補腎益智湯對老年癡呆模型大鼠治療作用的實驗研究

1、補腎益智湯對老年癡呆模型大鼠治療作用的實驗研究<    【關(guān)鍵詞】   補腎益智湯老年癡呆模型超氧化物歧化酶丙二醛學(xué)習(xí)記憶大鼠Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of BushenYizhi decoction on learning memory,superoxide dismutase（SOD）and mal Ei c dialdehyde（MDA） in Alzh EI mer's disease rats.  MethodsThe AD model of mic

2、e was established by the injection of A25-35 into the lateral cerebral ventricle and  was given Dgalactose, sc . low, middle, high(5,10,20g/kg·d)  doses of BushenYizhi decoction were orally administered.The learning  and memory  ability of the AD model rats were detected by

3、8-arm radial  maze test. The activity of SOD and the MDA  in serum were examined by colorimetric method.ResultsHigh dose of BushenYizhi decoction could decrease  reference  memory error(RME) in AD rats  ( P0.05）,reduce working  memory  error(WME),and  improve

4、the activity of SOD (P<0.01). Middle and high doses of BushenYizhi decoction could decrease the content of MDA(P<0.01).ConclusionBy reducing the level of free radicals may be the mechanisms in treating Alzheimer's rats with Bushenyizhi decoction.Key words： BushenYizhi decoction； 

5、 Alzheimer'  sdisease model； SOD；MDA；  Learning and memory；  Rats    老年癡呆即“阿爾茨海默病”(Alzheimers Disease ，AD) 是一種進行性神經(jīng)退行性疾病,伴有認知及行為障礙,多發(fā)生在中、老年人群中。隨著人口老齡化的加劇,AD 的發(fā)病率不斷升高,給 社會 和患者家庭帶來沉重負擔。因此,如何防治AD 日益成為研究 熱點 。由于AD 的病因病機尚未明確,所以目前對該病尚無特效藥物。中 醫(yī)學(xué) 具有悠久的 歷史 ,其豐富的藥物種類為AD 治療藥物篩選

6、提供了一個龐大的資源庫。補腎益智湯主要由熟地、生龜板、人參、山藥、黃精、牛脊髓、山茱萸、云苓、丹皮、澤瀉組成，該方具有滋補而不留邪、降瀉而不傷正，以補為主，泄中寓補的特點，體現(xiàn)了通過調(diào)節(jié)機體整體生理機能的平衡而發(fā)揮治療作用的 科學(xué) 指導(dǎo)思想。組方以補腎陰為基礎(chǔ)使腎精腦髓有源,據(jù)素問·陰陽應(yīng)象大論：“形不足者,溫之以氣;精不足者,補之以味”,“陽為氣,陰為味 ”,故而該方主要以補腎陰為主。又因“人始生,先成精,精成而腦髓生”,可知腦為陰津物質(zhì)所成,所以補腎填精,腎精充盛,腦髓得養(yǎng),才能使智有生。該方已運用 臨床 多年,療效顯著。本次實驗通過觀察補腎益智湯對老年癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶、血清

7、中超氧化物歧化酶、丙二醛的影響，以對補腎益智湯用于AD藥效學(xué)作用作出科學(xué)評價。 1  材料 1.1  動物Wistar大鼠，購自 中國 醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，許可證編號為SCXK（京）0089322，2004-0001。雌雄各半共72只，體質(zhì)量200250 g。1.2  藥物和試劑  補腎益智湯（熟地、生龜版、人參、山藥、黃精、牛脊髓、山茱萸、云苓、丹皮、澤瀉）以上藥物除牛脊髓（購自食品店）外均購自山西省中醫(yī)藥研究院，在山西省中醫(yī)藥研究院中心實驗室制成含生藥2 g/ml的水溶液，4冰箱保存。D-半乳糖：北京化工廠，批號070404，用

8、時以無菌生理鹽水配成5%溶液；尼莫地平：天津市中央藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：070911，用時以蒸餾水配成0.075%混懸液；注射用青霉素鈉；華北制藥股份有限公司，批號：F0712102；A25-35：美國Sigma公司，027k4797，臨用前將A25-35溶于無菌生理鹽水中，終濃度為2 g/L，密封后置于37培養(yǎng)箱中144 h；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號：20081121；丙二醛（MDA）試劑盒：南京建成生物工程研究所，批號：20080825。1.3  儀器電熱恒溫水溫箱：HHW21，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；旋渦混合器：FZQ2，江蘇泰縣醫(yī)療器械廠制造

9、；離心機: KDC1044，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；721分光光度計:上海第三分析儀器廠；腦立體定位儀:國營西北光學(xué)儀器廠；生化培養(yǎng)箱: LRH150B，廣東省醫(yī)療器械廠； 電子 天平: BP-310S，德國塞多利斯；八臂迷宮分析測試儀：RM200，成都泰盟科技有限公司。 2  方法 2.1  老年癡呆模型制備大鼠頸背部皮下注射D-半乳糖50 mg/(kg.d) 1,連續(xù)6周,第7周側(cè)腦室注射A25-352。大鼠戊巴比妥鈉（45 mg/kg）麻醉后，固定于腦立體定位儀上，頭頂部正中切口，暴露前囟，參照大鼠腦立體定位圖譜3，以前囟為參照點，在前囟點后1.3 mm,旁開

10、2 mm將用5 ml注射針頭鉆一小孔，垂直插入10 l微量注射器，深度4.0 mm（達側(cè)腦室），緩慢注射5 l聚集態(tài)的A25-35,注射時間持續(xù)10 min,留針5 min,注射完畢后，局部撒復(fù)方新諾明藥粉防止感染，縫合頭皮，術(shù)后肌肉注射青霉素每只5萬單位，連續(xù)4 d。對照組頸背部皮下注射等量生理鹽水，第7周側(cè)腦室注射無菌生理鹽水，操作同前。側(cè)腦室注射后，對照組存活11只大鼠，側(cè)腦室注射A25-35后大鼠共存活56只。2.2  動物分組及給藥側(cè)腦室注射后，除對照組外，造模動物隨機分為癡呆模型對照組（以下簡稱模型對照組）、尼莫地平片陽性對照組（以下簡稱尼莫地平組，15 mg/kg）、補

11、腎益智湯低劑量組（5 g/kg）、補腎益智湯中劑量組（10 g/kg）、補腎益智湯高劑量組（20 g/kg）。術(shù)后第2天開始灌胃，按20 ml/kg灌胃量 計算 ，1次/d，對照組和模型組給予等量蒸餾水，連續(xù)6周。2.3  八臂迷宮行為學(xué)測定灌胃第6周開始八臂迷宮訓(xùn)練4，放射狀八臂（四臂放食物）是一種經(jīng)典的測定動物空間記憶的方法，它可以同時檢測動物的參考記憶和工作記憶。迷宮中央?yún)^(qū)直徑30cm,向四周以等角度和等長度延伸八條臂。訓(xùn)練前大鼠先在迷宮中適應(yīng)1 d，適應(yīng)時3至4只大鼠同時置于迷宮中，自由活動和攝取食物10 min。適應(yīng)后進行每1次的訓(xùn)練。每次訓(xùn)練時，八臂中只有四臂放置了食物（分別為3，5，6和8臂），整個實驗過程均維持此順序。大鼠放在迷宮中央?yún)^(qū)，此時中央?yún)^(qū)四周用門關(guān)住15 s將門打開，大鼠可選擇進入任意一臂，以攝取食物。大鼠進入有食物的臂且攝取了食物為1次正確選擇，否則為錯誤選擇。記錄參數(shù)為錯誤選擇的次數(shù)。重新進入放食物臂稱為工作記憶錯誤（working  memory  error,WME）,進入不放食物臂稱為參考記憶錯誤(reference   memory