進境檢疫性有害生物_寄生帚梗柱孢霉

1、2014 年第 4 期植物檢疫 PLANT QUARANTINEdisease， 1963， 53:532-540.Vol.28 No. 4under different temperature regimes. Advances in Strawberry Research， 2004， 22: 26-33.Vico I. Investigation of anastomosis groups of binucleate 11Rhizoctonia spp. isolated from strawberries. Phytopathologia Mediterranea， 1994，33 (

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4、npeng1,2, Pan Ruqian1*, Xu Dagao1, Deng Mingguang3, Ding Sanyin2 (1. South China Agricultural University, Guangzhou 510642,China; 2. Houma Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau; 3. Plant Protection Research Institute, Guangdong Academy of Agricultural Sciences)Abstract Cylindrocladium parasiti

5、cum, the causal agent of Cylindrocladium black rot (CBR) of peanut, is one of worldwide plant pathogen severely attacking peanut and soybean, and also listed as important quarantine plants pathogen of China. The morphological characteristics, biological features, diagnosis characteristics and quaran

6、tine measures of Cylindrocladium parasiticum are provided in present paper to fully understand the economic importance and to give a reference for further research, inspection and control of this pathogen.Key words Cylindrocladium black rot of peanut; Cylindrocladium parasiticum; morphological chara

7、cteristics; biological characteristics; diagnosis characteristics; quarantine measurement摘要 寄生帚梗柱孢霉(Cylindrocladium parasiticum Crous, Wingfield & Alfenas)是嚴重危害花生和大豆產(chǎn)業(yè)的重要病原真菌，在我國被列為重要的進境植物檢疫性有害生物。本文介紹了寄生帚梗柱孢霉的形態(tài)特征、生物學特性、診斷特征及檢疫措施，以期使讀者較全面地了解寄生帚梗柱孢霉的經(jīng)濟重要性，為進一步研究、檢疫和防治該種病原菌提供參考。寄生帚梗柱孢霉；形態(tài)特征；生物學特性；

8、診斷特征；檢疫措施關鍵詞 花生黑腐??；中圖分類號 S41-30 寄生帚梗柱孢霉(Cylindrocladium parasiticum Crous, Wing eld & Alfenas)可侵染花生(Arachis hypogaea L.)引起花生黑腐病(Cylindrocladium black rot of peanut, CBR)。花生黑腐病具有危害嚴重、傳播迅速和較難防治的特點。該病害最早于1965年在美國喬治亞州首次報道，至今已蔓延擴散到美國多個花生種植區(qū)，對美國的花生產(chǎn)業(yè)造成嚴重威脅1-4。寄生帚梗柱孢霉還可侵染大豆(Glycine max (L.) Merr. )引起大豆

9、紅冠腐病(Red crown rot of soybean，RCR)。大豆紅冠腐病最早于1968年在日本千葉縣首次發(fā)現(xiàn)，至2001年該病已蔓延至包括北海道在內(nèi)的日本全境5-7。2007年，我國將寄生帚梗柱孢霉列入中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄中。在該檢疫 76 2014 年第 4 期植物檢疫 PLANT QUARANTINEVol.28 No. 4名錄中使用了“花生黑腐病菌”的中文名稱，是因為在寄生帚梗柱孢霉引起的各種病害中花生黑腐病最為嚴重。2010年，廣東省農(nóng)業(yè)廳將該病原菌增列入廣東省農(nóng)業(yè)植物檢疫性有害生物補充名單8。由于還未出版寄生帚梗柱孢霉的檢疫鑒定標準，植檢工作者對該病原菌

10、現(xiàn)場檢疫和診斷鑒定時較難操作。本文介紹了寄生帚梗柱孢霉的形態(tài)特征、生物學特性、診斷特征及檢疫措施，并提供病原菌和病害的相關圖片，以期為植物檢疫同行提供參考。1 分類地位8-9Cylindrocladium parasiticum 無性階段學名：Crous, Wing eld & Alfenas。無性階段中文名：寄生帚梗柱孢霉、寄生柱枝孢、花生黑腐病菌。Cylindrocladium crotalariae 無性階段舊稱：(Loos) Bell & Sobers寄生帚梗柱孢霉隸屬于有絲分裂孢子真菌類 (Mitosporic fungi)，絲孢綱(Hyphomycetes)，絲孢目

11、(Hyphomycetales)，絲孢科(Hyphomycetaceae)，帚梗柱孢屬(Cylindrocladium)。Calonectria ilicicola (Boedijn 有性階段學名：& Reitsma)。有性階段中文名：冬青麗赤殼菌。Calonectria crotalariae (Loos) 有性階段舊稱：Bell & Sobers冬青麗赤殼菌隸屬于子囊菌門(Ascomycota)，子囊菌綱(Ascomycetes)，糞殼菌亞綱(Sordariomycetidae)，肉座菌目(Hypocreales)，叢赤殼科(Nectriacea)，麗赤殼屬(Calonec

12、tria)。2 地理分布8-10目前主要分布在美國、澳大利亞、日本、韓國、印度尼西亞、斯里蘭卡、巴西、澳大利亞、喀麥隆、洪都拉斯。3 自然寄主9-13花生(Arachis hypogaea L.)、大豆(Glycine max (L.) Merr.)、藍莓(Vaccinium corymbosum L.)、番木瓜(Carica papaya L.)、夏威夷寇阿相思木(Acacia koa Gray)、 ua L.)、北美楓香(Liquidambar styraci紅葉火筒樹(Leea coccinea Planch)、夾竹桃(Nerium oleander L.)、獼猴桃樹(Actinidia

13、 chinensis Planch)、南美山螞蝗(Desmodium tortuosum (Sw.) DC)、決明(Senna obtusifolia L.)、鷓鴣豆(Cassia fasciculate Michx)、西印度櫻桃(Malpighia glabra L.)、豪威椰子(Howea belmoreana Becc.)、紅掌(Anthurium andraeanum Linden)、月桂樹(Laurus nobilis L.)、鱷梨(Persea americana Mill.)。4 形態(tài)特征14微菌核：寄生帚梗柱孢霉的菌絲體可形成許多成串的厚垣孢子和深褐色的微菌核(圖1)。子囊殼：

14、呈梨形或倒卵形，單生，橙紅色至深紅色，大小為337.5609.4 m× 309.4496.9 m。挑取子囊殼制作玻片，輕壓后可見大量子囊噴出，子囊棍棒狀，具長柄，內(nèi)含8個子囊孢子(圖2)。子囊孢子：呈紡錘至鐮刀形，略彎曲，兩端鈍圓，13個分隔，大小為27.354.5 m× 4.16.8 m。分隔處常有縊縮(圖8)。泡囊：菌絲末端膨大形成球形的泡囊，直徑為5.510.9 m(圖3)。分生孢梗：呈掃帚狀，二叉或三叉分支，孢梗頂端為產(chǎn)孢細胞，瓶狀(圖3)。分生孢子：呈圓柱形，直立，無色，13個分隔，多為3個，大小為27.370.9 m× 4.16.8 m(圖4)。圖1

15、寄生帚梗柱孢霉的微菌核圖2 寄生帚梗柱孢霉的子囊和子囊孢子 77 2014 年第 4 期植物檢疫 PLANT QUARANTINEVol.28 No. 4圖3 寄生帚梗柱孢霉的分生孢子梗和泡囊5 生物學特性15-16培養(yǎng)特性：寄生帚梗柱孢霉在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上產(chǎn)生白色至鵝黃色菌絲(圖5)，菌落平伏，質(zhì)地致密，并產(chǎn)生褐色至深褐色的色素滲入到培養(yǎng)基中(圖6)。寄生帚梗柱孢霉在V8汁培養(yǎng)基產(chǎn)生的微菌核、分生孢子和子囊殼最多。溫度影響：寄生帚梗柱孢霉在1030范圍內(nèi)均能生長，當溫度低于5或高于35時，菌絲完全停止生長。在溫度介于1028范圍內(nèi)，隨著圖4寄生帚梗柱孢霉的分生孢子形態(tài)溫度的升高，菌絲

16、生長速率加快。最適生長溫度為2528。微菌核形成的最適溫度為2530。在12以下和32以上溫度條件下均不形成微菌核。分生孢子形成的最適溫度為28。子囊殼形成較適宜溫度為2830，其他溫度條件下不產(chǎn)生子囊殼。光照影響：光照對菌絲生長沒有顯著影響。連續(xù)光照對分生孢子形成有抑制作用。光暗交替對分生孢子形成有促進作用。圖5 寄生帚梗柱孢霉的菌落形態(tài)(背面) 圖6 寄生帚梗柱孢霉的菌落形態(tài)(正面)6 診斷特征6.1 花生黑腐病與易混淆病害花生黑腐病癥狀：花生染病后葉片退綠變黃、后期萎蔫，隨后整個植株迅速枯萎(圖7)。罹病植株莖基部和根系變黑腐爛，病株莖基部、果針和豆莢上可產(chǎn)生大量成簇橙紅色至深紅色子囊殼

17、14 78 (圖8)。最后整個植株萎蔫死亡?；ㄉ诟拿缙谥脸墒炱诮钥砂l(fā)生，苗期發(fā)病往往不結(jié)莢果即已死亡，成株期發(fā)病可產(chǎn)生帶菌種子?；ㄉN子可帶病傳播，此為花生黑腐病遠距離傳播的主要途徑。帶菌花生果莢變黑(圖9)，種子表面可攜帶大量的菌絲和微菌核17-19(圖10)。2014 年第 4 期植物檢疫 PLANT QUARANTINEVol.28 No. 4圖7花生黑腐病的田間癥狀圖8 花生黑腐病病株莖基部橙紅色子囊果圖9 花生黑腐病的染病果莢 圖10 花生黑腐病的染病花生易混淆病害：在田間診斷和鑒定時，花生基腐病(Peanut foot rot)與花生黑腐病較難區(qū)分?；ㄉ〉牟≡乔止苄鲁?/p>

18、殼菌(Neocosmosporavasinfecta E. F. Smith)，其典型癥狀是罹病花生植株的莖基部和根系腐爛，病株莖基部、主根和果莢上可產(chǎn)生成簇的粉紅色的子囊殼。兩種病害區(qū)別在于，花生黑腐病的子囊殼比花生新赤殼基腐病的子囊殼顏色更深、更紅20。6.2 大豆紅冠腐病與易混淆病害大豆紅冠腐病癥狀：大豆染病后病株頂端葉片變黃，許多葉片的脈間組織變成淡褐色，后期萎蔫、落葉，染病植株莖基部變紅(圖11)，溫度適宜時，莖基部可產(chǎn)生大量橙紅色子囊殼(圖12)，氣溫低則不產(chǎn)生子囊殼，最終根系變黑腐爛，植株死亡21。大豆紅冠腐病是一種由土壤傳播的病害，不能通過種子攜帶病原菌。圖11 大豆紅冠腐病的

19、田間癥狀 圖12 大豆紅冠腐病病株莖基部橙紅色子囊果圖11 大豆紅冠腐病的田間癥狀 79 2014 年第 4 期植物檢疫 PLANT QUARANTINEVol.28 No. 4易混淆病害：侵管新赤殼菌(Neocosmospora vasinfecta E. F. Smith)和血紅叢赤殼(Nectria haematococca Berk et Br.)可侵染大豆莖稈產(chǎn)生橙紅色子囊殼，酷似大豆紅冠腐病。侵管新赤殼菌為害大豆可引起大豆新赤殼菌莖腐病(Soybean Neocosmospora Stem rot)。血紅叢赤殼則是茄腐鐮孢菌(Fusarium solani)的有性階段，在自然狀態(tài)下

20、較少產(chǎn)生。幾種病原菌的區(qū)別在于：大豆紅冠腐病染病植株的莖基部一定會變紅，但不一定會產(chǎn)生子囊殼。而另外兩種真菌侵染大豆后，大豆莖基部不會變紅22-23。7 檢疫措施(1)現(xiàn)場查驗：對來自疫區(qū)的花生進行檢疫時，首先要仔細觀察花生種皮表面是否有肉桂色或深棕色斑點。這些斑點可能是寄生帚梗柱孢霉的菌絲體或微菌核。發(fā)現(xiàn)疑似攜帶病原菌的病種后，需進行分離培養(yǎng)。將帶斑種子在流水下沖洗1 min，切成小塊，在0.26%的次氯酸鈉溶液表面消毒1 min，移至含有五氯硝基苯、噻菌靈、金霉素、氯霉素、氯硝胺的選擇性培養(yǎng)基中室溫下培養(yǎng)觀察17-19。對大豆紅冠腐病染病植株進行分離鑒定時，常采用組織分離方法。首先，將采集

21、到的帶病大豆植株沖洗干凈，從大豆莖基部病健交界處切下0.5 cm大小的組織，經(jīng)75%乙醇處理1 min后，用0.5%次氯酸鈉表面消毒3 min，在滅菌水中漂洗3次后去除組織表面多余水分，置于加有0.1%硫酸鏈霉素的PDA平板上，于25培養(yǎng)48 h挑取菌落邊緣菌絲進行純化。最后，進行單孢分離純化，獲得單孢菌株。(2)土壤檢疫：將土壤過篩后，用加有抗生素的選擇性培養(yǎng)基可分離出該病原菌的微菌核。這些抗生素包括噻菌靈、氯霉素、金霉素、鏈霉素、五氯硝基苯、噻苯咪唑和氟酰胺24-25。(3)分子鑒定：寄生帚梗柱孢霉的分子生物學鑒定主要采用微管蛋白基因(-tubulin)、組蛋白基因(His3)、鈣調(diào)素基因

22、(Cal)、EF翻譯延伸因子(EF-1)。其中，微管蛋白基因是寄生帚梗柱孢霉分子鑒定最為常用的基因26-27。分子鑒定常用引物詳見表1。表1 寄生帚梗柱孢霉分子鑒定的常用引物列表基因名稱組蛋白基因鈣調(diào)素基因EF翻譯延伸因子引物名稱Bt2bCylHIS3FCylHIS3RCAL-228FCAL-737REF1-728FEF-2引物序列5-AACATGCGTGAGATTGTAAGT-3'5'-ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3'5'-AGGTCCACTGGTGGCAAG-3'5'-AGCTGGATGTCCTTGGACTG-3'

23、;5'-AGGTCCACTGGTGGCAAG-3'5'-CATCTTTCTGGCCATCATGG-3'5'-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3'5'-GGARGTACCAGTSATCATGTT-3'(4)熏蒸處理：溴甲烷是檢疫熏蒸、土壤消毒的首選熏蒸劑。溴甲烷，又稱溴代甲烷或甲基溴，是一種無色無味的液體。它具有強烈的熏蒸作用，能高效、廣譜地殺滅各種有害生物。它對土壤具有很強的穿透能力，能穿透到土壤病原菌內(nèi)，從而達到消滅各種病蟲害的目的。但是，溴甲烷對人和動物有嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)損害。溴甲烷也會侵蝕臭氧層，嚴重破壞大

24、氣層，破壞地球生態(tài)環(huán)境。我國環(huán)保部門推薦氯化苦、威百畝、石灰氮等化學品替代溴甲烷進行土壤消毒。在國外文獻報道中，威百畝的土壤熏蒸效果最好，可顯著防控花生黑腐病 28-29。 80 參考文獻1 Bell D K， Sobers E. A peg， pod， and root necrosis of peanutscaused by a species of Calonectria. Phytopathology， 1966， 56: 1361-1364.2 Rowe R C， Beute M K， Wells J C. Cylindrocladium black rot ofpeanuts in

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