局部刺激實驗

1、急性毒性試驗綜合分析與評價第四實驗室第三小組人員名單：唐劍波 陳杰 楊文超 唐凱 張業(yè)芳 熊興菊第三部分局部刺激實驗?zāi)康?了解40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對哺乳動物皮膚、眼睛的局部刺激性和腐蝕性，估計人體接觸該農(nóng)藥時可能出現(xiàn)的類似危害，為農(nóng)藥生產(chǎn)和使用中的安全防護提供依據(jù)。局部刺激實驗眼刺激實驗皮膚刺激實驗皮膚致敏實驗40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗 了解試驗40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對眼睛的刺激作用和程度，為農(nóng)藥生產(chǎn)和使用中的安全防護提供依據(jù)。一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理 選擇健康的成年白色家兔，受試物以一次劑量滴入每只實驗動物的眼睛結(jié)膜囊內(nèi)，以未做處理的另一側(cè)眼睛作為自身對

2、照。在規(guī)定的時間間隔內(nèi)，觀察對動物眼睛的刺激和腐蝕作用程度并評分，以此評價受試物對眼睛的刺激作用。觀察期限應(yīng)能足以評價刺激效應(yīng)的可逆性或不可逆性。三、實驗動物及飼養(yǎng)環(huán)境 首選健康成年白色家兔，至少4只，雌雄各半，體重2-3Kg，試驗前家兔要在實驗動物房至少適應(yīng)3d時間，在開始前的24h內(nèi)對動物的兩只眼睛進行檢查，有眼睛刺激癥狀，角膜缺陷和結(jié)膜損傷的動物不能用于實驗。 實驗動物及實驗動物房應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。四、實驗步驟 1、輕輕拉開家兔一側(cè)眼睛的下眼瞼，將受試物0.1ml滴入結(jié)膜囊中，使上、下眼瞼被動閉合1min，以防止受試物丟失。另一側(cè)眼睛不處理作自身對照。滴入受試

3、物后24h不沖洗眼睛。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗 2、記錄給藥后1、24、48、72小時角膜、虹膜、結(jié)膜以及其它所觀察到的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗評分表示。觀察時應(yīng)用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度和虹膜紋理改變。若在72小時內(nèi)未見任何刺激癥狀，該試驗即可結(jié)束。 3、若在72小時內(nèi)出現(xiàn)刺激癥狀，應(yīng)進行眼部清洗試驗：試驗設(shè)3組，每組3只動物，受試藥物的給藥方法同上。第1組不予清洗，第2組在眼部給受試藥4秒鐘后用20ml溫水或生理鹽水清洗受試眼，第3組在給受試藥30秒鐘后用20ml溫水或生理鹽水清洗受試眼。觀察滴眼后

4、24、48、72小時，4天，7天的眼部反應(yīng)情況，直至眼部恢復(fù)正常。（該試驗的意義在于評價溫水或生理鹽水清洗可否改善藥物所致的眼部刺激，亦即反映該受試藥物的眼部刺激性是否可逆。）40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗五、結(jié)果判斷及評價 按表1將每只動物的角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)的分值相加，即是一只動物眼刺激反應(yīng)的總積分。每個動物的刺激反應(yīng)積分的總和除以動物數(shù)，就是該試驗農(nóng)藥對眼刺激性的最后分值。再按表2評定眼刺激程度。 按上述分級評價標(biāo)準(zhǔn)評定，如一次或多次接觸受試物，不引起角膜、虹膜和結(jié)膜的炎癥變化，或雖引起輕度反應(yīng)，但這種改變是可逆的，則認(rèn)為該受試物可以安全使用。 在許多情況下，哺乳動物

5、眼的反應(yīng)較人敏感，從動物試驗結(jié)果外推到人可提供較有價值的依據(jù)。表1 Draize眼刺激試驗中眼損傷嚴(yán)重程度的評分標(biāo)準(zhǔn)續(xù)表 Draize眼刺激試驗中眼損傷嚴(yán)重程度的評分標(biāo)準(zhǔn)表2 眼刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗一、 實驗?zāi)康?測定40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對哺乳動物皮膚是否有刺激或腐蝕作用，估計人體接觸該農(nóng)藥時可能出現(xiàn)的類似危害。二、 實驗原理 將受試樣品一次（或多次）涂（敷）于健康無破損的一側(cè)皮膚，并以對側(cè)皮膚作自身對照，在規(guī)定時限內(nèi)觀察和評價刺激反應(yīng)的程度，并作詳細(xì)的記錄。觀察時間應(yīng)足以進行可逆或不可逆效應(yīng)的觀察，以便進行完整的評價，但一般不超過14d。40

6、.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗三、 實驗材料 1、實驗動物、實驗動物 首選健康成年白色家兔，至少4只，體重2kg左右，雌雄兼可，實驗動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，試驗前家兔要在實驗動物房至少適應(yīng)3d時間。實驗動物及實驗動物房應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。 2、受試物、受試物 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑四、 實驗步驟 1、試驗前24小時將動物背部脊柱兩側(cè)毛脫掉，不可損傷毛皮，脫毛面積左右各4cmX4cm。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗 2、取受試樣品0.5ml直接涂布在皮膚上，用4層紗布（3cmX3cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激膠布和繃帶加以固定。對側(cè)皮

7、膚作為對照。采用封閉實驗，敷用時間為4h。試驗結(jié)束后，用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試樣品。 3、如懷疑受試樣品可能引起嚴(yán)重刺激或腐蝕作用，可采用分段實驗，將三個涂布受試樣品的紗布快同時或先后敷貼于一只家兔背部脫毛區(qū)皮膚上，分別于涂敷后3min，60min和4h取下一塊紗布，皮膚部位在任一時間點積分等于8分，即可停止試驗。 4、觀察時間的確定應(yīng)足以觀察到可逆和不可逆刺激作用的全過程，一般不超過14d。 于清除受試樣品后的1h、24h、48h和72h各觀察受試部位的皮膚反應(yīng)，按表3進行皮膚反應(yīng)評分，以受試物積分的平均值進行綜合評價，根據(jù)24h、48h和72h各觀察時點最高積分均值，按表4判定皮膚

8、刺激強度。 皮膚刺激評價除根據(jù)表4的評分外，還應(yīng)結(jié)合刺激作用的性質(zhì)、恢復(fù)程度等進行化學(xué)品刺激作用的綜合評價。單獨的積分值不能作為受試樣品的刺激性質(zhì)的最后評判，可以作為參考值。 急性皮膚刺激試驗結(jié)果從動物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其他品系動物進行試驗時也得到類似結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗五、 結(jié)果判斷及評價表3 皮膚刺激反應(yīng)評分表4 皮膚刺激強度評價40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗一、 實驗?zāi)康?測試動物在反復(fù)接觸40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑后，機體產(chǎn)生免疫傳遞的皮膚

9、反應(yīng)的可能性，從而確定該農(nóng)藥的變態(tài)反應(yīng)性（致敏）。二、 實驗原理 具有致敏作用的化學(xué)物經(jīng)一定途徑進入機體，與組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，刺激免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞或體液抗體；經(jīng)1-2周致敏期，使體內(nèi)免疫反應(yīng)得到充分發(fā)展，形成一定數(shù)量的致敏淋巴細(xì)胞或特異抗體。當(dāng)再次接觸（激發(fā)）時使機體對該化合物產(chǎn)生感受性增高的狀態(tài)，以一定的異常形式表現(xiàn)出來。三、 實驗材料 1、實驗動物 成年白色豚鼠，體重200-300g，雌雄均可，雌性動物不能發(fā)生過性行為。在同一次試驗中，應(yīng)使用同一性別動物。如果使用兩種性別動物，則應(yīng)雌、雄各半。試驗前動物應(yīng)在實驗動物室至少喂養(yǎng)3d，以適應(yīng)環(huán)境和淘汰不合格動物。 2、受試物

10、 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑。 3、 陽性致敏物 2,4一二硝基氯代苯制成1的致敏濃度和0.1的激發(fā)濃度。 4、賦形劑 水或無刺激性表面活性劑40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗四、 實驗步驟 1、用23只動物進行預(yù)試驗，尋找能引起皮膚輕度刺激反應(yīng)的最高濃度（劑量）。激發(fā)濃度一般低于致敏濃度，不得引起原發(fā)刺激性炎癥反應(yīng)。 2、實驗分組：將豚鼠按體重性別隨機分成三組，第一組20只（雌雄各半），二、三組各10只（雌雄各半）。第一組給農(nóng)藥，第二組空白對照（給賦形劑），第三組陽性對照（給陽性致敏物）。 3、致敏接觸：實驗前24h將動物背部左側(cè)去毛3cm3cm。試驗組：將試驗農(nóng)藥0.10.2

11、ml涂在2cm2cm濾紙上，并將其敷貼在去毛區(qū)，以1層油紙或玻璃紙和2層大于備皮面積的紗布覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定，持續(xù)6h。用清水或無刺激性溶劑洗去殘留的受試物。第7d和第14d以同樣方法重復(fù)一次?？瞻讓φ战M與陽性對照組方法同上。 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗 4、激發(fā)接觸：實驗前24h將動物背部右側(cè)去毛3cm3cm。試驗組和對照組：末次致敏后第14天，將0.10.2mL或低于誘導(dǎo)濃度的試驗農(nóng)藥斑貼于右側(cè)去毛區(qū)，覆蓋方法同2的步驟，持續(xù)6h，去掉去掉斑貼及試驗農(nóng)藥后，每日觀察皮膚過敏反應(yīng)情況至第12d，主要觀察有無紅斑、水腫。如無致變，可再次激發(fā)以確定試驗農(nóng)藥能否引起過敏反應(yīng)。 陽性對照組給陽性致敏物，方法同上。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗五、結(jié)果判斷及評價40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗 在24h、48h后分別觀察局部皮膚反應(yīng)。用盲法觀察對照組和試驗組。按表5對局部皮膚反應(yīng)評分。當(dāng)受試樣品組出現(xiàn)皮膚反應(yīng)積分不小于2時，判為該動物出現(xiàn)皮膚致敏反應(yīng)陽性，并計算致敏率