DB1308-T104-2012滑子菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1、B22DB1308承德市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1308/T 1042012代替DB1308/T 1042006滑子菇菌種Th產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2012-04-01 發(fā)布2012-04-05 實(shí)施承德市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB1308/T 1042012I前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)代替DB1308/T 104-2006滑子菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程。與DB1308/T 104-2006相比，出編輯性修改外主要技術(shù)變化如下：刪除4.7.1.3，栽培種的容器規(guī)格已經(jīng)不允許采用15.557cm規(guī)格的菌袋。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：平泉縣食用菌辦公室、平泉縣技術(shù)監(jiān)督局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王麗波、梁希晨、王

2、會(huì)森、張寶軍、王淑芬。本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：DB1308/T 104-2006。 PAGE 6滑子菇菌種Th產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了滑子菇各級(jí)菌種生產(chǎn)的技術(shù)人員、場(chǎng)地選擇、廠房設(shè)置和布局、設(shè)備設(shè)施、使用品種、生產(chǎn)工藝流程、技術(shù)要求和貯存運(yùn)輸要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于承德地區(qū)滑子菇菌種生產(chǎn)。規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB 4789.282003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑GB 96871988 食品包裝用聚乙烯成型品衛(wèi)

3、生標(biāo)準(zhǔn)GB 96881988 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T5282002 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1品種strain經(jīng)各種方法分離、誘變、雜交、篩選而選育出來具特異性、均一（一致）性和穩(wěn)定性的具有同一個(gè)祖先的群體。也常稱作菌株或品系。3.2菌種pure culture經(jīng)人工培養(yǎng)并可供進(jìn)一步繁殖或栽培使用的食用菌菌絲純培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。3.3母種stock culture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱一級(jí)種、試管種。3.4原種pre-culture spawn由母種

4、移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶或 15cm28cm 聚丙烯塑料袋為容器。3.5栽培種spawn由原種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以玻璃瓶、塑料瓶或塑料袋為容器。栽培種只能用于栽培，不可再次擴(kuò)大繁殖菌種。3.6固體培養(yǎng)基solid medinm以富含木質(zhì)纖維素或淀粉類天然碳源物質(zhì)為主要原料，填加適量的有機(jī)氮源和無機(jī)鹽類，具有一定水分含量的培養(yǎng)基。常用的主要原料有木屑、棉籽殼、秸稈、麥粒、谷粒、玉米粒等，常用的有機(jī)氮源有麥麩、米糠等，常用的無機(jī)鹽類有硫酸鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等。固體培養(yǎng)基包括以闊葉樹木屑為主要原料的木屑培養(yǎng)基、以草本植物為主要原料的草料培

5、養(yǎng)基、以禾谷類種子為主要原料的谷粒培養(yǎng)基、以腐熟料為原料的糞草培養(yǎng)基、以種木為主要原料的木塞培養(yǎng)基。3.7種 性 characters of strain食用菌的品種特性，是鑒別食用菌菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對(duì)溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求，抗逆性、豐產(chǎn)性、出菇遲早、出菇潮數(shù)、栽培周期、商品質(zhì)量及栽培習(xí)性等農(nóng)藝性狀。技術(shù)要求技術(shù)人員菌種廠應(yīng)有與菌種生產(chǎn)所需的相應(yīng)專業(yè)技術(shù)人員，技術(shù)人員需與所生產(chǎn)相適應(yīng)，并經(jīng)省級(jí)農(nóng)業(yè)主管部門考核合格。生產(chǎn)母種主要技術(shù)人員需有五年以上原種生產(chǎn)或栽培種生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)；生產(chǎn)原種主要技術(shù)人員需有三年以上的栽培種生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)；生產(chǎn)栽培種主要技術(shù)人員需有三年

6、以上的菌種生產(chǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。場(chǎng)地選擇基本要求地勢(shì)高燥，通風(fēng)良好，排水暢通，交通便利。環(huán)境衛(wèi)Th要求至少 300m 之內(nèi)無禽畜舍，無垃圾（糞便）場(chǎng)、無污水和其它污染源（如大量揚(yáng)塵的水泥廠、磚瓦廠、石灰廠、木材加工廠等）。廠房設(shè)置和布局廠房設(shè)置和建造有各自隔離的攤曬場(chǎng)、原材料庫(kù)、配料分裝室（場(chǎng)）、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗(yàn)室等。廠房建造從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要。攤曬場(chǎng)要求平坦高燥、通風(fēng)良好，光照充足、空曠寬闊，遠(yuǎn)離火源。原材料庫(kù)要求高燥、通風(fēng)良好，防雨，遠(yuǎn)離火源。配料分裝室（場(chǎng)）要求水電方便，空間充足，水泥地面。如安排在室外，應(yīng)有天棚，防雨防曬。滅菌室要求水電安

7、全方便，通風(fēng)良好，空間充足，散熱暢通。冷卻室潔凈、防塵、易散熱，可密閉，可消毒。接種室要設(shè)緩沖間，防塵換氣性能良好。內(nèi)壁和屋頂光滑，經(jīng)常清洗和消毒。做到空氣潔凈。內(nèi)設(shè)接種箱或凈化工作臺(tái)。培養(yǎng)室和貯存室內(nèi)壁和屋頂光滑，便于清洗和消毒。培養(yǎng)室和貯存室墻壁要加厚，利于控溫。室內(nèi)清潔衛(wèi)生、無直射光，有通風(fēng)設(shè)備，空氣流通，可人工控制。菌種檢驗(yàn)室水電方便，利于裝備相應(yīng)的檢驗(yàn)設(shè)備和儀器。布局應(yīng)按菌種生產(chǎn)工藝流程合理安排布局。設(shè)備設(shè)施基本設(shè)備磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、潔凈工作臺(tái)、接種箱、調(diào)溫設(shè)備、除濕機(jī)、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具，產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機(jī)、裝瓶裝袋機(jī)。高壓滅菌鍋應(yīng)

8、使用有關(guān)部門檢驗(yàn)的安全合格產(chǎn)品?；驹O(shè)施配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養(yǎng)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、接種室、培養(yǎng)室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施。使用品種品種應(yīng)使用經(jīng)省級(jí)以上農(nóng)作物品種審定委員會(huì)登記的品種，并且清楚種性。不應(yīng)使用來源和種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)菌種。并從具相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種。移植擴(kuò)大母種僅用于移植擴(kuò)大原種，一支母種移植擴(kuò)大原種不應(yīng)超過 6 瓶（袋）；一瓶原種移植擴(kuò)大栽培種不應(yīng)超過 50 瓶（袋）。Th產(chǎn)工藝流程培養(yǎng)基配制分裝滅菌冷卻接種培養(yǎng)（檢查）成品Th產(chǎn)過程中的技術(shù)要求容器母種使用玻璃試管和棉塞，試管 18mm180mm 或 20

9、mm200mm，棉塞要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。原種使用 750ml500ml，耐 126高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶，上覆牛皮紙，耐高壓的聚丙烯薄膜，要求薄膜平整美觀?；蛴?17cm35cm 的聚丙烯塑料袋作容器，聚丙烯應(yīng)符合 GB96881988 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。栽培種使用符合 4.7.1.2 規(guī)定的容器，與原種要求相同，也可采用 17cm35cm 的符合 GB9687 衛(wèi)生規(guī)定的聚乙烯塑料菌袋。用絲裂或線繩扎口，要求袋口干凈、扎緊、扎實(shí)。培養(yǎng)原料化學(xué)試劑類這類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，要使用化學(xué)純級(jí)試劑。天然材料類天然材料如木屑、棉籽殼、麥麩等，要求新鮮、無蟲、無螨、

10、無霉、潔凈干燥。培養(yǎng)基配方母種培養(yǎng)基一般使用附錄 A 中 A.1 規(guī)定的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）或 A.2 中規(guī)定的綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA），PH 值自然。原種和栽培種培養(yǎng)基采取以附錄 B.1 為主的培養(yǎng)基，嚴(yán)格掌握含水量和 PH 值。分裝母種培養(yǎng)基的分裝量應(yīng)掌握在試管長(zhǎng)度的四分之一至五分之一，滅菌后擺放成斜面頂端距試管口不少于 50mm，原種和栽培種培養(yǎng)基裝至距瓶口不少于 60mm，滅菌后不少于 45mm；袋式栽培種采用裝袋機(jī)裝袋，袋應(yīng)裝緊裝實(shí)，袋口干凈。母種棉塞大小松緊要適度。原種和栽培種培養(yǎng)基的松緊度要求為上緊下松，中間打孔便于發(fā)菌。滅菌母種的培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即

11、滅菌；原種和栽培種培養(yǎng)基配制后應(yīng)在 4h 內(nèi)進(jìn)鍋滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌 0.11MPa0.12Mpa，30min，木屑培養(yǎng)基 0.12Mpa，1.5h 或 0.14MPa0.15Mpa，1h。裝容量較大時(shí)，滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長(zhǎng)。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強(qiáng)制降壓。常壓滅菌時(shí)，在 2h 之內(nèi)使滅菌室溫度達(dá)到 100，保持 8h10h。母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基應(yīng)高壓滅菌，不應(yīng)常壓滅菌。滅菌時(shí)應(yīng)防止棉塞被冷凝水打濕，袋式栽培種常壓滅菌時(shí)，達(dá)到 100保持 16 h18h。滅菌效果的檢查母種培養(yǎng)基置于 28恒溫培養(yǎng)，原種和栽培種培養(yǎng)基經(jīng)無菌操作接種于 GB4789.282003 中 4.8規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培

12、養(yǎng)基中，于 28恒溫培養(yǎng)，48h 后檢查，無微生物長(zhǎng)出的為滅菌合格。冷卻冷卻室使用前要進(jìn)行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后，將滅菌后的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋）放置在冷卻室中冷卻到料溫降至 28以下。接種接種室（箱）的基本處理程序清潔搬入接種物和被接種物接種室（箱）的消毒處理。接種室（箱）的消毒方法用煙霧消毒劑等藥物消毒并用紫外燈照射。凈化工作臺(tái)的消毒處理方法先用 75%酒精或新潔爾滅溶液進(jìn)行表面擦拭消毒，然后預(yù)凈 20min。接種操作在無菌室（箱）或凈化工作臺(tái)上嚴(yán)格按無菌操作接種。接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽。接種室（箱）后處理接種室每次使用后，要及時(shí)清潔，排除廢氣，清除廢物，臺(tái)面要用

13、75%酒精或新潔爾滅溶液擦拭消毒。培養(yǎng)室處理在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒。培養(yǎng)條件適宜的培養(yǎng)溫度 2225，保持空氣相對(duì)濕度在 75%以下，通風(fēng)，避光。培養(yǎng)期的檢查各級(jí)菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時(shí)揀出不合格菌種。入庫(kù)完成培養(yǎng)的菌種要及時(shí)登記入庫(kù)。記錄生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。留樣留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號(hào)母種 3 支5 支，原種和栽培種 5 瓶7 瓶/袋，于 46下貯存，貯存至使用者在正常生產(chǎn)條件下該批菌種出第一潮菇。附錄 A（規(guī)范性附錄）母種常用培養(yǎng)基及其配方PDA 培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）馬鈴薯 200g（用浸出汁），葡萄糖 20g，瓊脂 20g，水 1000ml，pH 值自然。CPDA 培養(yǎng)基（綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）馬鈴薯 200g（用浸出汁），葡萄糖 20g，磷酸二氫鉀