實驗七大腸桿菌檢測

1、實驗(shyn)七 大腸菌群的測定共十八頁一 實驗(shyn)目的1、掌握(zhngw)大腸桿菌的鑒定和計數(shù)方法2、 鞏固無菌操作技術(shù)共十八頁二 大腸桿菌鑒定(jindng)原理大腸菌群：一群(y qn)能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否染腸道致病菌的可能。 樣品中大腸菌群系以100mL（g）檢樣內(nèi)大腸菌群最大可能數(shù)（MPN)表示。共十八頁 細 菌 學 檢 驗 程 序 樣品 細菌總數(shù) 大腸菌群 水樣稀釋或不稀釋 水樣稀釋或不稀釋 第一步- 初步發(fā)酵試驗(shyn) 傾注平板培養(yǎng) （乳糖發(fā)

2、酵） 37 24小時 37 24小時 菌落計數(shù) 第二步- 平板分離培養(yǎng)（取平均數(shù)報告） （轉(zhuǎn)種鑒別培養(yǎng)基） 37 24小時 革蘭染色鏡檢 第三步- 乳糖復發(fā)酵試驗 報告結(jié)果共十八頁 三、實驗器材 1、恒溫培養(yǎng)箱（361 ）、高壓滅菌鍋、天平、滅菌培養(yǎng)皿、試管。 2、培養(yǎng)基及試劑： 乳糖膽鹽發(fā)酵管、伊紅美藍瓊脂(qingzh)平板（EMB）共十八頁四、實驗(shyn)步驟大腸菌群的檢測 檢品 膽鹽乳糖發(fā)酵管 伊紅美蘭平板 大腸桿菌菌落純培養(yǎng) 乳糖復發(fā)酵管（-） 乳糖復發(fā)酵管（） 共十八頁1、檢樣稀釋以無菌操作將檢樣1mL放于含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1

3、：10的均勻稀釋液。用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，注入含有9mL生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液。另取1ml滅菌吸管，按上述操作依次作10倍遞增稀釋液。根據(jù)食品衛(wèi)生要求或?qū)z驗樣品污染情況估計，選擇(xunz)三個稀釋度，每個稀釋度，接種3管，每支試管接種1ml。共十八頁2. 乳糖發(fā)酵試驗 將待檢樣品接種(jizhng)于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種(jizhng)量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；1mL及1mL以下者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一個稀釋度接種3管，置361溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24h2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有

4、產(chǎn)生者，則按下列程續(xù)進行。共十八頁3.分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上，置361溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)并做革蘭氏染色和證實試驗。4.證實試驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置361的溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，即報告為大腸菌群陽性。5.報告根據(jù)(gnj)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）食品中大腸菌群的MPN 值。共十八頁表1 大腸菌群最可能(knng)數(shù)（MPN）檢索表 陽性管數(shù) MPN 100mL(g） 95%可信限 1m

5、L(g)3 0.1mL(g) 3 0.01mL(g) 3 下限 上限 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 30 30 60 90 5 90 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 2 3 30 60 90 120 5 130 0 0 0 0 2 2 2 2 0 1 2 3 60 90 120 160 0 0 0 0 3 3 3 3 0 1 2 3 90 130 160 190 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 2 3 40 70 110 150 5 10 200 210 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 70 110 150 190 10 30 230 360

6、1 1 1 1 2 2 2 2 0 1 2 3 110 150 200 240 30 360 1 1 1 1 3 3 3 3 0 1 2 3 160 200 240 290共十八頁 2 2 2 200000123901402002601030360370 2 2 2 2111101231502002703403070440890 2 2 2 22222012321028035042040100470150022223333012329036044053033330000012323039064095040701501200130038003333111101234307501200160070

7、1403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000240003607101500130002400048000共十八頁大腸菌群測定(cdng) 挑選(tioxun)菌落特征：黑紫色、有光澤或無光澤菌落； 紅色、粉紅色菌落。抑制劑：膽鹽、煌綠、十二烷基硫酸鈉。 產(chǎn)酸判斷：紫色培養(yǎng)液變成黃色產(chǎn)氣判斷：發(fā)酵導管內(nèi)有小氣泡，如輕輕打動試管有氣泡沿管壁上浮，應考慮可能有氣體產(chǎn)生，需進一步試驗。 共十八頁共十八頁 飲用水、乳、冷飲食品衛(wèi)生標準的細菌指標 指 標 細菌總數(shù) 大腸

8、菌群 飲用水 100個/ml 3個/L 消毒牛奶 30，000個/ml 40個/100ml 瓶裝汽水、果味水 及果汁(guzh)類飲料 品 種 100個/ml 5個/100ml共十八頁五、實驗報告（一）、列表記錄并計算實驗結(jié)果(ji gu)（二）、思考題1、怎樣判斷分離到的微生物是大腸桿菌？2、接種了微生物的培養(yǎng)皿為什么要倒置培養(yǎng)？共十八頁實驗準備(zhnbi)（2個樣品/組）培養(yǎng)皿：10套/組無菌水：10支（9毫升/支）乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基： 100ml 18支試管(shgun)、5ml/支伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（EMB）: 200ml 8-10個平板共十八頁下周實驗(shyn)實驗(shyn)八 化學藥劑對微生物生長的影響共十八頁內(nèi)容摘要實驗七 大腸菌群的測定。大腸菌群：一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染(wrn)指標來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否染腸道致病菌的可能。樣品中大腸菌群系以100mL（g）檢樣內(nèi)大腸菌群最大可能數(shù)（MPN)表示。水樣稀釋或不稀釋。第一步- 初步發(fā)酵試驗。四、實驗