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文檔簡(jiǎn)介
1、DNA 蛋白質(zhì)復(fù)制轉(zhuǎn) 錄反(逆)轉(zhuǎn)錄翻 譯RNA復(fù)制遺傳中心法則 第三部分 基因信息的傳遞 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 DNA 復(fù) 制 要 點(diǎn)一、DNA半保留復(fù)制二、DNA復(fù)制的酶學(xué)三、復(fù)制基本過程(端粒酶)四、DNA損傷(突變)及其修復(fù)五、逆轉(zhuǎn)錄及逆轉(zhuǎn)錄酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合一、DNA復(fù)制的含義: DNA分子為模板合成新的DNA分子的過程,稱為DNA復(fù)制。二、復(fù)制的方式 半保留復(fù)制 指經(jīng)復(fù)制后,子代DNA分子中一條鏈完整來(lái)自親代DNA,而另一條鏈則完全重新合成,且與母鏈堿基互補(bǔ)。DNA的半保留復(fù)制 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合DNA復(fù)制的酶學(xué)一、酶 DNA聚合酶 (簡(jiǎn)稱 DNA-pol,全稱依
2、賴 DNA的DNA聚合酶,DNA-dependent DNA polymerase, DDDP) 主要特點(diǎn):(1)催化5 3的合成方向 (2)具核酸外切酶活性 (3)底物 dNTP 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合大腸桿菌DNA聚合酶 3 5外切 53外切 酶活性 酶活性 功 能種 類DNA-pol I 校讀、修復(fù)、填補(bǔ) 缺口(催化延長(zhǎng)約 20個(gè)核苷酸) DNA-pol II 不詳DNA-pol III 復(fù)制研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合真核生物DNA聚合酶 酶活性 5 3 聚合酶活性 3 5 外切酶活性 構(gòu)成亞基數(shù) 4 4 4 2 5分子大?。╧d) 250 36-38 163-300 170 256細(xì)胞
3、內(nèi)定位 核 核 線粒體 核 核功能 隨從鏈 修復(fù) 復(fù)制 領(lǐng)頭鏈 校讀、修 復(fù)制 (無(wú)其它 復(fù)制 復(fù)、填補(bǔ) DNA-pol時(shí))DNA聚合酶通過其35核酸外切酶的作用發(fā)揮較正功能研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合二、引物 寡聚核苷酸(RNA片段) 三、模板 解開成單鏈的DNA母鏈為模板研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合四、其它酶類和蛋白質(zhì)因子 解螺旋酶(即Dna B蛋白或Rep蛋白)解開 DNA雙鏈。 Dna A 辨認(rèn)復(fù)制起始點(diǎn)。 Dna C 協(xié)助解螺旋酶,使其在起始點(diǎn)上結(jié)合 并打開雙鏈。 DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶 理順DNA鏈,即通過切斷、 旋轉(zhuǎn)和再連結(jié)作用,把正超螺旋變?yōu)?負(fù)螺旋。 單鏈結(jié)合蛋白(SSB) 穩(wěn)定解開的單鏈
4、DNA DNA連接酶 催化復(fù)制中兩條不連續(xù)的鏈片段 間的磷酸二酯鍵形成。解旋、解鏈作用研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合DNA復(fù)制的基本過程起始 延長(zhǎng) 終止研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合5553335領(lǐng)頭鏈隨從鏈解鏈方向 不連續(xù)復(fù)制復(fù)制叉岡奇片段 連續(xù)復(fù)制起始點(diǎn)(Ori)復(fù)制叉與雙向復(fù)制引發(fā)體的形成3、引物的生成起始復(fù)制方向(53)(不)連續(xù)復(fù)制岡崎片段領(lǐng)頭鏈隨從鏈延長(zhǎng)終止引物水解補(bǔ)缺連接端粒酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 含義:它有蛋白質(zhì)和 RNA 兩部分組成,是一種特殊的反轉(zhuǎn)錄酶。 它以自身的 RNA 為模板,在隨從鏈模板DNA 的3-OH 末端延長(zhǎng) DNA,再以這種延長(zhǎng)的 DNA 為引物,繼續(xù)合成隨從鏈,直
5、至一定長(zhǎng)度。 端粒酶(真核生物)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 1、突變 (基因突變)的含義 指DNA分子(基因)上堿基的改變。 2、分類: 錯(cuò)配(點(diǎn)突變) DNA分子上1個(gè)堿基的變異 缺失 一個(gè)或一段核苷酸鏈片段的丟失 插入 原來(lái)沒有的1個(gè)堿基或一段核苷酸鏈插入分子 重排(重組) DNA分子內(nèi)發(fā)生較大片段的交換。移位的DNA片段在新位點(diǎn)上可顛倒方向反置(倒位),也可以發(fā)生在染色體之間。 DNA損傷(突變)與修復(fù)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合3、引發(fā)突變的因素(1)物理因素:紫外線和輻射 紫外線常發(fā)生嘧啶二 聚體,致復(fù)制和轉(zhuǎn)錄受阻。(2)化學(xué)因素:化學(xué)誘變劑 5-溴尿嘧啶(5-BU
6、)、 羥胺類(NH2OH)、亞硝酸鹽、烷化劑 (氮芥類)等 胸腺嘧啶嘧啶二聚體光修復(fù)酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合4、DNA 損傷的修復(fù): (1)光修復(fù)通過光修復(fù)酶催化,使嘧啶二聚體解聚, 但需要光照射 (2)切除修復(fù)特異核酸內(nèi)切酶、DNA-pol I和連接酶 共同完成研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合重 組 修 復(fù)(3)重組修復(fù)(4)SOS修復(fù) 細(xì)胞處危急狀態(tài)的一種修復(fù)。此時(shí)可誘導(dǎo)一種可催化DNA合成的特殊酶,其對(duì)堿基識(shí)辨能力差,易出錯(cuò)。盡管如此,還是可以提高細(xì)胞存活率。研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合逆轉(zhuǎn)錄作用指以RNA為模板合成DNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄酶 三種酶活性 (1)RNA為模板催化DNA合成 (2)水解雜
7、化雙鏈上RNA (3)DNA為模板催化DNA合成逆(反)轉(zhuǎn)錄作用和逆(反)轉(zhuǎn)錄酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合起始點(diǎn) 多 點(diǎn) 單 點(diǎn)速度 慢(原核的1/10) 快引物大小 短(約10個(gè)核苷酸) 長(zhǎng)(約數(shù)十個(gè)核苷酸)岡奇片段 少(約100200個(gè)) 多(約10002000個(gè))酶 DNA聚合酶- DNA聚合酶 III端粒酶 有 無(wú)真核生物 原核生物真核與原核生物復(fù)制的主要區(qū)別研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 轉(zhuǎn) 錄以DNA為模板合成RNA的過程,稱為轉(zhuǎn)錄。 要 點(diǎn)1、RNA的不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄 (轉(zhuǎn)錄的模板、酶及基本過程)2、RNA轉(zhuǎn)錄后的加工修飾3、核酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合RNA 聚 合 酶一、RNA 聚合酶(全
8、稱依賴DNA的RNA聚合酶,DNA -dependent RNA polymerase, DDRP; 亦稱轉(zhuǎn)錄酶) 特點(diǎn):1、催化53的合成方向 2、底物為NTP 3、摸板DNA 4、不需要引物 5、產(chǎn)物是RNA研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合大腸桿菌RNA聚合酶組分及功能二、原核生物 RNA 聚合酶2 核心酶 全酶亞基 分子量 功能 36512 決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄 150618 與轉(zhuǎn)錄全過程有關(guān)(催化) 155613 結(jié)合DNA模板(開鏈) (sigma) 70263 辨認(rèn)起始點(diǎn)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合三、真核生物RNA聚合酶 真核生物RNA聚合酶分類種類 I II III轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 45S-rRNA
9、 hnRNA 5SRNA,tRNA snRNA 對(duì)鵝膏覃堿的反應(yīng) 耐受 極敏感 中度敏感研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合一、不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄 兩層含義:(1)在DNA雙鏈分子上,僅一股鏈可轉(zhuǎn)錄 (2)模板鏈非永遠(yuǎn)在同一條單鏈上模 板為結(jié)構(gòu)基因(編碼鏈、反義鏈)為有意義鏈(模板鏈)不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄3355(箭頭表示轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物生成方向)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合二、模板鏈(有意義鏈)和編碼鏈(反義鏈) 模板鏈:指DNA分子中可轉(zhuǎn)錄成 RNA的一股鏈。 編碼鏈:其特點(diǎn)是除用T代替RNA分子中U外,其余都相同。DNA模板、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、RNA繁榮核苷酸序列,以及翻譯產(chǎn)物肽的氨基酸序列TTTUUU研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合三、酶與模
10、板的辯認(rèn)結(jié)合 1、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄的位點(diǎn),常標(biāo)以 +1 2、結(jié)合部位約為7個(gè)堿基長(zhǎng)度,其中心位于上 游- 10 bp處被稱為 10區(qū)或 Pribnow 盒(TATA盒)。該 區(qū)具高度保守性,并易解鏈。 3、識(shí)別部位RNA聚合酶亞基識(shí)別的部位,約 含6個(gè)堿基長(zhǎng)度,其中心位于上游 - 35 bp處被稱為 35 區(qū)。 啟動(dòng)序列(原核)啟動(dòng)子(真核) 順式作用元件研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合TGTTGACATATAAT3553DNA編碼鏈模板鏈- 35 區(qū)- 10 區(qū)+ 15 McGPPP轉(zhuǎn)錄起始部位啟動(dòng)子基因轉(zhuǎn)錄區(qū)RNA產(chǎn)物NH2翻譯開始轉(zhuǎn)錄開始研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合四、基本過程 1、轉(zhuǎn)錄起始 原核
11、生物需要依賴 因子辨認(rèn)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn),被辨認(rèn)的DNA區(qū)段處-35區(qū)特定序列。 真核生物轉(zhuǎn)錄起始也需要RNApol對(duì)起始區(qū)上游DNA序列做辨認(rèn)和結(jié)合,并生成起始復(fù)合物,但其上游DNA序列(統(tǒng)稱為順式作用元件)不象原核生物那樣典型。 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2、延長(zhǎng) 在RNA聚合酶催化下,按 53 方向合成 5,3-磷酸二酯鍵。酶-DNA-RNA形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。3、終止 原核生物有兩種機(jī)制: (1)依賴 因子(Rho factor)的轉(zhuǎn)錄終止可識(shí)別來(lái)自RNA產(chǎn)物的終止信號(hào),而不是來(lái)自DNA摸板。 (2)非依賴 因子的轉(zhuǎn)錄終止終止子特點(diǎn)是RNA產(chǎn)物具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)(莖-環(huán)結(jié)構(gòu))和一段富含polyU片段。 真
12、核生物的轉(zhuǎn)錄終止是與轉(zhuǎn)錄后修飾密切相關(guān)的: 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合5AAA.AAATTATTTAATAAAGTGCGC53DNA轉(zhuǎn)錄終止RNA聚合酶AAUAAARNase修飾點(diǎn)hnRNA真核生物的轉(zhuǎn)錄終止及加尾修飾研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(一)真核生物mRNA的轉(zhuǎn)錄后的修飾 1、加帽(5端) 2、加尾poly A(3端) 3、剪接斷裂基因、外顯子和內(nèi)含子切除連接帽poly A轉(zhuǎn)錄后的修飾研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 概念:真核生物結(jié)構(gòu)基因含若干個(gè)編碼區(qū)(即外顯子)被非編碼區(qū)(即內(nèi)含子)互相隔開,但又連續(xù)鑲嵌而成,故被稱為斷裂基因。(二)tRNA的轉(zhuǎn)錄后加工 加工修飾包括:剪接(去除內(nèi)含子) 甲基
13、化(生成甲基嘌呤) 還原反應(yīng)(生成DHU) 核苷內(nèi)轉(zhuǎn)位反應(yīng)(形成) 脫氫反應(yīng)(產(chǎn)生I) 加-CCA-OH 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(三)rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工 加工修飾包括: 1、原核生物 16 S 23 S 30 S 5 S 2、真核生物 18 S 5.8 S 45 S 28 S 5 S 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合3、核酶(ribozeme) 由RNA發(fā)揮催化作用的酶稱為核酶,其本質(zhì)是RNA研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 復(fù) 制 轉(zhuǎn) 錄模板 兩股鏈 模板鏈(有意義鏈)原料 dNTP NTP配對(duì) A - T , G - C A - U , G - C 聚合酶 DNA聚合酶 RNA聚合酶產(chǎn)物 半保留DNA
14、 三種RNA 轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的區(qū)別研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 要 點(diǎn)參加蛋白質(zhì)生物合成的物質(zhì)遺傳密碼蛋白質(zhì)生物合成過程和合成后的加工修飾蛋白質(zhì)生物合成的干擾和抑制翻 譯研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合概 念: 指核酸中儲(chǔ)存的遺傳信息,通過遺傳密碼解讀的手段轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì)的氨基酸排列順序的過程。參與蛋白質(zhì)生物合成的物質(zhì): mRNA 模板 tRNA 運(yùn)載體 核蛋白體 裝配場(chǎng)所研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合一、mRNA是翻譯直接模板 遺傳密碼的特點(diǎn): (1)連續(xù)性 (2)簡(jiǎn)并性 除Trp和Met外,一種氨基酸可有多個(gè)密碼(2-6個(gè));且其1,2位堿基大多相同,第三位堿基可不同。 例如: Ser UCU UCC UCA U
15、CG 偏愛性5 3研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 (3)擺動(dòng)性tRNA反密碼的第一位堿基 I U CmRNA密碼的第三位堿基 A , C , U A , G C , G , U (4)通用性 起始密碼:AUG;終止密碼:UAA、UAG、UGA 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合二、合成場(chǎng)所 核糖體(核蛋白體)的組成三、氨基酸活化 氨基酰-tRNA (一)氨基酰-tRNA合成酶 特點(diǎn):1、絕對(duì)轉(zhuǎn)一性(對(duì)底物氨基酸和tRNA都有 高度特異性) 2、具有校正活性(實(shí)際為水解酯鍵催化活性)(二)二步反應(yīng) 氨基酸 + ATP-E 氨基酰-AMP-E + Ppi 氨基酰-AMP-E + tRNA 氨基酰-tRNA + A
16、MP +E 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(三)氨基酰-tRNA的表示方法ala-tRNAalaarg-tRNAargmet-tRNAmete真核:met-tRNAmeti(攜帶延長(zhǎng)肽鏈上Met)(起始者tRNA,被起始因子eIF-2a辨認(rèn))原核:fmet-tRNAmeti 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合四、基本過程(一)起始S-D序列: (原核細(xì)胞)指mRNA起始密碼AUG前若干嘌呤核苷酸的保守序列,可與核糖體16 S rRNA 3-末端UCCU序列互補(bǔ),故又稱為核糖體互補(bǔ)序列(或稱核蛋白體結(jié)合位點(diǎn)) 例如5 A G G A Pu Pu U U U Pu Pu A U G 3研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合mR
17、NAmRNA-小亞基小亞基mRNA-小亞基-fmet-tRNAmRNA-小亞基-fmet-tRNA-大亞基fmet-tRNA大亞基met-tRNA-小亞基小亞基met-tRNA-小亞基- mRNAmet-tRNA-小亞基- mRNA大亞基mRNA大亞基met-tRNA-GTP-eIF真核生物原核生物研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(二)肽鏈的延長(zhǎng)(核糖體循環(huán)) 包括:注冊(cè)、成肽和轉(zhuǎn)位三步(三)終止 多聚核糖體:合成中,在一條mRNA上,有多個(gè)核糖體結(jié)合呈串珠狀,稱為多聚核糖體。研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合五、翻譯后加工(一)一級(jí)結(jié)構(gòu)的修飾 1、去除N-甲?;騈-蛋氨酸 細(xì)胞內(nèi)脫甲?;富虬被拿缚扇コ齆
18、-甲?;?,N-末端蛋氨酸或N-末端一段肽。 2、個(gè)別氨基酸的修飾 如:膠原分子中的羥脯氨酸和羥賴氨酸 3、水解修飾 NC信號(hào)肽103肽(?)ACTH(39)-脂酸釋放激素(91)-促黑激素 -促黑激素內(nèi)啡肽研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(二)高級(jí)結(jié)構(gòu)的修飾 1、亞基聚合 2、輔基連接(糖基化)(三)合成后的靶向輸送(信號(hào)肽、自身結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)構(gòu)) 信號(hào)肽 : 1、1040多個(gè)氨基酸組成 2、堿性氨基酸組成N-端(Lys、Arg) 3、中性氨基酸為主組成疏水核心區(qū)(Leu、Ile) 4、小分子氨基酸組成C-端,即加工區(qū)(Gly、Ala、Ser) 堿基N-端疏水核心區(qū)加工區(qū)(含信號(hào)肽酶裂解位點(diǎn))20或更多
19、個(gè)氨基酸信號(hào)肽結(jié)構(gòu)連接分泌蛋白研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合部分抗生素對(duì)翻譯過程抑制作用的機(jī)理種 類 機(jī) 理 作用對(duì)象四環(huán)素 抑制起始氨基酸-tRNA與核糖體小亞基結(jié)合 原核氯霉素 結(jié)合大亞基,抑制轉(zhuǎn)肽酶活性,阻斷鏈延伸 原核或 真核線粒體鏈霉素(或 結(jié)合小亞基,改變其構(gòu)象,引起讀碼錯(cuò)誤 原核卡那霉素 嘌啉霉素 取代一些氨基酰-tRNA進(jìn)入核糖體A位,終 原核或真核 止肽鏈合成放線菌素 抑制核糖體轉(zhuǎn)肽酶 真核白喉毒素 共價(jià)修飾延長(zhǎng)因子-2,使之失活 真核六、抗生素對(duì)翻譯的抑制作用研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1997年A型題31、紫外線對(duì) DNA的損傷主要是A、引起堿基置換B、導(dǎo)致堿基缺失C、發(fā)生堿基插入
20、D、使磷酸二酯鍵斷裂E、形成嘧啶二聚物 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1997年X型題143、將DNA核苷酸順序的信息轉(zhuǎn)變成為氨基酸順序的過程包括:A、復(fù)制B、轉(zhuǎn)錄C、反轉(zhuǎn)錄D、翻譯研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1998年A型題29、下列哪種酶不參與DNA損傷的切除修復(fù)過程?A、核酸內(nèi)切酶B、核酸外切酶C、DNA聚合酶D、DNA連接酶E、核酸限制性內(nèi)切酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1998年A型題30、下列關(guān)于氨基酸密碼的描述,哪一項(xiàng)是錯(cuò)誤的?A、密碼有種屬特異性,所以不同生物合成不同的蛋白質(zhì)B、密碼閱讀有方向性,5-端起始,3-端終止C、一種氨基酸可有一種以上的密碼D、一組密碼只代表一種氨基酸E、密碼第3位
21、(即3-端)堿基在決定摻入氨基酸的特異性方面重要性較小 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1997年C型題A、不被轉(zhuǎn)錄的序列B、被轉(zhuǎn)錄但不被翻譯的序列C、二者均是D、二者均不是123、DNA上的內(nèi)含子(intron)是指124、DNA上的外顯子(exon)是指 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1997年A型題29、真核生物轉(zhuǎn)錄生成的 mRNA前體的加 工過程不包括:A、5末端加帽B、3末端加多聚A尾C、甲基化修飾D、磷酸化修飾E、剪接去除內(nèi)含子并連接外顯子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1999年A型題31、氯霉素可抑制原核生物的蛋白質(zhì)合成。其原因是 A、特異地抑制肽鏈延長(zhǎng)因子2(EFT2)的活性 B、與核蛋白體的大亞
22、基結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)肽酶活性,而阻斷 翻譯延長(zhǎng)過程 C、活化一種蛋白激酶,從而影響起動(dòng)因子(IF)磷酸化 D、間接活化一種核酸內(nèi)切酶使mRNA降解 E、阻礙氨基酰tRNA與核蛋白體小亞基結(jié)合 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合1999年C型題A、GTP B、ATP C、兩者都需要D、兩者都不需要123、糖原合成時(shí)需要的是124、蛋白質(zhì)生物合成時(shí)需要的是 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2000年A型題29、下列關(guān)于真核生物 DNA復(fù)制特點(diǎn)的描述錯(cuò)誤的是A、RNA引物較小 B、崗崎片段較短 C、片段連接時(shí)由ATP供給能量 D、在復(fù)制單位中,DNA鏈的延長(zhǎng)速度較慢 E、僅有一個(gè)復(fù)制點(diǎn) 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2000年A
23、型題30、AUC為異亮氨酸的遺傳密碼,在tRNA分子中其相應(yīng)的反密碼應(yīng)為A、UAG B、TAG C、GAU D、GAT E、IAG 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2001年A型題30、下列有關(guān)真核細(xì)胞mRNA的敘述,錯(cuò)誤的是A、是由hnRNA經(jīng)加工后生成的B、5末端有m7GpppNmp帽子C、3末端有多聚A尾D、該mRNA為多順反子(多作用)E、成熟過程中需要進(jìn)行甲基化修飾研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2001年A型題31、下列有關(guān)反轉(zhuǎn)錄酶的敘述,錯(cuò)誤的是A、反轉(zhuǎn)錄酶以mRNA為模板,催化合成cDNA B、催化的DNA合成反應(yīng)也是53合成方向C、在催化DNA合成開始進(jìn)行時(shí)不需要有引物 D、具有RNase活
24、性 E、反轉(zhuǎn)錄酶沒有35核酸外切酶活性,因此 它無(wú)校對(duì)功能 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2001年C型題A、DNA聚合酶I B、DNA聚合酶III C、二者都是 D、二者都不是123、具有35外切酶及53外切酶活性的是124、在DNA復(fù)制中,鏈的延長(zhǎng)上起重要作用的是 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2002年A型題26、下列有關(guān)遺傳密碼的敘述,正確的是A、遺傳密碼只代表氨基酸 B、一種氨基酸只是一個(gè)密碼子C、一個(gè)密碼子可代表多種氨基酸D、每個(gè)tRNA上的反密碼只能識(shí)別一個(gè)密碼子E、從病毒到人,絲氨酸的密碼子都是AGU研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2002年A型題28、原核生物中識(shí)別DNA模板上轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的是A、
25、RNA聚合酶的核心酶B、RNA聚合酶的因子C、RNA聚合酶的亞基D、RNA聚合酶的亞基E、因子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2003年A型題27、下列不屬于DNA分子結(jié)構(gòu)改變的是A、點(diǎn)突變 B、DNA重排 C、DNA甲基化 D、堿基缺失 E、堿基插入研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2003年A型題28、真核生物中,催化轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為hnRNA的RNA 聚合酶是A、RNA聚合酶 B、RNA聚合酶I C、RNA聚合酶II D、RNA聚合酶III E、RNA聚合酶-亞基研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合2003年A型題29、下列屬于終止密碼子的是A、UCA B、UCG C、UAC D、UAA E、UGC研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合
26、2003年B型題A、rRNA B、mRNA C、tRNA D、hnRNA E、SnRNA97、含稀有堿基最多的RNA是98、既含內(nèi)含子又含外顯子的RNA是 研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 基因表達(dá)調(diào)控 要 點(diǎn)基因表達(dá)調(diào)控的基本概念原核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控真核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合一、基本概念(一)基因表達(dá) 指基因轉(zhuǎn)錄及翻譯的過程(二)基因表達(dá)的特點(diǎn): 1、時(shí)間特異性 基因表達(dá)嚴(yán)格按特定時(shí)間順 序發(fā)生 多細(xì)胞生物表現(xiàn)發(fā)育“階段特異性”。 2、空間特異性 某基因產(chǎn)物按個(gè)體不同組織空 間順序出現(xiàn),即細(xì)胞(或組 織)特異性。研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(三)基因表達(dá)方式: 1、組成性表達(dá): 管家基因 生命
27、必不可少,幾乎在所有組織細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的一類基因。(不受環(huán)境影響) 2、誘導(dǎo)和阻遏基因表達(dá) 誘導(dǎo)基因和阻遏基因研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合二、原核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié) 原核生物基因組大多按功能相關(guān)性成簇地串聯(lián)、密集于染色體上,共同組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位 操縱子(一)乳糖操縱子誘導(dǎo)型操縱子 1、結(jié)構(gòu)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合操縱序列 O啟動(dòng)序列 P 上游含CAP(分解代謝物 基因激活蛋白)調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)基因 I 編碼一種阻遏蛋白結(jié)構(gòu)基因Z -半乳糖苷酶Y 透酶A 乙?;D(zhuǎn)移酶研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合CAP(同型二聚體)DNA結(jié)合區(qū)cAMP結(jié)合位點(diǎn)2、阻抑蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)3、CAP的正性調(diào)節(jié)4、協(xié)同調(diào)節(jié)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)
28、綜合CAP(分解代謝基因結(jié)合蛋白)結(jié)合位點(diǎn)聚合酶進(jìn)入位點(diǎn)Pi啟動(dòng)基因結(jié) 構(gòu) 基 因操縱基因啟動(dòng)基因調(diào)節(jié)基因mRNA阻抑蛋白別乳糖 乳糖-半乳糖苷酶透性酶乙?;D(zhuǎn)移酶Pi I P O Z Y A乳糖操縱子結(jié)構(gòu)示意圖阻抑蛋白的負(fù)調(diào)節(jié)作用研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合CAP結(jié)合位點(diǎn)RNA聚合酶進(jìn)入位點(diǎn)Pi啟動(dòng)基因結(jié) 構(gòu) 基 因操縱基因啟動(dòng)基因調(diào)節(jié)基因-半乳糖苷酶透性酶乙酰基轉(zhuǎn)移酶Pi I P O Z Y ACAP的正調(diào)節(jié)作用+cAMPcAMP研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合三、真核基因調(diào)控(一)真核基因組特點(diǎn) 基因組龐大 單順反子 重復(fù)序列多 基因不連續(xù)性(二)轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié) 1、順式作用元件順式作用元件正性調(diào)控作
29、用元件負(fù)性調(diào)控作用元件:沉寂子啟動(dòng)子增強(qiáng)子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(1)啟動(dòng)子 RNA聚合酶結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA 序列。(2)增強(qiáng)子 是遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn),決定組織特異 性表達(dá),增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的特定 DNA序列。 特點(diǎn)a、遠(yuǎn)距離作用,在上、下游都能起作用b、作用與其序列的方向無(wú)關(guān)c、對(duì)啟動(dòng)子沒有嚴(yán)格專一性d、必須與特定蛋白質(zhì)因子結(jié)合才能發(fā)揮作用,具組織 或細(xì)胞特異性研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 (3)沉寂子(沉默子或抑制子)2、反式作用因子: 指與順式作用元件DNA序列相結(jié)合或間接影響 其作用的蛋白質(zhì)因子,統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)錄因子。(1)分類: 基本轉(zhuǎn)錄因子RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子所必需 的一組蛋白因子。決
30、定轉(zhuǎn)錄類別。 特異轉(zhuǎn)錄因子為個(gè)別基因轉(zhuǎn)錄所必需。(2)結(jié)構(gòu)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 DNA結(jié)構(gòu)域 鋅指 堿性亮氨酸拉鏈 堿性螺旋-環(huán)-螺旋 轉(zhuǎn)錄激活域 酸性激活域 谷氨酰胺富含域 脯氨酸富含域 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)域 二聚化結(jié)構(gòu)域研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合三、真核基因調(diào)控(一)真核基因組特點(diǎn) 基因組龐大 單順反子 重復(fù)序列多 基因不連續(xù)性(二)轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié) 1、順式作用元件順式作用元件正性調(diào)控作用元件負(fù)性調(diào)控作用元件:沉寂子啟動(dòng)子增強(qiáng)子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(1)啟動(dòng)子 RNA聚合酶結(jié)合并啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的DNA 序列。(2)增強(qiáng)子 是遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn),決定組織特異 性表達(dá),增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的
31、特定 DNA序列。 特點(diǎn)a、遠(yuǎn)距離作用,在上、下游都能起作用b、作用與其序列的方向無(wú)關(guān)c、對(duì)啟動(dòng)子沒有嚴(yán)格專一性d、必須與特定蛋白質(zhì)因子結(jié)合才能發(fā)揮作用,具組織 或細(xì)胞特異性研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 (3)沉寂子(沉默子或抑制子)2、反式作用因子: 指與順式作用元件DNA序列相結(jié)合或間接影響 其作用的蛋白質(zhì)因子,統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)錄因子。(1)分類: 基本轉(zhuǎn)錄因子RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子所必需 的一組蛋白因子。決定轉(zhuǎn)錄類別。 特異轉(zhuǎn)錄因子為個(gè)別基因轉(zhuǎn)錄所必需。(2)結(jié)構(gòu)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 DNA結(jié)構(gòu)域 鋅指 堿性亮氨酸拉鏈 堿性螺旋-環(huán)-螺旋 轉(zhuǎn)錄激活域 酸性激活域 谷氨酰胺富含域 脯氨酸富含域 蛋
32、白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)構(gòu)域 二聚化結(jié)構(gòu)域研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合基因重組的概念、基本過程及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用癌基因的基本概念及活化機(jī)制抑癌基因和生長(zhǎng)因子的基本概念極其作用機(jī)制基因診斷的基本概念、特點(diǎn)及應(yīng)用基因治療的基本概念及基本程序要 點(diǎn)基因工程、癌(抑癌)基因、基因診斷(治療)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(一)工具酶(限制性核酸內(nèi)切酶) 作用特點(diǎn) 識(shí)別雙鏈DNA,并在識(shí)別位點(diǎn)(長(zhǎng)度一般為46個(gè)核苷酸)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶。 切割特點(diǎn): 1、3-突出粘性末端 2、5-突出粘性末端 3、平末端(鈍性末端)3355研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(二)目的基因的來(lái)源和分離 1、基因組DNA文庫(kù)
33、2、cDNA文庫(kù) 3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction, PCR) 4、人工化學(xué)合成研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction PCR) 1、PCR系統(tǒng)的組成: 模板DNA、特異引物、dNTP、 DNA 聚合酶以及含Mg2+的緩沖液 2、基本步驟(循環(huán)三步驟): (1)DNA解鏈(變性) (2)DNA單鏈與引物結(jié)合(退火) (3)引物的延伸(DNA的合成) 3、原理及應(yīng)用(目的基因克隆、體外突變、微量分析)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(三)基因載體(克隆載體) 指能夠攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞,并在其中進(jìn)行擴(kuò)增或誘
34、導(dǎo)外源基因表達(dá)的DNA分子。 表達(dá)載體指可轉(zhuǎn)錄,翻譯成多肽鏈的基因載體。 具備的條件: 能自我復(fù)制 具備篩選標(biāo)志 多克隆位點(diǎn)(接納外源基因) 細(xì)胞中拷貝數(shù)高研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合 分類: 質(zhì)粒載體(Pbr322,pUC19): 共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA;自主復(fù)制并能傳給子代細(xì)胞;共存,但非宿主細(xì)胞生存必需 噬菌體載體( 噬菌體,M13噬菌體) 柯斯質(zhì)粒(cosmid)載體和酵母人工染色體載體 病毒載體(腺病毒載體,逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合pBR322質(zhì)粒圖譜PVUIIPstIOriAmprTetrECoRIBamHISalI載體篩選標(biāo)志 抗生素抗性研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合-互補(bǔ)O
35、riLacILacZMCSAmprpUC19載體圖譜X-gal:5-溴-4氯-3吲哚-D-半乳糖苷-D-半乳糖苷酶-片段(基因載體LacZ )-片段(宿主細(xì)胞)X-gal 培養(yǎng)基上生長(zhǎng): 白色菌落 載體LacZ有外源基因插入 藍(lán)色菌落 載體LacZ無(wú)外源基因插入研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(四)基本方法和基本過程 1、分載體和目的基因的分離 2、切工具酶的應(yīng)用 3、接載體和目的基因連接成重組體 4、轉(zhuǎn)重組體的轉(zhuǎn)化 感受態(tài)細(xì)胞:具接受外源DNA能力的細(xì)胞 5、篩DNA重組體篩選與鑒定研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合ABAB內(nèi)切酶內(nèi)切酶目的基因轉(zhuǎn)化連接載體載體篩選DNA重組技術(shù)的基本步驟研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜
36、合(五)克隆基因的表達(dá)系統(tǒng) 1、原核表達(dá)系統(tǒng) 特點(diǎn):無(wú)轉(zhuǎn)錄和翻譯后加工修飾功能;易形成包涵體 2、真核表達(dá)系統(tǒng)研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合一、癌基因(oncogene)(一)癌基因(原癌基因)的基本概念 癌基因指其異常表達(dá)或其表達(dá)產(chǎn)物異??蓻Q定細(xì)胞惡性表型產(chǎn)生的一類基因。 在正常細(xì)胞內(nèi)處非激活狀態(tài),低表達(dá)或不表達(dá),故亦稱原癌基因。 病毒癌基因(v-onc) 細(xì)胞癌基因(c-onc) 第二十一章 癌基因、抑癌基因與生長(zhǎng)因子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合癌基因產(chǎn)物的主要功能src 家族 酪氨酸蛋白激酶myc 家族 DNA結(jié)合蛋白ras 家族 P21蛋白sis 家族 P28蛋白和人血小板源生長(zhǎng)因子(PDGF)myb 家族 核蛋白(核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子研究生入學(xué)考輔導(dǎo)西醫(yī)綜合(二)癌基因的活化機(jī)制 1、獲得啟動(dòng)子與增強(qiáng)子(插入激活) 2、基因移位 使原來(lái)無(wú)活性的原癌基因移至某些強(qiáng)啟動(dòng)基因或增強(qiáng)子附近而被激活。 3、原癌基因擴(kuò)增(細(xì)胞不恰當(dāng)生長(zhǎng)階段發(fā)生基因擴(kuò)增)
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