物質(zhì)含量檢測分析方法、驗證

1、物質(zhì)含量檢測三種方法、分類 物理化學原理檢測方法：1、容量分析法（滴定法）2、光譜分析法3、色譜分析法生物學原理的“效價測定”：生物檢定法、微生物檢定法、酶法。適用：原料藥：對于組份單一的原料藥，首選精密度高，操作簡便、快速的 容量法測定含量，可根據(jù)藥物分子中所具有的官能團及其化學性質(zhì)， 選用不同的容量分析方法；如用容量法不適宜時，可考慮選用HPLC法，尤其在有關(guān)物質(zhì)干擾， 或多組份物質(zhì)時，具有特殊優(yōu)勢。因儀器或操作間的偏差較大，一般 不選用UV法，尤其不首選“吸收系數(shù)法”定量，不選用末端吸收峰 作測定波長；須用UV法時，可采用不受儀器及其它變化影響的“對 照品比擬法”定量，測定溶液的吸收度宜

2、在0. 30. 7間。制劑：選用方法時應考慮輔料等的干擾，首選方法一般為HPLC法， 在有關(guān)物質(zhì)、輔料不干擾的情況下，也可選用UV法或原料藥項下的 容量法，復方制劑首選HPLC法較為適宜。二、容量分析法是將濃度的滴定液（標準物質(zhì)溶液）由滴定管滴加到被測藥物的 溶液中，直至滴定液中的標準物質(zhì)（常稱為滴定劑）與被測藥物反響 完全（通過適當方法指示），然后根據(jù)滴定液中滴定劑的濃度（一般 稱為滴定液濃度）和被消耗的體積，按化學計量關(guān)系計算出被測藥物 的含量。2、特點（1）簡便易行：所用儀器價廉易得，操作簡便、快速。（2）耐用性高：影響本法測定的試驗條件與環(huán)境因素較少。（3）測定結(jié)果準確：通常情況下本法

3、的相對誤差在0.2%以下，適用 于對準確度要求較高的試樣的分析。（4）專屬性差：本法對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)或其他干擾測定的雜質(zhì) 缺乏選擇性，故一般適用于主成分含量較高的試樣的分析。3、適用范 被廣泛應用于化學原料藥物的含量測定，而較少應用于藥物制劑的含 量測定。4、驗證要求容量分析法的驗證：精密度：用原料藥精制品考察方法精密度，平行試驗5個樣本的 RSDW0. 2%；準確度：以測定原料精制品（含量99. 5%）的回收率（測定值與理 論值的比值）計算，應在99. 7%100. 3%之間（n = 5,RSDW0. 1%）； 滴定終點確定的依據(jù)：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終 點，應用電位法校

4、準終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對 比結(jié)果；耐用性：考察測定條件(供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、 時間等)有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件 要求苛刻時那么應在方法中注明。三、光譜分析法1、原理：所用的波長范圍包括從紫外區(qū)至紅外區(qū)。所用儀器為紫外分光光度 計、可見分光光度計、紅外分光光度計、熒光分光光度計、原子吸收 分光光度計，以及光散射計和拉曼光譜儀。(1)鑒別易行：本法使用的儀器價格較低廉，操作簡單，易于普及。(2)靈敏度高：本法靈敏度可達10-6g/ml,適用于低濃度試樣的分 析。(3)準確度較高：本法的相對誤差不大于2%,適用于對測定結(jié)果的 準確度有較高要求的

5、試樣的分析。(4)專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性。3、驗證要求UV法的驗證：精密度：RSDW1% (n=5)；準確度：方法同HPLC法，回收率應在98%102%之間(n = 9, RSDW2%),同時要求輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物在測定波長處無吸收。線性范圍：用含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n = 57, 吸收度A在0. 2-0. 7間），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的 響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關(guān)系數(shù)r應，0.999,截距 應趨于零，并提供線性關(guān)系圖；耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間、比 色法中顯色劑用量、反響

6、溫度、時間、pH值等）有微小變動時，測 定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時那么應在方法中注 明；靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。四、色譜分析法1、原理：根據(jù)混合物中被別離物質(zhì)的色譜行為差異，將各組分從混合物中別離 后再選擇性對被測組分進行分析的方法。因此色譜分析法是分析混合 物的最有力手段.分為紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜 法等。2、驗證要求HPLC法的驗證：精密度：RSDW2% （n = 5）；準確度：用于制劑時，要考察輔料的影響，將一定量藥物加到按處 方比例配制的輔料中（為標示量的80%120%）制成高、中、低三個 劑量，混合均勻后，每個

7、劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率， 應在 98%102%之間(n = 9, RSDW2%)。線性范圍：用含量的精制品配制一系列濃度的溶液(n = 57), 用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理， 線性方程的相關(guān)系數(shù)r0. 999,截距應趨于零，并提供線性關(guān)系圖; 專屬性：輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物峰對主藥峰應無干擾；耐用性：考察測定條件(供試液穩(wěn)定性、流動相組成和pH值、不 同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數(shù)、時間等) 有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻 時那么應在方法中注明；靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。一)高效

8、液相色譜法(HPLC)1.方法的特點與適用范圍：(1)高靈敏度：根據(jù)檢測器的不同，HPLC的最低檢出濃度可達 10-12-10-9g/mlo(2)高專屬性：HPLC可有效別離復雜基質(zhì)樣品中與被測組分結(jié)構(gòu)相 近的有關(guān)雜質(zhì)或無關(guān)干擾物，檢測信號具有較高的專屬性，可實現(xiàn)對 被測組分的選擇性檢測。(3)高效能與高速度：HPLC通?？稍?020分鐘內(nèi)完成藥物的定 量分析，或在30分鐘內(nèi)完成藥物復方制劑中多組分同時定量測定， 也可在60分鐘內(nèi)完成藥物中有關(guān)物質(zhì)的別離與同時定量。本方法是在190800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于藥物的 鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。(4)高效液相色譜分內(nèi)標法、外標法。二)氣相色譜法(GC)原理：氣相色譜法采用氣體為流動相(載氣)流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進行 別離測定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后，被載氣帶入色譜柱進 行別離，各組分先后進入檢測器，用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。.方法的特點與適用范圍本法主要應用于具有揮發(fā)性或其衍生物具有揮發(fā)性的藥物及其相關(guān) 物質(zhì)的分析，在ChP2015中被廣泛應用于殘留溶劑測定法，也應用于 水分測定法、酒劑或酊劑中甲醇量檢查法等相關(guān)雜質(zhì)的檢查和維生素 E等局部脂溶性較強的藥物及其制劑的含量測定等。.測定法