醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗：膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定

1、醫(yī)學(xué)生物學(xué)實驗醫(yī)學(xué)生物學(xué)實驗醫(yī)學(xué)微生物教研室醫(yī)學(xué)微生物教研室 2011年6月實驗八實驗八膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容l膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定膿汁標(biāo)本中金黃色葡萄球菌的鑒定 目的目的l熟悉臨床標(biāo)本中常見化膿性細菌的分離鑒定程熟悉臨床標(biāo)本中常見化膿性細菌的分離鑒定程序；掌握細菌分離培養(yǎng)的基本技術(shù)。序；掌握細菌分離培養(yǎng)的基本技術(shù)。實驗器材實驗器材l標(biāo)本：膿拭子、感染分泌物或模擬膿汁標(biāo)本l菌種：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物、表皮葡萄球菌l培養(yǎng)基：血瓊脂平板、甘露醇發(fā)酵管l其他：血漿、生理鹽水、革蘭染液、玻片、滴管 培養(yǎng)箱、 酒精燈、接種環(huán)等檢查原則檢查原則l 在膿汁標(biāo)本中，以化膿性球

2、菌最為常見，本實 驗主要檢測金黃色葡萄球菌 l用藥前采集標(biāo)本 l無菌操作標(biāo)本檢測程序標(biāo)本檢測程序 膿汁、膿性分泌物（未知菌液/固體培養(yǎng)物）涂 片革蘭染色鏡 檢血瓊脂平板接種直接菌落觀察血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵診斷報告檢查方法和結(jié)果報告檢查方法和結(jié)果報告 l直接顯微鏡檢查：取標(biāo)本直接涂片，均勻涂成菌膜，自然干燥，固定后革蘭染色，油鏡觀察。l注：若染色后未發(fā)現(xiàn)細菌，可報告“直接鏡檢未發(fā)現(xiàn)細菌” 革蘭染色鏡檢革蘭染色鏡檢 形態(tài)形態(tài) 排列排列 染色性染色性 金黃色金黃色 葡萄球菌葡萄球菌檢查方法和結(jié)果報告檢查方法和結(jié)果報告 l細菌分離培養(yǎng)：取膿液或創(chuàng)傷分泌物接種于血瓊脂平板上（接種后4保存），劃線分離

3、，37培養(yǎng)1824h后，觀察菌落特征，取單個菌落進行革蘭染色鏡檢。l注：第2天觀察記錄結(jié)果；如培養(yǎng)4872h后仍然無菌生長，則報告“無細菌生長”。 血平板培養(yǎng)結(jié)果觀察血平板培養(yǎng)結(jié)果觀察 菌落特點菌落特點 溶血性溶血性 菌落顏色菌落顏色金黃色金黃色葡萄球菌葡萄球菌檢查方法和結(jié)果報告檢查方法和結(jié)果報告l血漿凝固酶試驗（玻片法）： l用滅菌接種環(huán)取標(biāo)本和白葡菌（陰性對照）培養(yǎng)物少許，分別與玻片左右二側(cè)的生理鹽水制成均勻菌懸l于玻片玻片左右二側(cè)菌懸液中各加血漿一滴并輕輕搖勻l13分鐘內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)顆粒狀凝集為血漿凝固酶試驗陽性，否則為陰性結(jié)果報告： 標(biāo)本標(biāo)本+ +血漿血漿 白葡菌白葡菌+ +血漿血漿陽性（陽性（+ +）/ /陰性（陰性（）檢查方法和結(jié)果報告檢查方法和結(jié)果報告l甘露醇發(fā)酵試驗：無菌操作取標(biāo)本和白葡菌（陰性對照）培養(yǎng)物分別接種于甘露醇發(fā)酵管，其上覆蓋無菌液體石蠟油，37培養(yǎng)1824小時，觀察結(jié)果。金葡菌發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基變混充，顏色由紫色變黃色，是為甘露醇發(fā)酵試驗陽性，而白葡菌相反。l注：第2天觀察記錄結(jié)果 標(biāo)本標(biāo)本+ +甘露醇甘露醇 白葡菌白葡菌+ +甘露醇甘露醇 陽性（陽性（+