第六章 一般毒性2-2

1、毒性評價或安全性評價的基本目的毒性評價或安全性評價的基本目的o 受試物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)受試物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)o 劑量反應(yīng)（效應(yīng)）研究劑量反應(yīng)（效應(yīng)）研究o 確定毒作用的靶器官確定毒作用的靶器官o 確定損傷的可逆性確定損傷的可逆性o 其它：敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志、毒作用機(jī)制、其它：敏感檢測指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志、毒作用機(jī)制、毒物動力學(xué)、中毒的解救措施毒物動力學(xué)、中毒的解救措施第四節(jié)第四節(jié) 短期、亞慢性和慢性短期、亞慢性和慢性毒性作用毒性作用一、蓄積作用一、蓄積作用檢測方法檢測方法o 蓄積作用（蓄積作用（accumulationaccumulation）：）： 外來化合物進(jìn)入機(jī)外來化合物進(jìn)入機(jī)體之

2、后，經(jīng)代謝或原型排出體外，但當(dāng)其連續(xù)、反體之后，經(jīng)代謝或原型排出體外，但當(dāng)其連續(xù)、反復(fù)進(jìn)入機(jī)體，而且吸收速度或總量超過代謝轉(zhuǎn)化與復(fù)進(jìn)入機(jī)體，而且吸收速度或總量超過代謝轉(zhuǎn)化與排出的速度或總量時，化合物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐排出的速度或總量時，化合物就有可能在機(jī)體內(nèi)逐漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化合物的蓄積作用漸增加并貯留，這種現(xiàn)象稱為化合物的蓄積作用 o 蓄積庫（蓄積庫（depot）：化學(xué)物蓄積的組織器官部位。常見的蓄）：化學(xué)物蓄積的組織器官部位。常見的蓄積庫包括：積庫包括：血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、骨骼血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、骨骼o 物質(zhì)蓄積物質(zhì)蓄積（material accumula

3、tionmaterial accumulation） ：用分析方法能測得：用分析方法能測得機(jī)體內(nèi)存在該化合物或其代謝產(chǎn)物，且隨接觸時機(jī)體內(nèi)存在該化合物或其代謝產(chǎn)物，且隨接觸時間延長而增加間延長而增加o 功能功能( (機(jī)能機(jī)能) )蓄積蓄積(functional accumulation)(functional accumulation) ：在機(jī)體內(nèi)：在機(jī)體內(nèi)雖不能被測出，卻在長期接觸下出現(xiàn)了慢性中毒雖不能被測出，卻在長期接觸下出現(xiàn)了慢性中毒現(xiàn)象現(xiàn)象 o 蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)蓄積作用是發(fā)生慢性中毒的物質(zhì)基礎(chǔ)o 一種外源化學(xué)物有無蓄積作用是評定該化學(xué)一種外源化學(xué)物有無蓄積作用是評定該化

4、學(xué)物是否可能引起潛在慢性中毒是論據(jù)之一，物是否可能引起潛在慢性中毒是論據(jù)之一，也是制定衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)時安全系數(shù)的一種依也是制定衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)時安全系數(shù)的一種依據(jù)。據(jù)。 o 求外來化學(xué)物的蓄積系數(shù)求外來化學(xué)物的蓄積系數(shù)o 了解蓄積毒性的強(qiáng)度了解蓄積毒性的強(qiáng)度o 為慢性及其它有關(guān)毒性試驗提供劑量選擇依據(jù)為慢性及其它有關(guān)毒性試驗提供劑量選擇依據(jù)方法方法o 理化方法：應(yīng)用化學(xué)分析或其他技術(shù)測定化理化方法：應(yīng)用化學(xué)分析或其他技術(shù)測定化學(xué)物進(jìn)入機(jī)體后在體內(nèi)含量變化的過程學(xué)物進(jìn)入機(jī)體后在體內(nèi)含量變化的過程 該方法可測定化學(xué)物的半衰期，故可作為該方法可測定化學(xué)物的半衰期，故可作為檢測物質(zhì)蓄積的方法檢測物質(zhì)蓄積的方

5、法o 生物學(xué)方法：將多次染毒與一次染毒所產(chǎn)生生物學(xué)方法：將多次染毒與一次染毒所產(chǎn)生的效應(yīng)進(jìn)行比較。所測蓄積性不能區(qū)分功能的效應(yīng)進(jìn)行比較。所測蓄積性不能區(qū)分功能蓄積和物質(zhì)蓄積蓄積和物質(zhì)蓄積 o蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 ：在一定期限之內(nèi)以低于致死劑量：在一定期限之內(nèi)以低于致死劑量(LD(LD5050) )，每日給予，每日給予實驗動物，直至出現(xiàn)預(yù)計的毒性效應(yīng)實驗動物，直至出現(xiàn)預(yù)計的毒性效應(yīng)( (或死亡或死亡) )為止，計算達(dá)到預(yù)計為止，計算達(dá)到預(yù)計效應(yīng)的總累積劑量，求出累積劑量與一次接觸該化合物產(chǎn)生相同效效應(yīng)的總累積劑量，求出累積劑量與一次接觸該化合物產(chǎn)生相同效應(yīng)的劑量的比值應(yīng)的劑量的比值 .即為蓄積系

6、數(shù)即為蓄積系數(shù)(K(K值值) ) 多用小鼠或大鼠為實驗動物，一般以死亡為指標(biāo)多用小鼠或大鼠為實驗動物，一般以死亡為指標(biāo) K=D50(n)D50()K=LD50(n)LD50()蓄積系數(shù)評價標(biāo)準(zhǔn)蓄積系數(shù)評價標(biāo)準(zhǔn)蓄積系數(shù)蓄積系數(shù)(K)蓄積作用分級蓄積作用分級5K5），），但小劑量反復(fù)與機(jī)體接觸后，紅細(xì)胞和腦組織但小劑量反復(fù)與機(jī)體接觸后，紅細(xì)胞和腦組織的乙酰膽堿酯酶可以持續(xù)降低，且伴有神經(jīng)系的乙酰膽堿酯酶可以持續(xù)降低，且伴有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀統(tǒng)癥狀o 方法：方法： （1）急性毒性實驗）急性毒性實驗 LD50(1) （2）1/20-1/5LD50 每日染毒每日染毒 LD50(n) （ 50%動物死亡時累計染

7、毒的總量）動物死亡時累計染毒的總量） （3）計算）計算K值：值：K=LD50(n)/LD50(1) 若累計染毒量已達(dá)到若累計染毒量已達(dá)到5個個LD50，動物仍未死亡或死亡，動物仍未死亡或死亡未達(dá)到半數(shù)，可終止實驗，其值按未達(dá)到半數(shù)，可終止實驗，其值按 作為結(jié)果。作為結(jié)果。1. 固定劑量法固定劑量法o 方法：方法：（1）測定）測定LD50(1)（2）第）第1-4天，先給予天，先給予0.1LD50(1)，以后每，以后每4天天 遞增劑量遞增劑量1.5倍倍 LD50(n)（3）計算值。）計算值。 28天時死亡動物仍未達(dá)到半數(shù)，可停止實驗，此時的總天時死亡動物仍未達(dá)到半數(shù)，可停止實驗，此時的總量達(dá)到量達(dá)

8、到12.8LD50(1)，即，即12.8，可認(rèn)為基本無蓄積。，可認(rèn)為基本無蓄積。 . 遞增劑量法遞增劑量法o方法：分為方法：分為1/2、1/5、1/10、1/20 LD50四個劑量組和對照四個劑量組和對照組，每組組，每組10只動物，每天染毒一次，共染毒只動物，每天染毒一次，共染毒20天，觀察天，觀察每組動物死亡數(shù)量。每組動物死亡數(shù)量。o結(jié)果判定：結(jié)果判定：n蓄積不明顯：蓄積不明顯：各劑量組均無死亡；各劑量組均無死亡；n弱蓄積性：弱蓄積性：僅僅1/2 LD50組有死亡，其它劑量組無死亡；組有死亡，其它劑量組無死亡；n中等蓄積性：中等蓄積性：1/20 LD50組無死亡，其它各組間死亡數(shù)組無死亡，其

9、它各組間死亡數(shù)有劑量反應(yīng)關(guān)系；有劑量反應(yīng)關(guān)系； 強(qiáng)蓄積性：強(qiáng)蓄積性：1/20 LD50組有死亡，且有劑量反應(yīng)關(guān)系。組有死亡，且有劑量反應(yīng)關(guān)系。 . 劑量固定的劑量固定的20天蓄積法天蓄積法 o蓄積系數(shù)法蓄積系數(shù)法 ：在一定期限之內(nèi)以低于致死劑量：在一定期限之內(nèi)以低于致死劑量(LD50)，每日給，每日給予實驗動物，直至出現(xiàn)預(yù)計的毒性效應(yīng)予實驗動物，直至出現(xiàn)預(yù)計的毒性效應(yīng)(或死亡或死亡)為止，計算達(dá)到預(yù)為止，計算達(dá)到預(yù)計效應(yīng)的總累積劑量，求出累積劑量與一次接觸該化合物產(chǎn)生相同計效應(yīng)的總累積劑量，求出累積劑量與一次接觸該化合物產(chǎn)生相同效應(yīng)的劑量的比值效應(yīng)的劑量的比值 .即為蓄積系數(shù)即為蓄積系數(shù)(K值

10、值) 多用小鼠或大鼠為實驗動物，一般以死亡為指標(biāo)多用小鼠或大鼠為實驗動物，一般以死亡為指標(biāo) K=D50(n)D50()K=LD50(n)LD50()o生物半減期法：生物半減期法：利用動力學(xué)原理利用動力學(xué)原理 生物半衰期法生物半衰期法從上圖可以看出，一種化學(xué)物質(zhì)若以從上圖可以看出，一種化學(xué)物質(zhì)若以t1/2相等的時間間距染毒，其在體內(nèi)經(jīng)相等的時間間距染毒，其在體內(nèi)經(jīng)過過6個個t1/2的接觸期就可以基本上達(dá)到蓄積的極限，此時理論蓄積量達(dá)到極的接觸期就可以基本上達(dá)到蓄積的極限，此時理論蓄積量達(dá)到極限的限的98.4%，此后即使繼續(xù)接觸該物質(zhì)，機(jī)體的蓄積量基本上也不會增加。，此后即使繼續(xù)接觸該物質(zhì)，機(jī)體的

11、蓄積量基本上也不會增加。o 重復(fù)劑量毒性作用重復(fù)劑量毒性作用/ /亞急性毒性作用亞急性毒性作用o 指實驗動物或人連續(xù)接觸外源化學(xué)物指實驗動物或人連續(xù)接觸外源化學(xué)物4 4周周（2828天）內(nèi)所產(chǎn)生的毒效應(yīng)。天）內(nèi)所產(chǎn)生的毒效應(yīng)。o 能初步確定相應(yīng)的能初步確定相應(yīng)的NOAEL/LOAELNOAEL/LOAELo 我國毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)中內(nèi)容我國毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)中內(nèi)容-食品、消毒劑、食品、消毒劑、農(nóng)藥和新化學(xué)品農(nóng)藥和新化學(xué)品o 外源化學(xué)物在長期重復(fù)染毒時可產(chǎn)生與急性毒外源化學(xué)物在長期重復(fù)染毒時可產(chǎn)生與急性毒性試驗完全不同的毒作用性試驗完全不同的毒作用o 隨著動物的衰老，有些因素如組織易感性改變、隨著動物的

12、衰老，有些因素如組織易感性改變、代謝和生理功能的改變，以及自發(fā)性疾病等均代謝和生理功能的改變，以及自發(fā)性疾病等均可影響毒作用的性質(zhì)和程度?？捎绊懚咀饔玫男再|(zhì)和程度。o 某些重要的疾病例如心臟病、慢性腎衰、腫瘤某些重要的疾病例如心臟病、慢性腎衰、腫瘤等均與年齡增長有關(guān)。等均與年齡增長有關(guān)。o 外源化學(xué)物的蓄積作用是發(fā)生慢性毒性作用的外源化學(xué)物的蓄積作用是發(fā)生慢性毒性作用的基礎(chǔ)基礎(chǔ)概念概念o 指實驗動物或人連續(xù)較長時間接觸外來化合物所出現(xiàn)的中毒指實驗動物或人連續(xù)較長時間接觸外來化合物所出現(xiàn)的中毒效應(yīng)。效應(yīng)。實驗動物或人連續(xù)較長期（約相實驗動物或人連續(xù)較長期（約相當(dāng)于生命周期當(dāng)于生命周期1/101/

13、10）接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。）接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)?？煽蒾 Parkinson等等(1995)報告報告117種藥品犬亞慢性種藥品犬亞慢性(90天天)和和慢性慢性(24月月)毒性試驗結(jié)果與大鼠毒性試驗結(jié)果與大鼠(短期或長期毒性試短期或長期毒性試驗驗)的結(jié)果比較，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)新的毒性資料，因的結(jié)果比較，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)新的毒性資料，因此認(rèn)為動物毒性試驗長于此認(rèn)為動物毒性試驗長于6個月沒有必要，除非研個月沒有必要，除非研究致癌作用究致癌作用o Weil等（等（1969）報告，）報告，112種受試物中，大鼠染毒種受試物中，大鼠染毒90天后才出現(xiàn)毒性效應(yīng)的只有天后才出現(xiàn)毒性效應(yīng)的只有3種

14、，認(rèn)為大鼠種，認(rèn)為大鼠90天天實驗即可確定受試物的實驗即可確定受試物的NOAELo 慢性毒性試驗傾向于和致癌試驗合并進(jìn)行慢性毒性試驗傾向于和致癌試驗合并進(jìn)行試驗?zāi)康脑囼災(zāi)康?o 觀察長期接觸受試物的毒性效應(yīng)譜、毒作用特點、靶器官；觀察長期接觸受試物的毒性效應(yīng)譜、毒作用特點、靶器官；o 探索受試物作用機(jī)制；探索受試物作用機(jī)制；o 觀察長期接觸受試物所致毒性作用的可逆性；觀察長期接觸受試物所致毒性作用的可逆性；o 確定長期接觸受試物所致毒作用的劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，確定長期接觸受試物所致毒作用的劑量反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，確定其確定其NOAELNOAEL和和/ /或或LOAELLOAEL，為制定人類接觸

15、的安全限量提供依，為制定人類接觸的安全限量提供依據(jù)；據(jù)；o 觀察不同動物對受試物的毒效應(yīng)差異，為確定適當(dāng)?shù)陌踩禂?shù)，觀察不同動物對受試物的毒效應(yīng)差異，為確定適當(dāng)?shù)陌踩禂?shù)，將結(jié)果外推到人提供依據(jù)。將結(jié)果外推到人提供依據(jù)。兩種實驗動物：嚙齒類（大鼠），非嚙齒類（犬）兩種實驗動物：嚙齒類（大鼠），非嚙齒類（犬） 實驗時間較長：要求為斷乳不久的動物，小鼠體重以實驗時間較長：要求為斷乳不久的動物，小鼠體重以15g15g、大、大鼠鼠50-150-10g0g（610%10%） 效應(yīng)差異的時間趨勢效應(yīng)差異的時間趨勢 兩種性別的一致性兩種性別的一致性 歷史對照歷史對照復(fù)習(xí)題復(fù)習(xí)題o 毒性評價試驗的基本目的毒性評價試驗的基本目的o 什么