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1、超高效液相色譜(UPLC)簡介UPLC原理基礎(chǔ)隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,液相色譜用戶對液相色譜技術(shù)的要求也不斷提高,他們需要“更快地得到更好的結(jié)果”。因此超高效液相色譜(UltraPerformanceLC)概念的提出也就十分自然;簡單的說:UPLC是用HPLC的極限作為自己的起點(diǎn),把分離科學(xué)推向一個新領(lǐng)域。沃特世公司引入UPLC的概念是由研究著名的vanDeemter方程式及其曲線開始。由vanDeemter曲線可以得到以下幾點(diǎn)啟示:首先,顆粒度越小柱效越高;其次,不同的顆粒度有各自最佳柱效的流速;最后,更小的顆粒度使最咼柱效點(diǎn)向更咼流速(線速度)方向移動,而且有更寬的線速度范圍。所以降低顆粒度不
2、但能提高柱效,同時還能提高分析速度。使用更高的流速會受到色譜柱填料耐壓及儀器耐壓的限制。反之;如果不用到最佳流速,小顆粒度填料的高柱效就無法體現(xiàn)。此外;更高的柱效需要更小的系統(tǒng)體積(死體積)、更快持,否則小顆粒度填料的高柱效同樣無法充分體現(xiàn)。等一系列條件的支因此;要真正創(chuàng)建一個全新的分離科學(xué)領(lǐng)域一UPLC,必須解決以下幾個問題:1.-2.3.4.5.6.大幅度提高色譜柱的性能:第一要解決小顆粒填料的耐壓問題,第二要解決小顆粒填料的裝填問題,包括顆粒度的分布以及色譜柱的結(jié)構(gòu)。高壓溶劑輸送單元(超過15,000psi)完善的系統(tǒng)整體性設(shè)計,降低整個系統(tǒng)的體積,特別是死體積,并解決超高壓下的耐壓及滲
3、漏問題??焖僮詣舆M(jìn)樣器,降低進(jìn)樣的交叉污染高速檢測器;優(yōu)化流動池以解決高速檢測及擴(kuò)散問題系統(tǒng)控制及數(shù)據(jù)管理,解決高速數(shù)據(jù)的采集、儀器的控制問題新型的色譜填料及裝填技術(shù)UPLC分離只有在新型的、耐壓而且顆粒度分布范圍很窄的1.7如顆粒填料合成出來之后才有可能實(shí)現(xiàn)。色譜柱技術(shù)應(yīng)該涵蓋幾個方面的內(nèi)容:首先是填料的合成,以得到高質(zhì)量的填料顆粒,包括:耐高壓、耐酸堿等等。其次是顆粒的篩選,選出顆粒度分布盡可能窄的填料。最后是裝填技術(shù),以保證既能堵住顆粒不使其外流,又不至于引起反壓的大幅升高。沃特世公司的ACQUITYUPLCBEH色譜柱使用了更嚴(yán)格的篩分技術(shù),使1.7如填料的分布很窄,并且使用了全新篩板
4、(專利申請中)及其它色譜柱硬件(柱管及其連接件),在超過20,000psi的壓力下裝填。沃特世公司為此安裝了一條新的色譜柱裝填生產(chǎn)線及新的測試設(shè)備。因此;ACQUITYUPLC色譜柱的性能及質(zhì)量比目前的HPLC柱有了質(zhì)的飛躍?;?.7nm小顆粒技術(shù)的UPLC,與人們熟知的HPLC技術(shù)具有相同的分離原理。不同的是:UPLC不僅比傳統(tǒng)HPLC具有更高的分離能力,而且結(jié)束了人們多年來不得不在速度和分離度之間忍痛割舍的歷史。使用UPLC可以在很寬的線速度、流速和高反壓下進(jìn)行高效的分離工作,并獲得優(yōu)異的結(jié)果。(見下圖)HPLC112.1x150mm,5pmRs(2,3)=4292a-44t-A.K.I
5、JJJIJECozm&ecluNqgq11最高速度和靈敏度相同分離度2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.00Minutes180020.00軸佳分離度更快和更高靈敏度0.00ECUPLC速度提高8借靈敏度提高3.4倍分離度蚓司42.1x50mm.1.7pm1Rs(2.3)=428|23iJiJL0.400.801-1.201.60Minutes血2.500.501.001.502.002.503.00Minut已乞3.504.00.26*o4.50UPLC用1.7“m顆粒提高了分離能力,可以分離出更多的色譜峰,從而對樣品所能提供的信息達(dá)到了一個新的水平。而且又極大地縮短了開發(fā)方法所需的時間。MinutesUPLC:HPLC的未來UPLC可以更快的速度和更高的質(zhì)量完成以往HPLC的工作,沃特世將致力于豐富已有的UPLC產(chǎn)品,現(xiàn)已推出了六種新的色譜柱,包括:BEHC18、C8、苯基和ShieldRP18、HILIC及HSST3。
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