微生物的培養(yǎng)

1、裝訂線內(nèi)不準答題姓名_ 班級_ 學號_編號004 2012-2013學年度第二學期高二年級生物導學案專題二 第一節(jié) 微生物的實驗室培養(yǎng)【課程目標】了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進行微生物培養(yǎng)和無菌技術(shù)的操作。【課題重點】無菌技術(shù)的操作【課題難點】無菌技術(shù)的操作【自主學習】 一、培養(yǎng)基1概念：人們按照微生物對 的不同需求，配制出供其 的營養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基?？煞譃?培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基。 2營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有 、 、 和 ，此外還要滿足微生物生長對 、 以及 的要求。 3培養(yǎng)乳酸桿菌時需在培養(yǎng)基中添加 、培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基PH調(diào)至 、培養(yǎng)細菌時需將PH調(diào)至 、培養(yǎng)厭氧微生物則需提供 條件。思考1從

2、細胞的化學元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？來源: 【補充1】碳源：如CO2、糖類、脂肪酸等有機物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，并提供能量。【補充2】培養(yǎng)基包括哪些營養(yǎng)成分：碳源、氮源、水、無機鹽、生長因子等，蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，瓊脂是凝固劑。二、無菌技術(shù)：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：(一)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 ，具體操作如下：來源1對實驗操作的 、操作者的 和 進行 。2將用于微生物培養(yǎng)的 、 和 等器具進行 。3為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在 附近進行。4實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與 相接觸。(二)消毒和滅菌1消毒是指 。常

3、用的方法有 、 、 消毒法。2滅菌是指 。常用的方法有： 、 、 滅菌。分別適用于那些用具？思考2無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是什么？ 思考3利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是什么？ 思考4物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋內(nèi)冷空氣，其目的是 ；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至 ，溫度為 ，并維持 min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至 時打開鍋蓋，其目的是防止 三、實驗操作-大腸桿菌的純化培養(yǎng)：本實驗所用的培養(yǎng)基是 ，本實驗可分成 和 兩個階段進行。（一）、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作

4、步驟是： 、 、 、 、 。思考5在制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的稱量操作中，動作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是什么？ 思考6牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供什么等營養(yǎng)物質(zhì)？ 2 倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至 左右時在酒精燈火焰附近操作進行。其過程是：在火焰旁右手拿 ，左手 ；使錐形瓶的瓶口 ；左手將培養(yǎng)皿 ，右手 ，立刻蓋上皿蓋。待平板冷卻凝固后，將平板 。思考7錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是什么？ 思考8倒平板的目的是什么？ 思考9若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？ 思考10配制斜面培養(yǎng)基作用是什么？，試管為什么要加塞棉塞？ （二）、純化大腸桿菌微

5、生物接種：最常用的是 法和 法。另外還有穿刺接種和斜面接種等。1平板劃線法是 的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。其操作步驟是：將 在酒精燈火焰上灼燒直至 。在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。將菌種試管口通過火焰達到 的目的。將冷卻的接種環(huán)伸入到 。將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán) ，蓋上皿蓋，不要劃破培養(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，冷卻后從 劃線。重復上述過程，完成三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將 相連。將平板 培養(yǎng)。思考111、取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是什么？ 為什么除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)？ 取菌種和劃線前都要求接種

6、環(huán)冷卻后進行，其目的是？ 最后灼燒接種環(huán)的目的是？ 在第1次劃線后都從上次劃線末端開始的目的是？ 2稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將 進行培養(yǎng)。當稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細菌形成的標準菌落。系列稀釋操作：取盛有 mL水的無菌試管6支 ，編號101、102、103、104、105、106。用灼燒冷卻的移液管吸取 mL菌液注入編號為101試管中，并吹打3次使之混勻。從101倍液中吸取 mL菌液注入到編號為102試管內(nèi)吹打均勻，獲得102倍液。依此類推。思考12系列稀釋操作的注意事項是什么？ 思考13涂布平板操作的步驟是什么？ 結(jié)果分析與評價1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是什么？若有菌落形成，說明什么？ 2在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落