實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的人工培養(yǎng)最后

1、實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 細(xì)菌的人工培養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng) 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn) v1.熟悉培養(yǎng)基的成分、類型和作用;v2.掌握細(xì)菌平板劃線分離法的原理、 步驟及結(jié)果;v3.掌握細(xì)菌在液體培養(yǎng)基的三種生長(zhǎng) 狀態(tài);v4.了解細(xì)菌的自然界分布.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和要求實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和要求 細(xì)菌的人工培養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng)v一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基 概念概念: 培養(yǎng)基是用人工方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按培養(yǎng)基是用人工方法將多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)按照各類微生物生長(zhǎng)的需要而合成的一種混合養(yǎng)料。照各類微生物生長(zhǎng)的需要而合成的一種混合養(yǎng)料。 任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長(zhǎng)所需要六任何培養(yǎng)基都應(yīng)該具備微生物生長(zhǎng)所需要六大營(yíng)養(yǎng)要素：大營(yíng)養(yǎng)要素： 碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽

2、、能源、生長(zhǎng)因子、水碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、能源、生長(zhǎng)因子、水任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理任何培養(yǎng)基一旦配成，必須立即進(jìn)行滅菌處理高壓蒸高壓蒸汽滅菌汽滅菌按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為其成為固體狀態(tài)，瓊脂含量一般為1.5%-2.0%1.5%-2.0%瓊脂含量一般為瓊脂含量一般為0.3%-0.5%不加任何不加任何凝固劑凝固劑半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、固體培養(yǎng)基常用來(lái)進(jìn)行微生物的分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏鑒定、活菌計(jì)數(shù)及菌種保藏

3、 觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及觀察微生物的運(yùn)動(dòng)特征、分類鑒定及噬菌體效價(jià)滴定噬菌體效價(jià)滴定 用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)用于增菌，大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)及在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的研究室進(jìn)行微生物的研究 培養(yǎng)基的分類：培養(yǎng)基的分類：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基按用途不同劃分按用途不同劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物含有一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需的基本營(yíng)養(yǎng)物。比如。比如 肉湯培養(yǎng)基。肉湯培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)利用細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同而使指示劑顯色反應(yīng)不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如

4、不同的原理，鑒別和鑒定細(xì)菌。如麥糠凱瓊麥糠凱瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)。所需微生物的生長(zhǎng)。用來(lái)將某種或某類微生用來(lái)將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)。物從混雜的微生物群體中分離出來(lái)。如如SS瓊瓊脂培養(yǎng)基。脂培養(yǎng)基。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制成的在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)制成的一類營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如一類營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基。如血瓊脂培養(yǎng)基。血瓊脂培養(yǎng)基。特殊培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)基如厭氧培養(yǎng)基。

5、如厭氧培養(yǎng)基。用于厭氧菌的培養(yǎng)。用于厭氧菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)基的分類：培養(yǎng)基的分類：細(xì)菌的人工培養(yǎng)細(xì)菌的人工培養(yǎng)v二、細(xì)菌的接種技術(shù)二、細(xì)菌的接種技術(shù) v分離培養(yǎng)接種法平板劃線法平板劃線法、平行劃線法v純種細(xì)菌接種法 固體斜面培養(yǎng)基接種法固體斜面培養(yǎng)基接種法 液體培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法 半固體培養(yǎng)基接種法半固體培養(yǎng)基接種法 細(xì)菌分離培養(yǎng)接種法的原理細(xì)菌分離培養(yǎng)接種法的原理 根據(jù)機(jī)械分離作用，在無(wú)菌培養(yǎng)基中從混雜的標(biāo)本混雜的標(biāo)本中分離出所需的單個(gè)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所形成的菌落。 圖圖4-2平板劃線分離法平板劃線分離法 1.斜線法斜線法 2.曲線法曲線法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四

6、格法 1、以無(wú)菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液以無(wú)菌操作用接種環(huán)取待分離純化的菌液，將菌液點(diǎn)種在平板邊緣一處，取出接種環(huán)，燒去多余的菌種。2、將接種環(huán)再次通過(guò)稍打開(kāi)皿蓋的縫隙將接種環(huán)再次通過(guò)稍打開(kāi)皿蓋的縫隙（約45度角）伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻,然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。3、劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成劃線時(shí)平板面與接種環(huán)面成30-4030-40度角度角，以手腕力量在平板表面輕巧滑動(dòng)劃線, 線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊，劃線完畢，關(guān)上皿蓋.灼燒接種環(huán)。 斜線斜線(分區(qū)分區(qū))劃線分離法劃線分離法4.用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1

7、區(qū)并作數(shù)次劃線,再在2、3區(qū)依次劃線。5.每劃完一個(gè)區(qū)域，均將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域6.每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使接種量逐次，使接種量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落漸減少，以獲得單個(gè)菌落。其他操作與上述曲線劃線分離法相同。斜線斜線(分區(qū)分區(qū))劃線分離法劃線分離法操作要領(lǐng)：操作要領(lǐng)： 無(wú)菌操作。無(wú)菌操作。 無(wú)劃破瓊脂。無(wú)劃破瓊脂。 前后兩條線密而不重疊。前后兩條線密而不重疊。 做好標(biāo)記，第二天觀察結(jié)果做好標(biāo)記，第二天觀察結(jié)果平板劃線分離法平板劃線分離法純種細(xì)菌接種法純種細(xì)菌接種法 液體培養(yǎng)基接種 半固體培養(yǎng) 基穿刺接種固體斜面培養(yǎng)固體

8、斜面培養(yǎng)基接種基接種圖斜面接種時(shí)的無(wú)菌操作圖斜面接種時(shí)的無(wú)菌操作 (1)接種滅菌接種滅菌 (2)開(kāi)啟棉塞開(kāi)啟棉塞 (3)管口滅菌管口滅菌 (4)挑起菌苔挑起菌苔 (5)接種接種 (6)塞好棉塞塞好棉塞 （1 1）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉菌落定義：指單個(gè)細(xì)菌在平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，形成單一肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、眼可見(jiàn)的細(xì)菌集團(tuán)。菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性表面、透明度、濕潤(rùn)度、黏度、溶血性。菌落菌落類型：類型：S型、型、R型、型、M型型菌

9、落。菌落。菌苔菌苔：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。：指多個(gè)菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。菌苔（2 2） 細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 無(wú)鞭毛的細(xì)菌沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線清晰；無(wú)鞭毛的細(xì)菌沿穿刺線生長(zhǎng)，穿刺線清晰；有鞭毛的細(xì)菌則沿穿刺線向周?chē)鷶U(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺線模糊不清。有鞭毛的細(xì)菌則沿穿刺線向周?chē)鷶U(kuò)散生長(zhǎng)，穿刺線模糊不清。經(jīng)常用于做用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力。經(jīng)常用于做用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力。（3 3）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象 不同細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖可出現(xiàn)均勻混濁、沉淀不同細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖可出現(xiàn)均勻混濁、沉淀（多見(jiàn)于鏈狀

10、排列的細(xì)菌多見(jiàn)于鏈狀排列的細(xì)菌）和形成菌膜和形成菌膜（專性需氧菌專性需氧菌）三種現(xiàn)三種現(xiàn)象，臨床應(yīng)用的澄清透明的注射液若發(fā)現(xiàn)上述任何一種現(xiàn)象，象，臨床應(yīng)用的澄清透明的注射液若發(fā)現(xiàn)上述任何一種現(xiàn)象，均表明已被細(xì)菌污染，禁止使用。均表明已被細(xì)菌污染，禁止使用。菌膜菌膜菌沉淀菌沉淀均勻渾濁均勻渾濁對(duì)照對(duì)照細(xì)菌的分布細(xì)菌的分布細(xì)菌在自然界的分布細(xì)菌在自然界的分布 土壤中的細(xì)菌土壤中的細(xì)菌 水中的細(xì)菌水中的細(xì)菌 空氣中的細(xì)菌空氣中的細(xì)菌 細(xì)菌在正常人體的分布細(xì)菌在正常人體的分布 人工培養(yǎng)細(xì)菌的意義人工培養(yǎng)細(xì)菌的意義v在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：診斷；細(xì)菌鑒定；生物制品。診斷；細(xì)菌鑒定；生物制品。 v

11、在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用：在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用：細(xì)菌在培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生多種代謝細(xì)菌在培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)加工處理，可制成抗生素、維生素、氨基酸、產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)加工處理，可制成抗生素、維生素、氨基酸、有機(jī)溶劑、酒、醬油、味精等產(chǎn)品有機(jī)溶劑、酒、醬油、味精等產(chǎn)品。 v在基因工程中的應(yīng)用：在基因工程中的應(yīng)用：制備出胰島素和干擾素等生物制制備出胰島素和干擾素等生物制劑。劑。 問(wèn)題與討論問(wèn)題與討論1.培養(yǎng)基按物理性狀分為幾種？決定培養(yǎng)基按物理性狀分為幾種？決定相應(yīng)物理相應(yīng)物理性狀的物性狀的物質(zhì)是什么？不同物理質(zhì)是什么？不同物理性狀的性狀的培養(yǎng)基主要用途如何？培養(yǎng)基主要用途如何？2.什么是菌落？分離培養(yǎng)時(shí)，如