HPLC法流動相選擇及相濃度比例對頭孢克肟分散片含量測定分析

1、HPLC法流動相選擇及相濃度比例對頭孢克肟分散片含量測定分析作者：曾榮華,盧慧嫻,鄧雪媚【摘要】目的：建立高效液相色譜法測定頭孢克肟分散片的含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。方法：色譜柱：LunaC18(250mm4.6mm，5m)，四丁基氫氧化銨溶液乙腈(7030)為流動相，檢測波長為254nm。流速1.0mLmin，進樣量：10L，柱溫：40。結(jié)果：頭孢克肟在進樣量25300mg/L的范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好；回歸方程：Y=3.65104X-1.25104，r=0.9998()。有關(guān)物質(zhì)在進樣量1501500mg/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；回歸方程：Y=578103X-36103，r=0.9998。結(jié)論：本

2、法試劑易得，樣品處理簡便，分析快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以作為頭孢克肟分散片的含量及有關(guān)物質(zhì)測定方法?！娟P(guān)鍵詞】頭孢克肟；分散片；高效液相色譜法；含量Take a pain for a pleasure all wise men can. ABSTRACTObjective:Toestablishanhighperformanceliquidchromatography(HPLC)forquantitativedeterminationofdispersibletabletsandrelatedsubstances.Methods：CefiximewasseparatedonODScolumnwi

3、thmobilephaseoftetrabutylammoniumhydroxidesolution：acetonitrile(70:30)anddetectedatpulsedetectionof254nm.Theflowratewas1.0mL/min,andthecolumntemperaturewas40;Injectionvolumewas10L.Results:Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof25300mg/Landtheregressionequationwas:Y=3.65104X1.25104r=0.9998incefixim

4、e.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof1501500mg/LandtheregressionequationwasY=578103X36103andr=0.9998intherelatedsubstances.Conclusions：Theabovementionedmethodissimple，rapid，accurate，andreliable,thuscanbeusedforquantitativedeterminationofdispersibletabletsandrelatedsubstances.KEYWORDSCefixime;D

5、ispersibletablets;Highperformanceliquidchromatography(HPLC);relatedsubstances;Concentration頭孢克肟(cefixime)為內(nèi)酰胺類的抗生素，是第3代廣譜口服頭孢菌素，對革蘭陽性菌和革蘭陰性菌均有抗菌活性。USP29版和BP2004年版均已收載本品。具有抗菌譜廣、半衰期長、用藥劑量小、適應(yīng)證廣，療效好、不良反應(yīng)輕等突出特點1。對多種致病菌有較強的抗菌活性和良好的藥代動力學(xué)特征，治療下呼吸道感染有顯著療效2。且因其對胃酸穩(wěn)定，可以口服給藥，患者依從性好，可以作為一個較好的抗感染治療的轉(zhuǎn)換用藥3,4(醫(yī)藥學(xué)/臨

6、床醫(yī)學(xué)論文 )。頭孢克肟制劑中降解產(chǎn)物較多，加上其他輔料的干擾，使用紫外法進行含量測定并不恰當(dāng)。本實驗采用高效液相色譜法測定頭孢克肟分散片含量及有關(guān)物質(zhì)，實驗結(jié)果表明，本法操作簡便，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠?，F(xiàn)報道如下。1材料與方法The farmers are the founders of civilization and prosperity. 1.1儀器與試劑惠普Agilentl100高效液相色譜儀，Agilentl100型紫外檢測器，LC20AT智能泵，北京塞多利斯天平有限公司BP211D電子分析天平，北京譜析通用儀器有限公司TU1800SPC型紫外可見分光光度計。10四丁基氫氧化銨(

7、分析純，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司)；甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)；乙腈(色譜純，天津市康科德科技有限公司。頭孢克肟分散片(規(guī)格為50mg片，批號為20080305，20080416，20080503，廣州白云山制藥有限公司)；頭孢克肟對照品(批號為20070202，中國藥品生物制品檢定所)。When love puts in, friendship is gone. 1.2方法1.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗A thing is bigger for being shared. 色譜柱：LunaC18(250mm4.6mm，5m)；柱溫：40。四丁基氫氧化銨溶液的配制：取10

8、四丁基氫氧化銨溶液25mL用高純水稀釋至1000mL，搖勻，用1.5mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0。以四丁基氫氧化銨溶液乙腈(7030)為流動相，流速1.0mLmin，進樣量：10L，檢測波長：254nm，理論板數(shù)按頭孢克肟計算應(yīng)不低于1500mg。精密稱取頭孢克肟對照品適量，用水溶解并稀釋成每1mL中含頭孢克肟100g的溶液，置95水浴中加熱45min后冷卻，產(chǎn)生頭孢克肟異構(gòu)體。經(jīng)用選定方法分析，與主峰達到了良好的分離5,6。1.2.2溶液的制備對照品溶液：精密稱定頭孢克肟對照品，加磷酸緩沖液(取磷酸6.8mL加水稀釋至300mL，用10mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，加水稀釋至1000

9、mL，混勻)溶解并定量稀釋成0.2mg/mL的溶液（必要時超聲處理使溶解完全）。供試品溶液：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于頭孢克肟40mg)置200mL量瓶中，加磷酸緩沖液適量，于65水浴15min，冷卻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品。稱取處方量的空白輔料(除主藥頭孢克肟以外的成分)，參照2005年版中國藥典(2部)附錄項下干燥恒重試驗，得到空白對照品，按供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照品溶液。有關(guān)物質(zhì)：參照供試液的制備，制成含頭孢克肟1.0mgmL的溶液。論文既是探討問題進行科學(xué)研究的一種手段，又是描述科研成果進行學(xué)術(shù)交流的一種工具. 2結(jié)果In a great ri

10、ver great fish are found; but take heed lest you be drowned. 2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 2.1.1含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線取頭孢克肟對照品適量，然后磷酸緩沖液使溶解，再分別定量稀釋成10，25，50，100，200mg/L5種濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別取20L進樣，各濃度進樣3次，以濃度對峰面積進行線性回歸?；貧w方程：Y=3.65104X-1.25104，r=0.9998。結(jié)果表明，頭孢克肟在進樣量25300mg/L的范圍內(nèi)，峰面積與進樣量之間呈良好的線性關(guān)系。論文教育信息網(wǎng) 2.1.2有關(guān)物質(zhì)檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線Quality is better than

11、 quantity. 取頭孢克肟對照品適量，然后磷酸緩沖液使溶解，再分別定量稀釋成100，200，300，400，500mg/L5種濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別取20L進樣，各濃度進樣3次，以濃度對峰面積進行線性回歸?；貧w方程：Y=578103X-36103，r=0.9998。結(jié)果表明，頭孢克肟在進樣量1501500mg/L的范圍內(nèi)，峰面積與進樣量之間呈良好的線性關(guān)系。Early mistakes are the seeds of future trouble. 2.2回收率試驗配制0.16，0.20，0.24mg/mL3個不同濃度的溶液各3份，混勻。按照“1.2.2”項下制備對照品溶液，分別精密量

12、取此液及對照品溶液各10L注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，求得平均回收率(n=9)。輔料對測定均無干擾。結(jié)果見表1。表1回收率與精密度測定結(jié)果（略）Everybodys business is nobodys business. 2.3樣品的測定取本品研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于頭孢克肟25mg)置25mL量瓶中，加磷酸緩沖液適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照“2.1.1”項下的方法測定，結(jié)果見表2。表2樣品含量測定（略）Throw away the apple because of the core. 3討論查閱有關(guān)資料，頭孢克肟含量測定有

13、紫外分光光度法和高效液相色譜法，筆者對2種方法均進行了測定，通過比較，高效液相色譜法效果更好。流動相的選擇USP29版和BP2004年版，均采用四丁基氫氧化銨與乙腈系統(tǒng)進行色譜分離，但是四丁基氫氧化銨的濃度較高，系統(tǒng)不容易穩(wěn)定而且分離效果不好。試驗比較了水相有機相為52；水相有機相為775225；水相有機相為21三組流動相。結(jié)果表明，流動相為四丁基氫氧化銨溶液(取10四丁基氫氧化銨溶液25mL用高純水稀釋至1000mL，搖勻，用1.5mol/L磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0)乙腈(7030)最佳，且本法離子對試劑四丁基氫氧化銨用量較少。頭孢克肟樣品的甲醇和磷酸鹽緩沖溶液在紫外/可見光分光光度計上于190

14、400nm間掃描，在288nm處有最大吸收峰，但因中國藥典頭孢類藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定時檢測波長多選擇254nm，且USP29版和BP2004年版亦選擇254nm作為HPLC測定波長，同時我們通過實驗發(fā)現(xiàn)，選擇254nm作為檢測波長亦可檢出各個雜質(zhì)，同時獲得較大的線性范圍，可一次進樣完成含量和有關(guān)物質(zhì)的同時測定。使用254nm作為頭孢克肟含量測定的波長，靈敏度更高，測定結(jié)果更穩(wěn)定、可靠，與文獻報道一致7。本文建立的測定頭孢克肟膠囊分散片及有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜分析方法，分析時間短，峰形窄且無拖尾現(xiàn)象，理論塔板數(shù)較高，具有分析快速準(zhǔn)確的特點，且操作簡便，所需試劑易得，適用于頭孢克肟的制劑生產(chǎn)的質(zhì)量控制。曾榮華等.HPLC法流動相選擇及相濃度比例對頭孢克肟分散片含量測定分析【參考文獻】1廖慶權(quán),陳彩云,朱軍.頭孢克肟用于治療小兒呼吸道感染的調(diào)查分析J.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2008,2(24):4445.2房玉環(huán).頭孢菌素序貫治療細菌性下呼吸道感染的成本效果分析J.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2008,29(11):13181319.3李小榮.口服頭孢克肟用于轉(zhuǎn)換治療的國內(nèi)現(xiàn)狀J中國抗生素雜志,2008,33(8):506508.4車薇,張韶峰,王紅,等.頭孢克肟臨床治療呼吸道細菌感染療效評價J中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(7