點(diǎn)時(shí)特點(diǎn)：（1）凈電荷為零）凈電荷為零（2）一定離子強(qiáng)度的緩沖液：等離子點(diǎn)特征常數(shù)）一定離子強(qiáng)度的緩沖液：等離子點(diǎn)特征常數(shù)（3）多數(shù)蛋白質(zhì)在水中等電點(diǎn)偏酸（較低）多數(shù)蛋白質(zhì)在水中等電點(diǎn)偏酸（較低） 堿性堿性AA/AA/酸性酸性AA AA 等電點(diǎn)等電點(diǎn) 胃蛋白酶胃蛋白酶 0.2 1.00.2 1.0 血紅蛋白血紅蛋白 1.7 6.71.7 6.7 細(xì)胞色素細(xì)胞

3、色素C 2.9 10.7C 2.9 10.7 菊糖酶菊糖酶 0.34 8.20.34 8.2（4）導(dǎo)電性、溶解度、黏度及滲透壓都最小。）導(dǎo)電性、溶解度、黏度及滲透壓都最小。整理整理ppt5蛋白質(zhì)分子在一定蛋白質(zhì)分子在一定pH的溶液中可帶凈的的溶液中可帶凈的負(fù)負(fù)電電荷或荷或正正電荷，故可在電場(chǎng)中發(fā)生移動(dòng)。電荷，故可在電場(chǎng)中發(fā)生移動(dòng)。不同蛋白質(zhì)分子所帶不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷量電荷量不同，且不同，且分子大分子大小小也不同，故在電場(chǎng)中的移動(dòng)速度也不同，也不同，故在電場(chǎng)中的移動(dòng)速度也不同，據(jù)此可互相分離。據(jù)此可互相分離。整理整理ppt6二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)分子的顆粒直徑已蛋白質(zhì)

4、分子的顆粒直徑已達(dá)達(dá)1100nm，處于膠，處于膠體顆粒的范圍。（親水膠體）體顆粒的范圍。（親水膠體）蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)：布朗運(yùn)動(dòng)、丁道蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)：布朗運(yùn)動(dòng)、丁道爾現(xiàn)象、不能透過半透膜、具有吸附力等。爾現(xiàn)象、不能透過半透膜、具有吸附力等。1 1、蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)、蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)整理整理ppt7二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)2 2、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水溶膠的兩個(gè)重要因素：、穩(wěn)定蛋白質(zhì)親水溶膠的兩個(gè)重要因素：|水化膜水化膜 - 通過通過氫鍵氫鍵與水結(jié)合與水結(jié)合|表面電荷表面電荷- 在非等電點(diǎn)狀態(tài)下，在非等電點(diǎn)狀態(tài)下，雙電層雙電層，帶，帶 同性電荷蛋白質(zhì)分子互

5、相排斥。同性電荷蛋白質(zhì)分子互相排斥。 整理整理ppt8蛋白質(zhì)顆粒的表面電荷和水化膜蛋白質(zhì)顆粒的表面電荷和水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用整理整理ppt93.3.蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的應(yīng)用蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的應(yīng)用u滲析（透析）滲析（透析）u超濾超濾二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)二、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)整理整理ppt10三、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性與凝固作用三、蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性與凝固作用&a

6、mp; 在某些物理或化學(xué)因素的作用下，蛋白質(zhì)嚴(yán)格在某些物理或化學(xué)因素的作用下，蛋白質(zhì)嚴(yán)格的的空間結(jié)構(gòu)被破壞空間結(jié)構(gòu)被破壞（肽鍵不斷裂，一級(jí)結(jié)構(gòu)不（肽鍵不斷裂，一級(jí)結(jié)構(gòu)不變），從而引起蛋白質(zhì)若干變），從而引起蛋白質(zhì)若干理化性質(zhì)和生物學(xué)性理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)的改變質(zhì)的改變，稱為蛋白質(zhì)的變性，稱為蛋白質(zhì)的變性(denaturation)(denaturation)。 Whats denaturation of protein?整理整理ppt111 1、變性理論、變性理論 蛋白質(zhì)的變性就是天然蛋白質(zhì)分子中肽鏈的高度蛋白質(zhì)的變性就是天然蛋白質(zhì)分子中肽鏈的高度規(guī)則的緊密排列方式因氫鍵及其他次級(jí)鍵的破壞而變

7、規(guī)則的緊密排列方式因氫鍵及其他次級(jí)鍵的破壞而變成不規(guī)則的松散排列方式。成不規(guī)則的松散排列方式。2 2、引起蛋白質(zhì)變性的因素、引起蛋白質(zhì)變性的因素： 物理因素物理因素： 高溫、高壓、紫外線、電離輻射、超聲波、機(jī)械攪拌高溫、高壓、紫外線、電離輻射、超聲波、機(jī)械攪拌 化學(xué)因素化學(xué)因素： 強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、尿素、胍、重金屬鹽等。強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、有機(jī)溶劑、尿素、胍、重金屬鹽等。變性的因素及作用機(jī)制變性的因素及作用機(jī)制整理整理ppt12 物理性質(zhì)物理性質(zhì)： 旋光性改變，溶解度下降，結(jié)晶能力下降，沉降率升高，旋光性改變，溶解度下降，結(jié)晶能力下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等；粘度升高，光吸收度增加等

8、； 化學(xué)性質(zhì)：化學(xué)性質(zhì)： 官能團(tuán)反應(yīng)性增加，呈色反應(yīng)增強(qiáng)，易被蛋白酶水解。官能團(tuán)反應(yīng)性增加，呈色反應(yīng)增強(qiáng)，易被蛋白酶水解。 生物學(xué)性質(zhì)：生物學(xué)性質(zhì)： 原有生物學(xué)活性喪失，抗原性改變。原有生物學(xué)活性喪失，抗原性改變。 變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)改變變性蛋白質(zhì)的性質(zhì)改變整理整理ppt13&蛋白質(zhì)變性的可逆性復(fù)性：蛋白質(zhì)變性的可逆性復(fù)性：某些蛋白質(zhì)變性后可以在一定的條件下重新形成原來的空某些蛋白質(zhì)變性后可以在一定的條件下重新形成原來的空間結(jié)構(gòu)，并恢復(fù)原來部分理化特性和生物學(xué)活性，這間結(jié)構(gòu)，并恢復(fù)原來部分理化特性和生物學(xué)活性，這個(gè)過程稱為個(gè)過程稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性蛋白質(zhì)的復(fù)性（renaturationren

9、aturation）。蛋白質(zhì)變性的可逆性與復(fù)性蛋白質(zhì)變性的可逆性與復(fù)性 蛋白質(zhì)在體外變性后，絕大多數(shù)情況下不能復(fù)性；蛋白質(zhì)在體外變性后，絕大多數(shù)情況下不能復(fù)性； 如變性程度淺，蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象未被嚴(yán)重破壞；或蛋如變性程度淺，蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象未被嚴(yán)重破壞；或蛋 白質(zhì)具有特殊的分子結(jié)構(gòu)白質(zhì)具有特殊的分子結(jié)構(gòu),并經(jīng)特殊處理則可以復(fù)性。并經(jīng)特殊處理則可以復(fù)性。整理整理ppt14核糖核酸酶的變性與復(fù)性核糖核酸酶的變性與復(fù)性去除變性劑去除變性劑并緩慢氧化并緩慢氧化天然構(gòu)象天然構(gòu)象尿素，尿素， - -巰基乙醇巰基乙醇變性狀態(tài)變性狀態(tài)整理整理ppt15蛋白質(zhì)變性的可逆性與復(fù)性蛋白質(zhì)變性的可逆性與復(fù)性 可逆變性

10、：可逆變性： 變性條件除去后仍可恢復(fù)天然狀態(tài)的變性。變性條件除去后仍可恢復(fù)天然狀態(tài)的變性。 不可逆變性：不可逆變性： 變性條件除去后不能恢復(fù)天然狀態(tài)的變性。變性條件除去后不能恢復(fù)天然狀態(tài)的變性。整理整理ppt16蛋白質(zhì)變性的應(yīng)用蛋白質(zhì)變性的應(yīng)用F 理論上：理論上： 研究蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功能研究蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功能,分子量測(cè)定分子量測(cè)定,亞單位拆分；亞單位拆分；F 生產(chǎn)生活中有利的一面：生產(chǎn)生活中有利的一面： 食品加工，消毒滅菌等；食品加工，消毒滅菌等； 非蛋白生物物質(zhì)提取純化，終止酶促反應(yīng)；非蛋白生物物質(zhì)提取純化，終止酶促反應(yīng)；F 生產(chǎn)生活中不利的一面：生產(chǎn)生活中不利的一面： 活性蛋白制品（酶

11、、抗體）的分離提取和保存；活性蛋白制品（酶、抗體）的分離提取和保存；整理整理ppt17&外加一些因素去除蛋白質(zhì)膠體的穩(wěn)定因素后，使蛋外加一些因素去除蛋白質(zhì)膠體的穩(wěn)定因素后，使蛋白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為沉淀沉淀（precipitation）。1. Whats precipitation of protein?|變性后的蛋白質(zhì)由于疏水變性后的蛋白質(zhì)由于疏水基團(tuán)的暴露而易于沉淀，基團(tuán)的暴露而易于沉淀，但但沉淀的蛋白質(zhì)不一定都沉淀的蛋白質(zhì)不一定都是變性后的蛋白質(zhì)是變性后的蛋白質(zhì)。四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用整理整理ppt182

12、.沉淀種類：沉淀種類：可逆與不可逆可逆與不可逆四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用3.沉淀方法：沉淀方法：| 沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法| 沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法整理整理ppt192.沉淀種類：沉淀種類：可逆與不可逆可逆與不可逆四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用3.沉淀方法：沉淀方法：| 沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法（1 1）鹽析中性鹽沉淀法）鹽析中性鹽沉淀法（2 2）有機(jī)溶劑沉淀法）有機(jī)溶劑沉淀法（3 3）酸沉淀法）酸沉淀法整理整理ppt2

13、0（1）鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀& 鹽溶作用鹽溶作用& 鹽析作用鹽析作用Whats salt precipitation of protein? 蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法整理整理ppt21（1）鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀& 定義定義：在蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽，以：在蛋白質(zhì)溶液中加入大量中性鹽，以破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，使蛋白質(zhì)從溶液中破壞蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀析出，稱為沉淀析出，稱為鹽析（鹽析（salt precipitation）。& 作用機(jī)制作用機(jī)制: 中和電荷的同時(shí)破壞水化膜中和電荷的同時(shí)破壞

14、水化膜; ;Whats salt precipitation of protein? 蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法整理整理ppt22|常用的中性鹽：常用的中性鹽：硫酸銨硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等。、氯化鈉、硫酸鈉等。|鹽析時(shí)，鹽析時(shí)，pH在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好。在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)處效果最好。|鹽析沉淀蛋白質(zhì)通常不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性。鹽析沉淀蛋白質(zhì)通常不會(huì)引起蛋白質(zhì)的變性。|優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)|鹽析應(yīng)用舉例鹽析應(yīng)用舉例（1）鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀 蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法整理整理ppt23& 分段鹽析：分段鹽析： 半

15、飽和半飽和硫酸銨溶液可沉淀分子量較大的血漿硫酸銨溶液可沉淀分子量較大的血漿球蛋白球蛋白, ,而而飽和飽和硫酸銨溶液可沉淀分子量較小硫酸銨溶液可沉淀分子量較小的血漿清蛋白。的血漿清蛋白。因此因此,使用使用不同濃度不同濃度的硫酸銨溶的硫酸銨溶液就可將分子量不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行初步分離。液就可將分子量不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行初步分離。（1）鹽析鹽析中性鹽沉淀中性鹽沉淀整理整理ppt24凡能與水以任意比例混合的有機(jī)溶劑，如乙凡能與水以任意比例混合的有機(jī)溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白質(zhì)。醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白質(zhì)。&沉淀原理：沉淀原理： 脫水作用脫水作用破壞水化膜；破壞水化膜； 使水

16、的介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)溶解度降低。使水的介電常數(shù)降低，蛋白質(zhì)溶解度降低。（2）有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法 蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法整理整理ppt25& 處理?xiàng)l件處理?xiàng)l件： 低溫操作；低溫操作； 沉淀完全后盡快分離；沉淀完全后盡快分離；（2）有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法 蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法& 機(jī)制機(jī)制：破壞電荷，等電點(diǎn)沉淀。破壞電荷，等電點(diǎn)沉淀。（3）酸沉淀法酸沉淀法整理整理ppt26（1 1）重金屬鹽沉淀法）重金屬鹽沉淀法（2 2）生物堿試劑沉淀法（除蛋白作用）生物堿試劑沉淀法（除蛋白作用）

17、（3 3）熱凝固沉淀法）熱凝固沉淀法（4 4）抗體對(duì)抗原蛋白質(zhì)的沉淀）抗體對(duì)抗原蛋白質(zhì)的沉淀3.沉淀方法：沉淀方法：| 沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)仍能保持生物活性的沉淀方法| 沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法沉淀后蛋白質(zhì)失去生物活性的沉淀方法四、蛋白質(zhì)的沉淀作用四、蛋白質(zhì)的沉淀作用整理整理ppt27五、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)五、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)1. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)2. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)3. 考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G2504. 福林酚試劑反應(yīng)福林酚試劑反應(yīng)5. 黃色反應(yīng)黃色反應(yīng)-芳香族氨基酸的特有反應(yīng)芳香族氨基酸的特有反應(yīng)6. 米倫氏反應(yīng)米倫氏反應(yīng)酪氨酸的特有反應(yīng)酪氨

18、酸的特有反應(yīng)7. 乙醛酸反應(yīng)乙醛酸反應(yīng)色氨酸的特有反應(yīng)色氨酸的特有反應(yīng)8. 坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)精氨酸特有的反應(yīng)精氨酸特有的反應(yīng)整理整理ppt28六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)1. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng) 兩分子雙縮脲與堿性硫酸銅作用，生成兩分子雙縮脲與堿性硫酸銅作用，生成粉紅色復(fù)合物粉紅色復(fù)合物 含有兩個(gè)或兩個(gè)以上含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵肽鍵的化合物，能發(fā)生同樣反應(yīng)的化合物，能發(fā)生同樣反應(yīng) 肽鍵的反應(yīng)，肽鍵越多顏色越深，肽鍵的反應(yīng)，肽鍵越多顏色越深，粉紅，紫紅，藍(lán)紫粉紅，紫紅，藍(lán)紫 受蛋白質(zhì)特異性影響小受蛋白質(zhì)特異性影響小 蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程度蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程

19、度整理整理ppt29六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)2. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng) 靈敏度差。靈敏度差。3.考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G-250|本身為棕色，與蛋白質(zhì)反應(yīng)呈藍(lán)色本身為棕色，與蛋白質(zhì)反應(yīng)呈藍(lán)色|與蛋白的親和力強(qiáng)，靈敏度高與蛋白的親和力強(qiáng)，靈敏度高|1-10001-1000微克微克/ /毫升毫升整理整理ppt30六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)4. 福林酚試劑反應(yīng)福林酚試劑反應(yīng)r酪氨酸、色氨酸的反應(yīng)（還原反應(yīng)）酪氨酸、色氨酸的反應(yīng)（還原反應(yīng)）r福林試劑：磷鉬酸福林試劑：磷鉬酸- -磷鎢酸磷鎢酸r與雙縮脲法結(jié)合與雙縮脲法結(jié)合-Lowry法法在堿性條件下，蛋白質(zhì)與硫酸銅發(fā)生反應(yīng)在

20、堿性條件下，蛋白質(zhì)與硫酸銅發(fā)生反應(yīng)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)- -銅絡(luò)合物，將福林試劑還原，產(chǎn)生銅絡(luò)合物，將福林試劑還原，產(chǎn)生磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物靈敏度提高靈敏度提高100100倍倍整理整理ppt31六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)5. 黃色反應(yīng)黃色反應(yīng)-芳香族氨基酸芳香族氨基酸的特有反應(yīng)的特有反應(yīng)|濃硝酸與濃硝酸與酪氨酸、色氨酸酪氨酸、色氨酸的反應(yīng)的反應(yīng)|生成黃色化合物生成黃色化合物|指甲、皮膚、毛發(fā)指甲、皮膚、毛發(fā)6. 米倫氏反應(yīng)米倫氏反應(yīng)酪氨酸酪氨酸的特有反應(yīng)的特有反應(yīng)| 酪氨酸的顯色反應(yīng)（酚羥基反應(yīng)）酪氨酸的顯色反應(yīng)（酚羥基反應(yīng)）| 米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝米

21、倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物酸汞的混合物| 蛋白溶液中，加入米倫試劑，產(chǎn)生白色沉蛋白溶液中，加入米倫試劑，產(chǎn)生白色沉淀，加熱后變成紅色淀，加熱后變成紅色整理整理ppt32六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)7. 乙醛酸反應(yīng)乙醛酸反應(yīng)色氨酸色氨酸的特有反應(yīng)的特有反應(yīng)|在蛋白質(zhì)溶液中加在蛋白質(zhì)溶液中加入入HCOCOOH，將，將濃硫酸沿管壁緩慢加入，不使相混，濃硫酸沿管壁緩慢加入，不使相混，在液面交界處，即有紫色環(huán)形成在液面交界處，即有紫色環(huán)形成|色氨酸的反應(yīng)（吲哚環(huán)的反應(yīng)）色氨酸的反應(yīng)（吲哚環(huán)的反應(yīng)）|鑒定蛋白質(zhì)中是否含有色氨酸鑒定蛋白質(zhì)中是否含有色氨酸|明膠中不含色氨酸明膠

22、中不含色氨酸整理整理ppt33六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)六、蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)8. 坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)精氨酸精氨酸特有的反應(yīng)特有的反應(yīng)|精氨酸的反應(yīng)（胍基的反應(yīng)）精氨酸的反應(yīng)（胍基的反應(yīng)）|精氨酸與精氨酸與-萘酚在堿性次氯酸鈉（或次萘酚在堿性次氯酸鈉（或次溴酸鈉）溶液中發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生紅色產(chǎn)物溴酸鈉）溶液中發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生紅色產(chǎn)物|鑒定蛋白質(zhì)中是否含有精氨酸鑒定蛋白質(zhì)中是否含有精氨酸|定量測(cè)定精氨酸定量測(cè)定精氨酸整理整理ppt34七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)七、蛋白質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)y大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酪氨酸和色氨酸。y這三種氨基酸在這三種

23、氨基酸在280nm 附近有最大吸收。附近有最大吸收。因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm 附近顯示附近顯示強(qiáng)的吸收?？梢詫?duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量強(qiáng)的吸收?？梢詫?duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。檢測(cè)。 y蛋白質(zhì)濃度蛋白質(zhì)濃度（mg/ml） =1.45A2800.74A260整理整理ppt35蛋白質(zhì)的分離純化蛋白質(zhì)的分離純化整理整理ppt36一、分離純化的基本方法一、分離純化的基本方法1 1、鹽析與等電點(diǎn)沉淀、鹽析與等電點(diǎn)沉淀-根據(jù)根據(jù)溶解度溶解度不同分離不同分離2 2、層析法、層析法離子交換層析法離子交換層析法-根據(jù)根據(jù)電荷電荷不同分離不同分離凝膠過濾法凝膠過濾法-根據(jù)根據(jù)分子量、分子形狀

24、分子量、分子形狀不同分離不同分離親和層析親和層析-根據(jù)根據(jù)特異性親和力特異性親和力不同分離不同分離3 3、梯度離心法、梯度離心法整理整理ppt372、層析、層析層析（層析（chromatography）是一種利用混合物中是一種利用混合物中各組分理化性質(zhì)的差異，在相互接觸的兩相各組分理化性質(zhì)的差異，在相互接觸的兩相（固定相與流動(dòng)相）之間的分布不同而進(jìn)行分（固定相與流動(dòng)相）之間的分布不同而進(jìn)行分離分析的技術(shù)方法。離分析的技術(shù)方法。Whats chromatography?整理整理ppt38主要的層析技術(shù)有主要的層析技術(shù)有離子離子交換層析交換層析，凝膠層析凝膠層析，吸附層析吸附層析及及親和層析親和層析等。等。整理整理ppt39離子交換層析分離蛋白質(zhì)離子交換層析分離蛋白質(zhì)整理整理ppt40凝膠過濾分離蛋白質(zhì)凝膠過濾分離蛋白質(zhì)整理整理ppt413、超速離心：、超速離心：利用物質(zhì)密度的不同，經(jīng)超速離心后，分布于利用物質(zhì)密度的不同，經(jīng)超速離心后，分布于不