紫外可見(jiàn)吸收光譜法基本原理和解析

1、紫外可見(jiàn)吸收光譜法基本原理和解析2022/8/1412022/8/142一、概述1.定義：在光譜分析中，依據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的分析方法稱為吸光光度法。紅外吸收光譜（IR） 分子振動(dòng)光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍1000 m ,主要用于有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定。 （主要應(yīng)用中紅外2.5 25 m ）2022/8/143紫外吸收光譜（UV） 電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍200400 nm（近紫外區(qū)） ，研究對(duì)象大多為具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的分子。可用于無(wú)機(jī)物和有機(jī)物的定性和定量分析。可見(jiàn)吸收光譜（Vis） 電子躍遷光譜，吸收光波長(zhǎng)范圍400780 nm ，主要用于有色物質(zhì)的定量分析。 本章主要講授紫

2、外可見(jiàn)吸光光度法。2022/8/144UV-Vis吸收光譜與電子結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，物質(zhì)的分子對(duì)200 780 nm的入射光進(jìn)行選擇性吸收，由于價(jià)電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的帶狀光譜。2022/8/1453.方法特點(diǎn)靈敏度高：可測(cè)定10-6 10-7-1的物質(zhì)準(zhǔn)確度高：RE%一般在1 5%。分析速度快：方法簡(jiǎn)單、儀器設(shè)備小型， 易于操作。應(yīng)用廣泛：常用于無(wú)機(jī)物定量分析、有機(jī) 物進(jìn)行鑒定及結(jié)構(gòu)分析（推測(cè) 有機(jī)化合物中的官能團(tuán)及分子 骨架結(jié)構(gòu)）。2022/8/146方法的局限性 有些有機(jī)化合物在UV-Vis光區(qū)沒(méi)有吸收譜帶（如正己烷、正庚烷等），有的吸收光譜相近（如甲苯和乙苯的光譜大體相同）。還要借助于紅外(I

3、R)、核磁共振(NMR)、質(zhì)譜(MS)等進(jìn)行定性及結(jié)構(gòu)分析。2022/8/147二、紫外可見(jiàn)吸收光譜1.光的基本性質(zhì) 光是一種電磁波，具有波粒二象性。光的波動(dòng)性可用波長(zhǎng)、頻率、光速c、波數(shù)（cm-1）等參數(shù)來(lái)描述。 = c 波數(shù) = 1/ = /c 光是由光子流組成，光子的能量： E = h = h c / （Planck常數(shù)：h=6.626 10 -34 J S )光的波長(zhǎng)越短（頻率越高），其能量越大。 2022/8/148白光(太陽(yáng)光)：由各種單色光組成的復(fù)合光單色光：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)的光(由具有相同能量的光 子組成)。可見(jiàn)光區(qū)：400780 nm紫外光區(qū)：近紫外區(qū)200400 nm遠(yuǎn)紫外區(qū)：10

4、- 200 nm （真空紫外區(qū)）2.物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收及吸收曲線M0 + h M *M + 熱M + 熒光或磷光基態(tài) 激發(fā)態(tài)E1 （E） E22022/8/149白光綠紫橙青藍(lán)黃藍(lán)青紅互補(bǔ)色光示意圖2022/8/1410 E = E2 - E1 = h 物質(zhì)結(jié)構(gòu)不同，具有不同的量子化能級(jí)排布 ，物質(zhì)分子對(duì)入射光具有選擇性吸收。 分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使其對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度不同。用不同波長(zhǎng)的單色光照射，測(cè)吸光度- 吸收曲線(最大吸收波長(zhǎng) max)。 藍(lán) 黃 450480nm 580600nm2022/8/1411吸收曲線的討論（1）同一種物質(zhì)對(duì)不同波 長(zhǎng)光的吸光度不同。 吸光度最大處 對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)

5、稱為最大吸收波長(zhǎng)max。（2）不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線 形狀相似、max不變。而對(duì)于不同物 質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和max則不 同。2022/8/1412（3）吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息， 并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。（4）在max處吸光度隨濃度變化的幅度 最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線是 定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依 據(jù)。2022/8/1413紫外可見(jiàn)吸收曲線2022/8/1414三、光的吸收定律1.朗白-比耳定律布格(Bouguer)和朗白(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度的關(guān)系。Ab1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度

6、和吸收物濃度之間也具有類似的關(guān)系 A c 二者的結(jié)合稱為朗白比耳定律，其數(shù)學(xué)表達(dá)式為： Alg（I0 / It)= b c 2022/8/1415 Alg（I0 / It )= b c A 吸光度，描述溶液對(duì)光的吸收程度； b 液層厚度(光程長(zhǎng)度)，cm c 溶液的摩爾濃度，molL 摩爾吸光系數(shù)，Lmolcm 或: Alg（I0 / It )= a b c c 溶液的濃度，gL a 吸光系數(shù)，Lgcm a與的關(guān)系為： a = / M （M為摩爾質(zhì)量）2022/8/1416(1)朗白比耳定律是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測(cè)定的依據(jù)，應(yīng)用于各種光度法的吸收測(cè)量。(2)朗白比耳定律成立的前提條件 入

7、射光為單色光 吸收發(fā)生在均勻的介質(zhì)中 在吸收過(guò)程中，吸光物質(zhì) 之間不發(fā)生相互作用2022/8/1417(3)摩爾吸光系數(shù)物理意義 在數(shù)值上等于濃度為1 mol/L、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下的吸光度。(4)吸光系數(shù)a(Lg-1cm-1）相當(dāng)于濃度為1 g/L 、液層厚度為1cm時(shí)該溶液在某一波長(zhǎng)下 的吸光度。2022/8/14182.摩爾吸光系數(shù)的討論（1）吸收物質(zhì)在一定波長(zhǎng)和溶劑條件下的 特征常數(shù)。（2）不隨濃度c和光程長(zhǎng)度b的改變而改 變。在溫度和波長(zhǎng)等條件一定時(shí)， 僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待 測(cè)物濃度無(wú)關(guān)。（3）可作為定性鑒定的參數(shù)。2022/8/1419（4）同一吸收物

8、質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的值 是不同的。在最大吸收波長(zhǎng)max 處的摩爾吸光系數(shù)以max表示。 max表明了該吸收物質(zhì)最大限度的 吸光能力，也反映了光度法測(cè)定該 物質(zhì)可能達(dá)到的最大靈敏度。2022/8/14203.偏離朗白比耳定律的原因 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯-比耳定律的偏離。 引起這種偏離的原因：（1）入射光非單色光。 儀器的非理想引起的（2）溶液不均勻。（3）溶液中發(fā)生了化學(xué)變化2022/8/1421物理性因素 難以獲得真正的純單色光。 朗白-比耳定律的前提條件之一是入射光為單色光。分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合

9、光可導(dǎo)致對(duì)朗伯比耳定律的正或負(fù)偏離。2022/8/1422 為克服非單色光引起的偏離，首先應(yīng)選擇比較好的單色器。此外還應(yīng)將入射波長(zhǎng)選定在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)且吸收曲線較平坦處?；瘜W(xué)性因素 朗白-比耳定律的假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用。只有稀溶液(c10 2 mol/L 時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間可能發(fā)生締合等相互作用，直接影響了對(duì)光的吸收。 2022/8/1423朗伯比耳定律只適用于稀溶液。當(dāng)溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學(xué)平衡時(shí)，使吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。 例：鉻酸鹽或重鉻酸鹽溶液中存在下列 平衡。CrO42- 2H Cr2O72- H2O 溶液中CrO42-

10、、 Cr2O72-的顏色不同，吸光性質(zhì)也不相同。此時(shí)溶液pH 對(duì)測(cè)定有重要影響。2022/8/1424四、分子吸收光譜與電子躍遷1.紫外可見(jiàn)分子吸收光譜與電子躍遷（1）物質(zhì)分子內(nèi)部三種運(yùn)動(dòng)形式 （與光譜產(chǎn)生有關(guān)的運(yùn)動(dòng)） 分子中電子相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng) 分子中原子間的相對(duì)振動(dòng) 分子本身繞其質(zhì)量重心的轉(zhuǎn)動(dòng)（2）分子具有三種不同能級(jí) 電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)三種能級(jí)都是量子化的，且各自具有相應(yīng)的能量。2022/8/1425分子的內(nèi)能： 電子能量Ee 振動(dòng)能量Ev 轉(zhuǎn)動(dòng)能量Er即EEe+Ev+Er evr遠(yuǎn)IRIR(中)UV-Vis2022/8/1426 UV-Vis光譜屬于電子躍遷光譜。電子能級(jí)間

11、躍遷的同時(shí)總伴隨有振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間的躍遷。即電子光譜中總包含有振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)間躍遷產(chǎn)生的若干譜線相互疊加而呈現(xiàn)寬譜帶。2022/8/1427 UV-Vis光譜的產(chǎn)生是由于分子中價(jià)電子能級(jí)躍遷產(chǎn)生的。2.價(jià)電子種類 在有機(jī)化合物分子中，與UV-Vis光譜有關(guān)的價(jià)電子共三種。形成單鍵的電子形成雙鍵的電子分子中未成鍵的孤對(duì)電子，即n電子2022/8/1428分子軌道理論 一個(gè)成鍵軌道必定有一個(gè)相應(yīng)的反鍵軌道。通常外層電子均處于分子軌道的基態(tài)，即成鍵軌道或非鍵軌道上。外層電子吸收紫外或可見(jiàn)輻射后，從基態(tài)向激發(fā)態(tài)(反鍵軌道)躍遷。主要有四種躍遷。所需能量E大小順序?yàn)椋? n* n*2022/8/14

12、293.價(jià)電子的躍遷方式（1）躍遷( 200nm ) 所需能量最大，電子只有吸收遠(yuǎn)紫外光的能量才能發(fā)生躍遷。飽和烷烴的分子吸收光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)(吸收波長(zhǎng)200nm的光)，但當(dāng)它們與生色團(tuán)相連時(shí)，就會(huì)發(fā)生n*共軛作用，增強(qiáng)生色團(tuán)的生色能力(吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，且吸收強(qiáng)度增加)，這樣的基團(tuán)稱為助色團(tuán)。2022/8/14365.紅移與藍(lán)移 有機(jī)化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩL(zhǎng)max和吸收強(qiáng)度max發(fā)生變化。 max向長(zhǎng)波方向移動(dòng)稱為紅移，向短波方向移動(dòng)稱為藍(lán)移 (或紫移)。吸收強(qiáng)度即摩爾吸光系數(shù)增大或減小的現(xiàn)象分別稱為增色效應(yīng)或減色效應(yīng)。2022/8/1437含n電子取

13、代使n*紅移。如CH4、CH3Cl、CH3I 的 max分別為125、173、258nm。極性溶劑使n*藍(lán)移；使*紅移。2022/8/14386.吸收帶 吸收峰的波帶位置。（1）R吸收帶（弱帶） n*躍遷的吸收帶又稱R吸收帶，max在200400nm。強(qiáng)度弱，一般為102以下。如：含羰基(C=O)、偶氮(N=N)基團(tuán)的化合物。（2）K吸收帶（強(qiáng)帶） 在共軛非封閉（烯烴）體系中，由*躍遷產(chǎn)生的吸收帶又稱為K吸收帶。吸收強(qiáng)度大，一般104，吸收峰在217280nm 。有兩個(gè)以上的雙鍵共軛時(shí)，隨著共軛系統(tǒng)的延長(zhǎng)有紅移現(xiàn)象。 如苯乙烯、苯甲醛等有K帶，極性溶劑使K帶紅移。2022/8/1439K吸收帶

14、及其紅移現(xiàn)象芳環(huán)上有發(fā)色基團(tuán)取代時(shí)(苯乙烯、苯乙酮)也有K帶。2022/8/1440（3）B吸收帶（苯吸收帶） 芳香族化合物的*躍遷而產(chǎn)生的精細(xì)結(jié)構(gòu)吸收帶。吸收峰在230270nm ，102。常用B吸收帶的精細(xì)結(jié)構(gòu)來(lái)判斷芳香族化合物，但苯環(huán)上有取代基且共軛時(shí)，B帶簡(jiǎn)單化、紅移和增色；B帶在蒸汽狀態(tài)或非極性溶劑中極為明顯；而在極性溶劑中B帶不明顯或消失。苯的紫外吸收光譜（異辛烷） 2022/8/1441（4）E吸收帶（封閉共軛體系） 芳香族化合物的*躍遷而產(chǎn)生的特征吸收帶。分為E1吸收帶和E2吸收帶。 E1帶出現(xiàn)在185nm ， 104； E2帶出現(xiàn)在204nm ， 103。芳香族化合物為環(huán)狀共

15、軛體系。苯環(huán)結(jié)構(gòu)中三個(gè)乙烯的環(huán)狀共軛系統(tǒng)產(chǎn)生了E1、 E2吸收帶，是芳香族化合物的特征吸收。B吸收帶和E吸收帶是芳香族化合物的特征吸收帶，常用來(lái)判斷化合物中是否有芳香環(huán)存在。2022/8/1442 5-2 UV-Vis分光光度計(jì)752型UV-Vis分光光度計(jì)2022/8/1443一、儀器的基本構(gòu)造光源單色器樣品室檢測(cè)器顯示1.光源 在整個(gè)紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)可以發(fā)射連續(xù)光譜，具有足夠的輻射強(qiáng)度、較好的穩(wěn)定性、較長(zhǎng)的使用壽命。2022/8/1444可見(jiàn)光區(qū)：鎢燈或碘鎢燈作為光源，其輻射波 長(zhǎng)范圍在3201000 nm。紫外區(qū)：氫、氘燈。發(fā)射180360 nm的連續(xù)光 譜。D2燈 MgF2窗115

16、-230nm； 石英窗155-310nm。2.單色器 將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光并可從中選出一任波長(zhǎng)單色光的光學(xué)系統(tǒng)。色散元件：將復(fù)合光分解成單色光。棱鏡或光柵 目前大多儀器使用光柵，可用于整波段，成本低，便于保存，分辨能力均勻一致。2022/8/1445玻璃棱鏡只能用于可見(jiàn)光區(qū)；石英棱鏡可用于紫外光區(qū)。石英在紫外光區(qū)有較高的色散率，而在可見(jiàn)光區(qū)的色散率不及光學(xué)玻璃。光柵是利用光的衍射與干涉作用制成的。光柵在很寬的波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有相同的色散率。2022/8/14463. 樣品室 樣品室放置各種類型的吸收池(比色皿)和相應(yīng)的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池兩種。紫外區(qū)須采用石英池；(1cm

17、)可見(jiàn)區(qū)一般用玻璃池。(、1、2、3cm)2022/8/14474. 檢測(cè)器 利用光電效應(yīng)將透過(guò)吸收池的光信號(hào)變 成可測(cè)的電信號(hào)，常用的有光電池、光電管、光電倍增管(PMT)或光電二極管陣列(PDA)檢測(cè)器。5. 結(jié)果顯示記錄系統(tǒng) 檢流計(jì)、數(shù)字顯示、微機(jī)進(jìn)行儀器自動(dòng) 控制和結(jié)果處理。2022/8/1448二、分光光度計(jì)的類型 簡(jiǎn)單、價(jià)廉，適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。2022/8/14492.雙光束 利用斬光器將單色光一分為二，分別經(jīng)過(guò)參比和樣品池，可消除光源不穩(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)

18、格較高。2022/8/14503.雙波長(zhǎng) 將不同波長(zhǎng)的兩束單色光(1、2)快速交替通過(guò)同一吸收池而后到達(dá)檢測(cè)器，無(wú)需參比池。A=A 1 - A 2 ?？蓽y(cè)高濃度、混濁、多組分混合試樣。2022/8/1451 5-3 顯色與測(cè)量條件的選擇一、顯色反應(yīng)的選擇及類型1.靈敏度高、選擇性高、生成物穩(wěn)定、顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收。 兩種有色物最大吸收波長(zhǎng)之差： “對(duì)比度”，要求 60nm。 當(dāng)金屬離子與有機(jī)顯色劑形成配合物時(shí)，產(chǎn)生很強(qiáng)的紫外可見(jiàn)吸收光譜。 Fe2+ 與鄰二氮菲橙紅色溶液 Cr6+與二苯碳酰二肼紅色溶液 2022/8/14523.氧化還原顯色反應(yīng) 某些元素的氧化態(tài)，如Mn（）、Cr（）

19、在紫外或可見(jiàn)光區(qū)能強(qiáng)烈吸收，可利用氧化還原反應(yīng)對(duì)待測(cè)離子進(jìn)行顯色后測(cè)定。 如：鋼中微量錳的測(cè)定，Mn2不能直接 進(jìn)行光度測(cè)定。 2 Mn2 5 S2O82-8 H2O =2 MnO4- + 10 SO42- 16H+ 將Mn2氧化成紫紅色的MnO4-后，在525 nm處進(jìn)行測(cè)定。2022/8/1453二、顯色反應(yīng)條件的選擇1.顯色劑用量：選擇曲線變化平坦處。2.反應(yīng)體系的酸度：在相同實(shí)驗(yàn)條件下，分別測(cè)定不同pH值條件下顯色溶液的吸光度。選擇曲線中A較大且恒定的平坦區(qū)所對(duì)應(yīng)的pH范圍。3.顯色時(shí)間與溫度：實(shí)驗(yàn)確定4.溶劑：一般盡量采用水相測(cè)定。2022/8/1454三、共存離子干擾的消除 例：測(cè)

20、定Ti4，可加入H3PO4掩蔽劑使 Fe3+(黃色)成為Fe(PO)23-(無(wú)色)，消 除Fe3+的干擾。 又如：用鉻天菁S光度法測(cè)定Al3+時(shí)，加入 抗壞血酸作掩蔽劑將Fe3+還原為 Fe2+，消除Fe3+的干擾。2.選擇適當(dāng)?shù)娘@色反應(yīng)條件。3.分離干擾離子。2022/8/1455四、測(cè)定條件的選擇 一般應(yīng)該選擇max為入射光波長(zhǎng)。 如果max處有共存組分干擾時(shí)，則應(yīng)考慮選擇靈敏度稍低但能避免干擾的入射光波長(zhǎng)。依據(jù)“吸收最大，干擾最小”2022/8/14562.選擇合適的參比溶液目的 測(cè)得的的吸光度真正反映待測(cè)溶液吸光強(qiáng)度。 參比溶液的選擇一般遵循以下原則 若僅待測(cè)組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測(cè)定

21、波長(zhǎng)處有 吸收，其它所加試劑均無(wú)吸收，用純?nèi)軇ㄋ?作 參比溶液。若顯色劑或其它所加試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處略有吸收， 而試液本身無(wú)吸收，用“試劑空白”(不加試樣溶 液)作參比溶液。2022/8/1457 若待測(cè)試液在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而顯 色劑等無(wú)吸收，則可用“試樣空白”(不加 顯色劑)作參比溶液。 若顯色劑、試液中其它組分在測(cè)量波長(zhǎng) 處有吸收，則可在試液中加入適當(dāng)掩蔽 劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，作為 參比溶液。2022/8/14583.控制適宜的吸光度（讀數(shù)范圍）不同的透光度讀數(shù)，產(chǎn)生的誤差大小不同： 2022/8/1459 濃度測(cè)量值的相對(duì)誤差（c/c）不僅與儀器的透光度誤差T 有關(guān)，而且與

22、其透光度讀數(shù)T 的值也有關(guān)。 是否存在最佳讀數(shù)范圍？何值時(shí)誤差最??？2022/8/1460最佳讀數(shù)范圍與最佳值設(shè)T =0.5%，則可繪出溶液濃度相對(duì)誤差c/c與其透光度T 的關(guān)系曲線。如圖所示：T 在20%65%之間時(shí)，濃度相對(duì)誤差較小(c/c2%)，最佳讀數(shù)范圍。用儀器測(cè)定時(shí)應(yīng)盡量使溶液透光度值在T %=2065% (吸光度 A )?？汕蟪鰸舛认鄬?duì)誤差最小時(shí)的透光度Tmin為： Tmin36.8%, Amin2022/8/1461吸光度A的讀數(shù)范圍 A T = 65% 20% 根據(jù)朗白-比耳定律，可用改變吸收池厚度（b）或待測(cè)液的濃度（c）來(lái)使吸光度A處在適宜的范圍內(nèi)。2022/8/1462

23、 5-4 分光光度測(cè)定方法一、普通分光光度法 通常比較法或采用 A-C 標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量測(cè)定。Blank Standard Sample Sample2022/8/14632022/8/14642.多組分的同時(shí)測(cè)定若各組分的吸收曲線互不重疊，則可在各自最大吸收波長(zhǎng)處分別進(jìn)行測(cè)定。這本質(zhì)上與單組分測(cè)定沒(méi)有區(qū)別。 Aa(1) =abCa 求出Ca Ab (2）=bbCb 求出Cb2022/8/1465 若各組分的吸收曲線互有重疊，則可根 據(jù)吸光度的加合性求解聯(lián)立方程組得出 各組分的含量。2022/8/14663.配合物組成的測(cè)定（1）物質(zhì)的量比法 固定一種組分如金屬離子M的濃度，改變配位劑R的濃度，

24、分別測(cè)定其吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，配位劑與金屬離子的濃度比值為橫坐標(biāo)作圖。 利用外推法可得一交叉點(diǎn)D， D點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的濃度比值就是 配合物的配合比。 2022/8/1467（2）連續(xù)變化法 設(shè)配位反應(yīng)為 M+nR MRn M為金屬離子，R為配合劑。 并設(shè)cM和cR為溶液中M和R兩組分的濃度，cM+cR=c0（常數(shù)）金屬離子和配位劑的物質(zhì)的量分?jǐn)?shù)分別為：2022/8/1468 配制一系列不同xM（或xR）值的溶液，溶液中配合物濃度隨xM而改變，當(dāng)xM（或xR）與形成的配合物組成相當(dāng)時(shí)，即金屬離子和配位劑物質(zhì)的量之比和配合物組成一致時(shí)，配合物的濃度最大。根據(jù)與最大吸光度對(duì)應(yīng)的x值，即可求出n。2

25、022/8/1469二、示差分光光度法（示差法） 普通分光光度法一般只適于測(cè)定微量組分，當(dāng)待測(cè)組分含量較高時(shí)，將產(chǎn)生較大的誤差。需采用示差法。即提高入射光強(qiáng)度，并采用濃度稍低于待測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液。 設(shè)：待測(cè)溶液濃度為cx， 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs(cs cx) Ax= b cx As = b cs xs =b(cxcs）=bc2022/8/1470 測(cè)得的待測(cè)溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度之差相當(dāng)于普通法中吸光度A。 AAxAs =b(cxcs ）=bc 示差法測(cè)得的吸光度與c呈直線關(guān)系。由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的c值，則待測(cè)溶液濃度cx ： cx = cs + c 2022/8/1471示差法

26、標(biāo)尺擴(kuò)展原理普通法： cs的T=10% cx的T=5%示差法： cs 做參比， 調(diào)T=100% 則： cx的T=50% ，標(biāo)尺擴(kuò)展10倍。2022/8/1472三、雙波長(zhǎng)分光光度法(了解) 不需空白溶液作參比，但需要兩個(gè)單色器獲得兩束單色光(1和2)。以參比波長(zhǎng)1處的吸光度A1作為參比，來(lái)消除干擾。在分析渾濁或背景吸收較大的復(fù)雜試樣時(shí)顯示出很大的優(yōu)越性。靈敏度、選擇性、測(cè)量精密度等方面都比單波長(zhǎng)法有所提高。 AA1A2(12)b c 兩波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度差值A(chǔ)與待測(cè)組分濃度成正比。2022/8/1473 x為待測(cè)組分， y為干擾組分。22022/8/14742022/8/1475 選擇波長(zhǎng)組合

27、1 、2的基本要求：選定的波長(zhǎng)1和2處，干擾組分應(yīng)具有相同吸光度。在選定的兩個(gè)波長(zhǎng)1和2處，待測(cè)組分的吸光度應(yīng)具有足夠大的差值。2022/8/1476P83第10題K2CrO4的堿性溶液在372nm處有最大吸收，若堿性K2CrO4溶液的濃度為3.0010-5-1,吸收池厚度為1cm，在此波長(zhǎng)下測(cè)得透光率為71.6%。計(jì)算（1）該溶液的吸光度； （2）摩爾吸光系數(shù)； （3）若吸收池厚度為3cm，則透光率為多 少？2022/8/1477 max=372nm， C=3.0010-5molL-1，b=1cm2022/8/1478P83第11題苯胺在max-1.cm-1,現(xiàn)欲制備一苯胺水溶液，使其透射率為30%，吸收池厚度為1cm，問(wèn)制備100mL該溶液需苯胺多少克？2022/8/14792022/8/1480P83第12題某組分A溶液的濃度為5.00 10-4-1,在1cm吸收池中于440nm及590nm下其吸光度分別為和；另一組份B溶液濃度為8.00 10-4-1,在