細(xì)菌酵母菌霉菌和放線菌接種方法和形態(tài)觀察

1、細(xì)菌酵母菌霉菌和放線 菌接種方法和形態(tài)觀案 注意：由于實(shí)驗(yàn)內(nèi)容較多， 所以我們只要把藍(lán)色字體局部寫(xiě)在實(shí)驗(yàn) 報(bào)告上即可，黑體字局部自己看 一下。由于 11-13 周為教學(xué)質(zhì)量檢 查周，督導(dǎo)隨時(shí)可能來(lái)查，所以預(yù)習(xí) 報(bào)告還是要寫(xiě)。細(xì)菌、酵母菌、放線菌和真菌接種方法和形態(tài)觀察一、微生物的接種技術(shù)1目的1.1 學(xué)習(xí)掌握微生物的兒種接種技術(shù)1.2 建立無(wú)菌操作的概念，掌握無(wú)菌操作的基 本環(huán)節(jié)2根本原理將微生物培養(yǎng)物或含有微生物的樣品在無(wú)菌條件下移植到培養(yǎng)基上 的法有操作技 術(shù)稱(chēng)為 接種。接種的關(guān)鍵是嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。常用的接種方 斜面接種、 液體 接種、穿刺接種、平板接種和固體接種等。3 實(shí)驗(yàn)材料3.1菌

2、種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、 啤酒酵母、 玫瑰暗黃鏈球菌、 曲霉、 尊麻青霉的斜面培養(yǎng)物 3.2培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基及高氏1 號(hào)培 養(yǎng)基的斜面和平板3.3試劑： 5ml 無(wú)菌生理鹽水試管3.4儀器與其他用品酒 精燈、記號(hào)筆、試管、 橡 膠塞、試管架、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、超凈臺(tái)等。4操作步驟4.1 斜面接種法斜面接種法主要用于傳代活化、純化培養(yǎng)、鑒定或保存菌種。通常 先 從平板培養(yǎng)基上挑取別離的單個(gè)菌落，或挑取斜面，液體培養(yǎng)基中的 純培 養(yǎng)物接種到斜面培養(yǎng)基上。 操作應(yīng)在無(wú)菌室、 接種柜或超凈工作臺(tái) 上進(jìn)行。將菌種斜面培養(yǎng)基簡(jiǎn)稱(chēng)菌種管與待接種的新鮮斜面培養(yǎng)基簡(jiǎn)稱(chēng)接 種管持

3、在左手拇指、食指、中指及無(wú)名指之間，菌種管在外側(cè)，接種管 在 內(nèi)側(cè)，斜面向上管口對(duì)齊，并能清楚地看到兩個(gè)試管的斜面，注意不 要持 成水平，以免管底凝集水浸濕培養(yǎng)基外表。右手持接種環(huán)柄，將接種環(huán)垂直放在火焰上灼燒。線銘絲局部環(huán) 和 絲必須燒紅，以到達(dá)滅菌目的，然后將除手柄局部的金屬桿全用火 焰灼 燒一遍。 用右手的小指和手掌之間及無(wú)名指和小指之間撥出試管棉塞，將試 管 口在火焰上通過(guò)，以殺滅可能沾污的微生物。將灼燒滅菌的接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，先接觸無(wú)菌苔生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上，待冷卻后再?gòu)男泵嫔瞎稳∩僭S菌苔取出。接種環(huán)不能通過(guò)火焰，應(yīng)在火焰旁迅速插入接種管。不同種類(lèi)微生 物 的接種方式各異，具體如下：1細(xì)

4、菌和放線菌 由斜面培養(yǎng)基底部自下而上來(lái)回做 “Z密集劃 線， 勿劃破培養(yǎng)基。 2真菌 菌落為局限性生長(zhǎng)的曲霉、青零等采用 上下涂 布法接種。菌落為擴(kuò)散性生長(zhǎng)的根霉、毛霉等采用點(diǎn)植法接種。4.1.6 塞管塞和接種環(huán)滅菌 接種完畢，將接種環(huán)抽出，灼燒管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔 細(xì) 灼燒接種環(huán)后， 放回原處，并塞緊棉塞。將接種管做好標(biāo)記后放入試 管架， 即可進(jìn)行培養(yǎng)。4. 2平板接種法平板接種法就是用接種環(huán)將菌種或用無(wú)菌吸管將定量菌液接種至平 板 培養(yǎng)基的方法，主要用于觀察菌落特征、別離純化菌種和平板活菌計(jì)數(shù)。其接種方式有傾注接種、涂布接種、劃線接種和點(diǎn)植接種。4. 2.1 傾注平板法 1 傾注

5、平板 無(wú)菌條件下取適量菌液傾注于平皿中。 2 倒平板 將滅菌好的培養(yǎng)基倒入平皿， 并迅速輕輕旋動(dòng)平皿， 使培 養(yǎng)基與菌液充分混勻3 培養(yǎng)培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1倒平板 將滅菌好的培養(yǎng)基倒入平皿。2涂布平板無(wú)菌條件下吸取菌液滴加于平板培養(yǎng)基外表中心位置，左手持平皿并將皿蓋翻開(kāi)一縫，右手持涂布棒將菌懸液自平板中央以同 心圓 方向輕輕向外涂布擴(kuò)散，使之分布均勻，靜置 5-10min,使菌液浸入 培養(yǎng)基。3培養(yǎng) 培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4. 2. 3平板劃線法1 倒平板 將滅菌好的培養(yǎng)基倒入平皿。2平板劃線通過(guò)劃線使樣品在平板上形成單個(gè)菌落。 連續(xù)劃線法 用于稀釋液

6、見(jiàn)下列圖右 分區(qū)劃線法 用于較濃的菌樣 本實(shí)驗(yàn)細(xì)菌、 酵母菌、 放線菌采用此 方法， 下列圖左注意：接種環(huán)勿劃破培養(yǎng)基， 劃線不宜重疊，要疏密適中。此法適用于觀察霉菌的菌落特征 見(jiàn)下列圖。用接種環(huán)蘸少許無(wú)菌生 理 鹽水，挑取斜面上少量菌絲或抱子，以三個(gè)角三點(diǎn)的形式輕輕點(diǎn)種于 平板 培養(yǎng)基上。接種時(shí)最好倒置平皿，以免霉菌抱子飛揚(yáng)。4. 3 液體接種法介紹多用于增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng)，也可用純培養(yǎng)菌接種液體培養(yǎng)基進(jìn)行 生化試驗(yàn)，其操作方法與考前須知與斜面接種法根本相同，僅將不同點(diǎn) 如下： 由斜面培養(yǎng)物接種至液體培養(yǎng)基： 用接種環(huán)從斜面上沾取少 許菌苔， 接至液體培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)在管內(nèi)靠近液面試管壁上將菌苔輕

7、輕研磨 并輕輕振蕩， 或?qū)⒔臃N環(huán)在液體內(nèi)振搖兒次即可。如接種霉菌菌種時(shí)， 假設(shè)用接種環(huán)不易 挑起培養(yǎng)物時(shí)，可用接種鉤或接種鏟進(jìn)行。由液體培養(yǎng) 物接種液體培養(yǎng)基 時(shí)，可用接種環(huán)或接種針沾取少許液體移至新液體培 養(yǎng)基即可。也可根據(jù) 需要用吸管、滴管或注射器吸取培養(yǎng)液移至新液體 培養(yǎng)基即可。接種液體 培養(yǎng)物時(shí)應(yīng)特別注意勿使菌液濺在工作臺(tái)上或其 他器皿上， 以免造成污染。 如有濺污，可用酒精棉球灼燒滅菌后，再用 消毒液擦凈。凡吸過(guò)菌液的吸 管或滴管，應(yīng)立即放入盛有消毒液的容器 內(nèi)。4.4 穿刺接種法此法多用于半固體、醋酸鉛、三糖鐵瓊脂與明膠培養(yǎng)基的接種，操 作 方法與考前須知與斜面接種法根本相同。但必

8、須使用筆直的接種針 , 而不能 使用接種環(huán)。 接種柱狀高層或半高層斜面培養(yǎng)管時(shí)， 應(yīng)向培養(yǎng)基 中心穿刺， 一直插到接近管底，再沿原路抽出接種針。注意勿使接種針 在培養(yǎng)基內(nèi)左 右移動(dòng)，以使穿刺線整齊，便于觀察生長(zhǎng)結(jié)果。4.5 固體接種法普通斜面和平板接種均屬于固體接種， 斜面接種法已講了， 不再贅 述。 固體接種的另一種形式是接種固體曲料，進(jìn)行固體發(fā)酵。按所用菌 種或種 子菌來(lái)源不同可分為：用菌液接種固體料，包括用菌苔刮洗制成 的菌懸液 和直接培養(yǎng)的種子發(fā)酵液。接種時(shí)按無(wú)菌操作將菌液直接倒入 固體料中，量之內(nèi)，否那么攪拌均勻。但要注意接種所用水容量要計(jì)算在固體料總加水 會(huì)使接種后含水量加大，影響

9、培養(yǎng)效果。用固體種子接種 固體料。包括用 抱子粉、菌絲抱子混合種子菌或其他固體培養(yǎng)的種子 菌。將種子菌于無(wú)菌 條件下直接倒入無(wú)菌的固體料中即可，但必須充分 攪拌使之混合均勻。一 般是先把種子菌和少局部固體料混勻后再拌大堆 料。二、形態(tài)與菌落特征觀察1目的要求D 觀察并描述出細(xì)菌、酵母菌、放線菌、真菌的平板菌落特征群體形態(tài)。2 了解其菌落在其形態(tài)學(xué)鑒定上的重要性。3了解觀察酵母菌、 放線菌、常見(jiàn)霉菌形態(tài)特征 個(gè)體形態(tài) 的根本 方 法。2根本原理 1 各種細(xì)菌在平板上形成的菌落均具有一定特征， 其菌落一般較濕 潤(rùn)、 光滑、透明、易挑起、 菌落正反面及邊緣、中央部位的顏色一致， 且菌落 質(zhì)地較均勻等

10、， 菌落往往較小， 較薄且有“細(xì)膩感。它對(duì)細(xì)菌 的分類(lèi)、 鑒定有重要的意義。 2 酵母菌菌落一般亦較濕潤(rùn)、 光滑、易挑起、菌落正反面及邊緣、 中 央 部位的顏色一致， 但其菌落一般比細(xì)菌大、厚而且透明度較差。酵母 菌是多形的、不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞微生物，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)已有明顯的分化，菌體比細(xì)菌大， 一般成圓形、橢圓形、柱形和藕節(jié)形等。本 實(shí)驗(yàn) 用水一碘液浸片來(lái)觀察生活的酵母形態(tài) 3 放線菌菌落局限生長(zhǎng)， 小而薄，多為圓形， 邊緣有輻射狀， 外觀呈 干 燥、不透明的絲狀、絨毛狀或皮革狀等特征。 由于營(yíng)養(yǎng)菌絲伸入培養(yǎng) 基中 使菌落和培養(yǎng)基連接緊密，故菌絲不易被挑起。一般情況下，菌落 中心的 顏色常比邊緣

11、深，由于氣生菌絲、抱子和營(yíng)養(yǎng)菌絲顏色不同，常使菌落正反面呈不同顏色。放線菌可用水浸片法在顯微鏡下觀察其形態(tài)。 放線菌是由不同長(zhǎng)短 的 纖細(xì)的菌絲所形成的單細(xì)胞菌絲體。菌體分為兩局部，即潛入培養(yǎng)基 中的 營(yíng)養(yǎng)菌絲或稱(chēng)基內(nèi)菌絲和生長(zhǎng)在培養(yǎng)基外表的氣生菌絲。有 些氣生菌 絲分化成各種砲子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。泡子常 呈圓形、橢 圓形或桿形。氣生菌絲及砲子的形狀和顏色常作為分類(lèi)的重 要依據(jù)。4霉菌的菌落大而疏松， 由于泡子不同的形狀， 構(gòu)造和顏色， 菌落表 面 往往呈現(xiàn)不同的結(jié)構(gòu)和色澤， 菌落在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)呈棉絮狀 毛 爲(wèi)、 蜘蛛網(wǎng)狀根霉 、 絨毛狀曲霉和地毯狀青霉 。爲(wèi)菌的營(yíng)養(yǎng)體是分枝

12、的絲狀體。其個(gè)體比細(xì)菌和放線菌大得多，分 為 基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的泡子。霉菌菌絲比擬粗大菌絲和抱子的直徑達(dá)到3 A10Pm，通常是細(xì)菌菌體寬度的兒倍至兒十倍?？刹捎萌樗崾妓崦匏{(lán)浸片法來(lái)觀察其形態(tài)。3 實(shí)驗(yàn)材料3.1菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黃鏈球菌、 曲零、 尊麻青霉的平板培養(yǎng)物3. 2培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基及高氏 1號(hào)培養(yǎng) 基。3. 3試劑與染色劑： 0. 85%生理鹽水、革蘭氏染色用碘液、 0.1%美藍(lán)染色 液、 乳酸 石碳酸棉藍(lán)染色液、 50%乙醇等。3. 4儀器或其它用具： 接種

13、針、 載玻片、蓋玻片、銀子、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。4操作步驟4.1 菌落特征的觀察細(xì)菌菌落的描述菌落大?。捍缶?5mm以上、中等菌落 3-5mm、小菌落1-2mm、露滴狀菌落1mm 下 菌落形狀：圓形、放射狀、假根狀、不 規(guī)那么等菌落顏色：乳白色、灰白色、金黃色、粉紅色等 菌落質(zhì)地：黏稠、脆硬等菌落外表形態(tài)：有光滑、皺褶、放射狀、根狀等 菌落邊緣形態(tài)：有整齊、波狀、絲狀、鋸齒狀、裂葉狀等形態(tài)菌落隆起形態(tài)：有扁平、隆起、草帽狀、膠狀等 透明度：可分為秀明、半透明、不透明等酵母菌菌落形態(tài)的描述： 可參照細(xì)菌4.1.3 放線菌和霉菌菌落的描述：菌落大小：分局限生長(zhǎng)和蔓延生長(zhǎng)，用格尺測(cè)量菌落的直

14、徑和高度狀、菌落外表的形態(tài)：粗糙、同心圓、輻射狀溝紋、粉狀、絨毛狀或皮革 疏松或緊密、有無(wú)水滴等。菌落顏色：菌落正面顏色包括氣生菌絲或泡子顏色；菌落反面顏色指營(yíng)養(yǎng)菌絲顏色；有否水溶性色素色素會(huì)滲入培養(yǎng)基中，使菌落 周 圍的培養(yǎng)基改變顏色。菌落的組織形狀：棉絮狀、蜘蛛網(wǎng)狀、絨毛狀和地毯狀。4. 2 個(gè)體形態(tài)特征的觀察4. 2.1 酵母菌的形態(tài)觀察水- 碘液浸片法 在載破片中央加 1 小滴革蘭氏染色用碘液，然后在其上加 3小滴水，取少許酵母菌苔于水 - 碘液中混勻，蓋上蓋玻片后鏡 檢。1 插片：在平板的一半面積劃線接種， 在接種線上將蓋玻片 1/2 長(zhǎng)度 以 45°角插入瓊脂，平板另一半先插片，然后將少量放線菌泡子接種于蓋玻片與瓊脂相接的沿線。平板倒置 28°C 培養(yǎng) 3-5天。2 0. 1%美藍(lán)染色液染色：取 1滴染液置于載玻片中央，將上述平板中 的蓋玻片取出，將有菌的一面向下以 45°角浸于載玻片的染色液中避 免氣 泡。 3 鏡檢：用高倍鏡觀察其單個(gè)分生泡子及其基內(nèi)菌絲。 1 制片：在干凈的載玻片上加一滴