鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵

1、鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵2022/8/121實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)確定實(shí)驗(yàn)條件的方法，掌握鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵的方法原理。掌握722型可見分光光度計(jì)的使用方法，并了解此儀器的主要構(gòu)造。2022/8/122吸光光度法（Absorption Photometry）：基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性而建立的分析方法。包括比色法、紫外可見分光光度法、紅外分光光度法。廣泛用于無機(jī)物和有機(jī)物的定性和定量分析。實(shí)驗(yàn)原理2022/8/1232、光譜分區(qū)能 量 小200nm400nm750nm 大波 長(zhǎng)光譜區(qū)域紫外光區(qū)可見光區(qū)紅外分析方法紫外分光光度法可見分光光度法50um紅外分光光度法紫、藍(lán)、青、綠、黃、橙、紅2022

2、/8/1243、物質(zhì)對(duì)光的吸收1、物質(zhì)對(duì)光選擇性吸收的實(shí)質(zhì)一束光通過某物質(zhì)時(shí)該物質(zhì)的分子、原子或離子與光子發(fā)生碰撞，光子的能量轉(zhuǎn)移至分子、原子或離子上，使這些粒子發(fā)生能級(jí)變化，由基態(tài)躍遷至較高能態(tài)，這個(gè)過程即為吸收。光是否被物質(zhì)吸收，取決于光子的能量物質(zhì)的結(jié)構(gòu)只有當(dāng)能級(jí)差E 與光子能量h相當(dāng)時(shí)物質(zhì)吸收光。2022/8/1254、吸收曲線（吸收光譜）吸收曲線：吸光度隨波長(zhǎng)變化的曲線。吸收曲線的特點(diǎn)：不同的物質(zhì)因其分析結(jié)構(gòu)不同而具有不同的吸收曲線；同一物質(zhì)，濃度不同，其吸收曲線的形狀和max的位置不變，但在同一波長(zhǎng)下吸光度隨濃度的增大而增大。吸收曲線是吸光度法選擇測(cè)量波長(zhǎng)的依據(jù)。2022/8/12

3、6吸光度 A吸 收 曲 線 圖4005006000.1000.2000.3000.4002022/8/1275、朗伯比耳定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系。Ab 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系。A c 二者的結(jié)合稱為朗伯比耳定律。2022/8/128朗伯比耳定律 吸光度A：表征物質(zhì)對(duì)光吸收程度的量。 A= lgIi/It = -lgT =bcA-吸光度-摩爾吸光系數(shù)C-被測(cè)物濃度Ii-入射光強(qiáng) T-透過率 b-液層厚度（光程長(zhǎng)度） It-透射光強(qiáng)2022/8/129

4、標(biāo)準(zhǔn)（工作）曲線 標(biāo)準(zhǔn)（工作）曲線繪制方法：在、b固定的情況下，測(cè)定一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，作Ac圖，在相同條件下測(cè)定樣品溶液的吸光度，從曲線上可查出被測(cè)樣品的濃度。2022/8/1210工作曲線圖濃度（c）吸光度2022/8/1211可見分光光度計(jì)光 源吸收池檢測(cè)器單色器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)一、可見光分光光度法一、儀器結(jié)構(gòu)框圖2022/8/12121、光源基本要求：在儀器工作的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，提供連續(xù)、有足夠發(fā)射強(qiáng)度和良好穩(wěn)定性的復(fù)合光，而且發(fā)射光的強(qiáng)度隨波長(zhǎng)的變化應(yīng)盡可能小。常用光源：鎢絲燈和鹵鎢燈，可使用的波長(zhǎng)范圍在360 2500nm。 2022/8/12132、單色器單色器作用：從光源

5、發(fā)出的復(fù)合光中分出所需要的單色光。單色器組成：由入射狹縫、準(zhǔn)光器（透鏡或凹面反射鏡使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狹縫等組成。單色器的核心部分是色散元件（如玻璃棱鏡和光柵），起分光的作用。2022/8/1214 吸收池用于盛放分析試樣； 可見光區(qū)只能用玻璃吸收池； 吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向； 吸收池要配對(duì)。因?yàn)槲粘夭牧媳旧砦馓卣饕约拔粘氐墓獬涕L(zhǎng)度的精度等對(duì)分析結(jié)果都有影響。3、吸收池2022/8/1215 檢測(cè)器的功能：檢測(cè)信號(hào)、測(cè)量單色光透過溶液后光強(qiáng)度變化。 常用的檢測(cè)器有光電池、光電管和光電倍增管等。 4、檢測(cè)器2022/8/1216分光光度計(jì)的使用 預(yù)熱2

6、0min。 調(diào)節(jié)T = 0。 調(diào)節(jié)T = 100% （A=0）。 測(cè)定樣品的吸光度A。2022/8/1217分光光度計(jì)的保養(yǎng)與維護(hù)安置在干燥、無污染的地方；儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源，應(yīng)按開關(guān)機(jī)順序關(guān)閉主機(jī)和穩(wěn)流穩(wěn)壓電源開關(guān)；比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗干凈，把水漬擦凈；2022/8/1218鄰二氮菲法測(cè)定微量鐵 根據(jù)朗伯比耳定律：A=bc，當(dāng)入射光波長(zhǎng)及光程b一定時(shí)，在一定濃度范圍內(nèi)，有色物質(zhì)的吸光度A與該物質(zhì)的濃度c成正比。只要繪出以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)出試液的吸光度，就可以由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得對(duì)應(yīng)的濃度值，即未知樣的含量。 用分光光度法測(cè)定試樣中的微

7、量鐵，目前一般采用鄰二氮菲法，該法具有高靈敏度、高選擇性，且穩(wěn)定性好，干擾易消除等優(yōu)點(diǎn)。2022/8/1219 在pH=29的溶液中，F(xiàn)e2+與鄰二氮菲(phen)生成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe(phen)32+：此配合物的lgK穩(wěn)=21.3，摩爾吸光系數(shù)510 = 1.1104 Lmol-1cm-1，而Fe3+能與鄰二氮菲生成31配合物，呈淡藍(lán)色，lgK穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應(yīng)用鹽酸羥胺(NH2OHHCl)將Fe3+還原為Fe2+，其反應(yīng)式如下：2Fe3+2NH2OHHCl2Fe2+N2+H2O+4H+2Cl-測(cè)定時(shí)控制溶液的酸度為pH5較為適宜。用鄰二氮菲可測(cè)定試樣中鐵的總量。2

8、022/8/12201. 配置一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液;2. 測(cè)定其中一標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收曲線,找到最大吸收波長(zhǎng); (空白溶液為參比)3. 在最大吸收波長(zhǎng)處,測(cè)定一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,作標(biāo)準(zhǔn)曲線; (空白溶液為參比)4.在最大吸收波長(zhǎng)處,測(cè)定試樣的吸光度5. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到試樣中鐵含量.實(shí)驗(yàn)步驟及數(shù)據(jù)處理 2022/8/12211.分別移取10g/mL鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL于6個(gè)50mL容量瓶中，各加入1 mL 10%鹽酸羥胺，搖勻，經(jīng)2min后，再加5mL1mol/L NaAc溶液及3mL0.1% 鄰二氮菲，蒸餾水定容。2.吸收曲線的繪制 用1 cm吸收池，以試劑空白溶液(1號(hào))為參比，在440560 nm之間，每隔10 nm測(cè)定一次標(biāo)準(zhǔn)溶液(2號(hào))的吸光度A，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸收曲線，從而選擇測(cè)定鐵的最大吸收波長(zhǎng)。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以試劑空白溶液(1號(hào))作