hplc法測定龍芪柔肝膠囊中丹參酮‖a的含量

1、 畢業(yè)論文HPLC法測定龍芪柔肝膠囊中丹參酮A的含量 系 別：生物技術(shù)系 班 級：中藥制藥2班 姓 名： 學(xué) 號： 指導(dǎo)老師： 目錄 摘要1. 前言 1.1龍芪柔肝膠囊簡介（3） 1.2處方分析（3） 1.3中藥藥理學(xué)分析（3） 1.4 小結(jié)（3）2.正 文 2.1.儀器與試藥（3） 2.1.1儀器(3) 2.1.2試藥(3) 2.2.方法與結(jié)果 (3) 2.2.1 對照品溶液的制備 (3) 2.2.2供試品溶液的制備 (4) 2.2.3色譜條件(4) 2.2.4線性關(guān)系的考察(4) 2.2.5精密度試驗(yàn) (4) 2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) (4) 2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) (4) 2.2.8加樣回收率

2、試驗(yàn)(4) 2.2.9樣品的含量測定（4）3.討 論3.1 檢測波長的選擇（4） 3.2 色譜條件的選擇（4） 3.3 提取方法的選擇（4） 3.3.1 藥品預(yù)處理（5） 3.3.2 供試品溶液的提?。?） 3.3.3 供試品的篩選（5）4.參考文獻(xiàn)（5）5.致謝（5）HPLC法測定龍芪柔肝膠囊中丹參酮A的含量摘 要 目的：建立HPLC法測定龍芪柔肝膠囊中丹參酮A含量的方法。方法：選用Anjilent C18柱（250mm×4.6mm,5um）,以甲醇：水（20:80）為流動相，流速1.0ml·min-1,檢測波長270nm,柱溫25。結(jié)果：丹參酮IIA 在16.96152

3、.64ugml間呈良好的線性關(guān)系(R2=0.99969),平均加樣回收率為101.32%（RSD=2.8n=5）；結(jié)論：該方法快速、準(zhǔn)確、精密，可用于龍芪柔肝膠囊的質(zhì)量控制。關(guān)鍵字：HPLC法；龍芪柔肝膠囊；丹參酮IIADetermination of TanShinone Tong A in the LongQi Capsules by HPLCABSTRACT Objective: To establish an HPLC method for the TanShinone Tong A in the LongQi Capsules. Method :The analysis was pe

4、rformed on a column of Anjilent C18 （250mm×4.6mm,5um）.The mobile phase consisted of methanol and water （20:80）with the flow rate of 1.0ml·min-1.The detection wavelength was 270nm and the column temperature was 25 . Result: Promising linearity was obtained within the range of 16.96152.64ugm

5、l for TanShinone Tong A . The average recovery of TanShinone Tong A was R2=0.99969. Conclusion :This method is rapid and accurate and can be used to control the quality of TanShinone Tong A.KEY WORDS : HPLC ; TanShinone Tong A ; LongQi Capsules1. 前 言1.1龍芪柔肝膠囊簡介 龍芪柔肝膠囊為信陽市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，由黃芪、丹參、黨參、 生地黃、北沙參、當(dāng)

6、歸、地龍、醋白芍、鱉甲、黃精、五味子、靈芝、桃仁、紅花、炒穿山甲共15位中藥制備而成。主治慢性病毒性肝炎，肝纖維化、肝硬化等癥。具有益氣養(yǎng)陰，活血柔肝的功效。方中地龍有較強(qiáng)的異味，穿山甲屬名貴藥材以打粉入藥。因膠囊劑具有能夠掩蓋藥物不良臭味，載藥量大的特點(diǎn)，故選用膠囊劑4。1.2處方分析方中以黃芪、地龍為君藥，以丹參、當(dāng)歸、生地黃、北沙參、黨參為臣藥。方中黃芪甘溫入脾肺經(jīng)，補(bǔ)中氣、升清陽，益肺氣、實(shí)皮毛，以扶正；地龍同入肝脾經(jīng)，息風(fēng)止痙，通絡(luò)，以開血脈阻滯，二者共為君藥。丹參、當(dāng)歸并用，生血、活血且化瘀、通絡(luò)而不傷血；生地、北沙參并用，滋陰而又養(yǎng)陰；黨參補(bǔ)氣以行血；五者共為臣藥。取君二臣五，奇

7、之制之意。五味子、醋白芍共同輔助君藥抑陽斂陰，以柔肝；鱉甲、黃精、靈芝共用助君藥滋補(bǔ)肝陰。五者共為佐藥。桃仁、紅花活血祛瘀，穿山甲消腫排膿，三者共同引藥歸經(jīng)，均為使藥。本方為補(bǔ)中益氣湯（脾胃論）和補(bǔ)陽還五湯（醫(yī)林改錯(cuò)）的復(fù)合方。一為補(bǔ)氣，一為活血祛瘀，二者并用以達(dá)到益氣養(yǎng)陰、活血柔肝的功效5。1.3 中藥藥理學(xué)分析 黃芪主含多糖類和皂苷類成分，能增強(qiáng)非特異性免疫功能，包括增加WBC和中性粒細(xì)胞、Mø吞噬功能。地龍?zhí)崛∥锟诜?，對小鼠S180和H22均有抑瘤作用，并可增強(qiáng)5-Fu受體活化，從而增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性。丹參中主含丹參酮A ，丹參酮A 磺酸鈉可抑制心肌收縮力，降低竇房結(jié)自律性，能

8、促進(jìn)肝、骨、皮膚等多種組織的修復(fù)與再生，其中促進(jìn)肝組織的修復(fù)與再生尤為顯著3。因此丹參酮A 也是本藥的重要和關(guān)鍵性成份。1.4 小結(jié)本文重點(diǎn)探索了HPLC法測定龍芪柔肝膠囊中丹參酮A含量時(shí)方法的建立及優(yōu)化，為全面評價(jià)該制劑質(zhì)量和完善本復(fù)方制劑的質(zhì)量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.正 文2.1.儀器與試藥2.1.1儀器Agilent-1200液相色譜儀(美國Agilent公司，Agilent-1200檢測器，Agilent工作站)；Waters-1525液相色譜儀（Waters公司， Waters2489柱溫箱 Breeze工作站）；普利賽斯雙量程電子天平(美國塞利普斯公司)；超純水機(jī)（基因型185OD重慶摩

9、爾制水設(shè)備）；超聲儀（寧波新芝生物科技）。2.1.2試藥丹參酮A對照品（規(guī)格：20mg支，110766-2021 18，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，美國Agilent公司）；龍芪柔肝膠囊（信陽市中醫(yī)院制劑室，規(guī)格：60粒瓶，批號：20210410 、20210512 、20210823）；水（信陽市藥檢所中藥實(shí)驗(yàn)室制水機(jī)，一級水）；其他試劑均為分析純。2.2.方法與結(jié)果2.2.1 對照品溶液的制備 取丹參酮A對照品10.6mg置25ml容量瓶中，精密稱定，加甲醇定容。用1ml移液管移取配置好的對照品溶液，另置25ml容量瓶中，加甲醇定容，即得。配得的對照品溶液濃度為16.96ugm

10、l.2.2.2供試品溶液及陰性樣品的制備 取本藥品5份，每份3.2g，精密稱定。分別置同型號250ml具塞錐形瓶中，各加入25ml甲醇。精密稱定。超聲提取30min。放至室溫，精密稱定，用甲醇補(bǔ)足損失的量。過濾，取續(xù)濾液，即得。模擬處方的制備方法，制備不含丹參的陰性樣品，按供試品制備方法制備成陰性樣品溶液。表1 取樣量 超聲前 超聲后 補(bǔ)足后1號實(shí)驗(yàn) 3.1873 116.3690 116.3269 116.36422號實(shí)驗(yàn) 3.1770 112.2992 1123.2871 112.29313號實(shí)驗(yàn) 3.1933 94.3075 94.2945 94.30214號實(shí)驗(yàn) 3.2188 104.

11、3507 104.3348 104.35205號實(shí)驗(yàn) 3.1842 88.1713 88.1548 88.17482.2 .3色譜條件 色譜柱：Agilent C18柱（250mm×4.6mm,5um）；流動相：以甲醇：水（20:80）為流動相；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：270nm；柱溫：25。理論板數(shù)按丹參酮A峰計(jì)算應(yīng)不低于2021 。分離度1.5；龍芪柔肝膠囊中其他成分對丹參酮A含量的測定無影響。 1.對照品 2.供試品 3.缺丹參對照品2.2.4線性關(guān)系的考察精密吸取配置好的丹參酮A對照品溶液1ul、3ul、5ul、7ul、9ul注入高效液相色譜儀，依法

12、測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），以進(jìn)樣量（ug）為橫坐標(biāo)（X）,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明丹參酮A在16.96152.64ugml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為：Y=5759589X-101938;R2=0.99969.進(jìn)樣量 進(jìn)樣量（g） 保留時(shí)間 峰面積 %面積 1微升 15.511 2573.0000 75.463微升 15.537 183679.0000 82.315微升 15.511 383743.0000 91.797微升 15.504 580916.0000 97.889微升 15.496 781003.0000 91.912.2.5精密度試驗(yàn)取中間上述2.5對照品注入高效液

13、相，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣5ul。記錄丹參酮A峰面積，結(jié)果丹參酮ARSD=1.69(n=5)2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號供試品，按2.3項(xiàng)下方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣，測定峰面積，計(jì)算丹參酮A的平均含量為0.081·g-1，其RSD=2.67 （n=5）。2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、3、6、9h按上述色譜條件試驗(yàn)，記錄丹參酮A峰面積積分值，結(jié)RSD=3；表明供試品溶液在9h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.2.8加樣回收率試驗(yàn)精密稱定已測定含量的樣品（16.96 ugml），共取5份，每份3.2g，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別精密加入丹參酮A對照品儲備液1ml，進(jìn)樣。

14、計(jì)算丹參酮A含量并計(jì)算回收率為101.32%RSD=2.8(n=5)。2.2.9樣品的含量測定取3批龍芪柔肝膠囊樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備，并按上述色譜條件測定丹參酮A含量。結(jié)果=0.081·g-13.討 論3.1 檢測波長的選擇經(jīng)過Agilent-1200 三維圖譜分析，發(fā)現(xiàn)在270nm,275nm處均有吸收峰，且吸收系數(shù)均較大，考慮到龍芪柔肝膠囊藥味比較復(fù)雜，對丹參酮A的檢測容易產(chǎn)生干擾，因此選擇檢測波長為270nm。3.2 色譜條件的選擇曾用甲醇：水（25:75）作為流動相1，但丹參酮A峰形有拖尾，用于定量分析不準(zhǔn)確。經(jīng)過試驗(yàn)，調(diào)整流動相為甲醇：水（20:80）。峰形

15、明顯改善。影響峰形的因素是否還與其他因素（如pH）有關(guān)，尚需進(jìn)一步研究。3.3 提取方法的選擇3.3.1 藥品預(yù)處理取龍芪柔肝膠囊4份，每份3.2g，精密稱定。分別置250ml具塞錐形瓶中。編號為回1、回2、超1、超2。各瓶精密加入甲醇50ml,稱定重量。 3.3.2 供試品溶液的提取 對回1進(jìn)行30min回流提取，對回2進(jìn)行45min回流提取。對超1進(jìn)行超聲30min超聲提取，對超2進(jìn)行45min超聲提取1。3.3.3 供試品的篩選將上述四瓶供試品放至室溫，精密稱定，補(bǔ)足損失的量，過濾。取續(xù)慮液，用HPLC進(jìn)行檢定。發(fā)現(xiàn)30min時(shí)即提取完全。且超聲提取優(yōu)于回流提取。4.參考文獻(xiàn)1國家藥典委

16、員會.中華人民共和國藥典.一部s.北京;中國醫(yī)藥科技出版社,2021：2張德欽.中藥分析制劑技術(shù).北京.中國中醫(yī)藥出版社3方泰惠.吳清和.中藥藥理學(xué).北京.科學(xué)出版社4陳瓊.中藥制劑技術(shù).北京.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社5王均寧.薛建國.方劑學(xué).北京.科學(xué)出版社6凌一揆.中藥學(xué).上海.上海科學(xué)技術(shù)出版社7唐麗琴，張善堂，陳象青，等.HPLC法測定不同來源補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量m.中國藥師，2021，(3):3773785.致謝 陽春三月，草長鶯飛，這春天過后我也就要畢業(yè)了。畢業(yè)論文的收稿也為我的大學(xué)生活畫上了一個(gè)圓滿的句號。本論文的寫作得益于我的實(shí)習(xí)帶教老師劉菊，在此向她表示深深的感謝。在

17、論文寫作期間還曾得益于藥檢所。老師的指導(dǎo)，一并表示感謝。在學(xué)校期間還曾受教于。老師，在此一并表示感謝。此論文在寫作期間還曾受到。同學(xué)的幫助，在此一并表示感謝。在論文寫作期間還曾受其他諸多老師、同仁、同學(xué)的幫助，在此一并表示感謝。 公司印章管理制度一、目的 公司印章是公司對內(nèi)對外行使權(quán)力的標(biāo)志，也是公司名稱的法律體現(xiàn)， 因此，必須對印章進(jìn)行規(guī)范化、合理化的嚴(yán)格管理，以保證公司各項(xiàng)業(yè)務(wù)的正常運(yùn)作，由公司指定專人負(fù)責(zé)管理。二、印章的種類1、 公章，是按照政府規(guī)定，由主管部門批準(zhǔn)刻制的代表公司權(quán)力的印章。2、 專用章，為方便工作專門刻制的用于某種特定用途的印章，如：合同專用章、財(cái)務(wù)專用章、業(yè)務(wù)專用章、

18、倉庫簽收章等。 3、手章(簽名章)，是以公司法人代表名字刻制的用于公務(wù)的印章。三、印章的管理規(guī)定1、 印章指定專人負(fù)責(zé)保管和使用，保管印章的地方(桌、柜等)要牢固加鎖，印章使用后要及時(shí)收存。2、 財(cái)務(wù)專用章由財(cái)務(wù)部負(fù)責(zé)保管，向銀行備案的印章，應(yīng)由財(cái)務(wù)部會計(jì)、總經(jīng)辦分別保管。 3、印章要注意保養(yǎng)，防止碰撞，還要及時(shí)清洗，以保持印跡清晰。4、一般情況下不得將印章攜出公司外使用，如確實(shí)因工作所需，則應(yīng)由印章管理員攜帶印章到場蓋章或監(jiān)印。 5、印章管理人員離職或調(diào)任時(shí)，須履行印章交接手續(xù)。四、公章刻制印章需本公司法人代表批準(zhǔn)，并由印章管理專責(zé)人負(fù)責(zé)辦理刻制并啟用并交由專人進(jìn)行保管。 五、印章的使用1、 使用任何的印章，需由相應(yīng)負(fù)責(zé)人審核簽字。為方便工 作，總經(jīng)理可授權(quán)印章管理專責(zé)人審核一般性事務(wù)用印。2、 用印前印章管理人員須認(rèn)真審核，明確了解用印的內(nèi)容和目的，確 認(rèn)符合用印的手續(xù)后，在用印登記簿上逐項(xiàng)登記，方可蓋章。 3、對需要留存的材料，蓋印后