貫眾中活性組分對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用的研究

1、貫眾中活性組分對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用的研究【關(guān)鍵詞】貫眾；金黃色葡萄球菌；別離；抑菌作用金黃色葡萄球菌是老年肺部感染的常見菌，亦是院內(nèi)感染的主要致病菌1，其感染率占G+菌首位，成為治療的難點(diǎn)。貫眾為鱗毛蕨科多年生草本植物粗莖鱗毛蕨DrypterisrassirhizaNakai、蹄蓋蕨科多年生草本植物娥眉蕨Lunathyriuarstihideshing、烏毛蕨科多年生草本植物單芽狗脊dardiaunigeataNakai等的根莖及葉柄基部2，是中醫(yī)預(yù)防瘟病要藥。研究證明，貫眾具有驅(qū)蟲、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、止血及子宮收縮作用3,4。貫眾中抗菌抗病毒的主要物質(zhì)為植物多酚5。本文旨在探究貫眾中

2、活性組分的別離并研究其抑菌作用，為其進(jìn)一步開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)。1材料和方法1.2方法1.2.1貫眾有效成份的提取稱取250g的貫眾干品，40目粉碎，以95乙醇pH31.5L回流提取16h，搜集提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑并濃縮，得到棕黑色黏稠的粗提物。依次以石油醚和乙酸乙酯萃取，并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑并濃縮，形成石油醚萃取局部和乙酸乙酯萃取局部，同時(shí)搜集每步的剩余水相。濾過除菌，-4保存。1.2.3組分中多酚物質(zhì)的定性分析將樣品組分113滴加在濾紙片上，枯燥后滴加2%三氯化鐵后觀察，再依次滴加8鐵氰化鉀和1l/LHl，觀察顯色。1.2.5受試菌種的活化和菌懸液的制備將受試菌種在營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上活化23

3、代后，挑取菌落以無(wú)菌生理鹽水稀釋，濁度與0.5麥?zhǔn)媳葷峁艿臐岫认嘟?，?22分光光度計(jì)檢測(cè)，含菌量為1.5108FU/l。1.2.6抑菌活性測(cè)定制備直徑為6的滅菌濾紙片，分別放入粗提液、石油醚萃取局部及剩余水相、乙酸乙酯萃取局部及剩余水相中浸泡2h，低溫晾干，以溶劑混和物作為空白對(duì)照。取受試菌懸液0.5l均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂外表，待外表稍干，用無(wú)菌鑷子取枯燥藥物及對(duì)照濾紙片貼在平板上，37，24h后觀察并測(cè)定抑菌圈直徑。1.2.7活性組分的最小抑菌濃度I測(cè)定采用液體試管法7。將液相色譜別離的各組分用無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯進(jìn)展倍比稀釋，其中組分18及對(duì)照1和對(duì)照2稀釋4管，組分913稀釋7管，每管1l中參加

4、受試菌懸液0.1l。以酒精計(jì)測(cè)定樣品中乙醇剩余量后確定對(duì)照，對(duì)照120%乙醇用于組分512，對(duì)照250%乙醇用于組分13。37，24h后觀察并記錄結(jié)果。另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照肉湯+菌液及陰性對(duì)照肉湯，以完全沒有菌生長(zhǎng)的最低濃度為該組分的最低抑菌濃度I。1.2.8活性組分的最小殺菌濃度B的測(cè)定根據(jù)取抑菌試驗(yàn)中的無(wú)菌生長(zhǎng)的試管，重新接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，培養(yǎng)24h后觀察是否有菌生長(zhǎng)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理進(jìn)展回歸性分析。2結(jié)果2.1乙酸乙酯萃取局部的低壓液相色譜別離結(jié)果見圖1。按圖譜中的吸收峰位置，共搜集112個(gè)樣品組分及洗柱液(13)組分。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.圖1低壓液相色譜別離的圖譜2.2.1組分中總多酚定量實(shí)

5、驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定及回歸方程30、60、90in測(cè)定值無(wú)差異，顯色穩(wěn)定性好?；貧w方程Y=0.06264X-0.01314(R=0.9961，P0.0001)。吸光度在0.0280.300即濃度在0.6794.753g/l，線性良好。2.2.2貫眾組分中多酚組分的含量測(cè)定各組分總多酚濃度在60in和90in測(cè)定值無(wú)差異，顯色穩(wěn)定。根據(jù)回歸方程得出113各組分中總多酚濃度分別為：23.09、29.13、42.76、46.82、44.21、44.43、33.22、48.58、82.2、34.3、18.35、34.36、68.63g/l。2.2.3組分中多酚組分含量的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)組分9、12、13總多酚濃度

6、比擬重復(fù)三次的檢出結(jié)果無(wú)差異，重復(fù)性較好。2.3貫眾粗提物及萃取局部的紙片法抑菌實(shí)驗(yàn)95%粗提物、石油醚剩余水相和乙酸乙酯萃取局部有明顯抑菌環(huán)，而石油醚萃取局部與乙酸乙酯剩余水相無(wú)抑菌環(huán)。2.4活性組分的液體試管稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度I組分8組分10及對(duì)照1抑菌稀釋倍數(shù)均為/2濃度，組分9、11、12及對(duì)照2抑菌稀釋倍數(shù)均為/4濃度,組分13抑菌稀釋倍數(shù)為1/16濃度。2.5活性組分的B組分2、3、4、8和9殺菌與抑菌濃度一樣，組分11和組分12殺菌稀釋倍數(shù)為/2濃度，組分13為1/8濃度，而組分1、10和對(duì)照1、2均不殺菌。3討論由于老年人鼻、支氣管黏膜萎縮，纖毛運(yùn)動(dòng)減弱，終末細(xì)支氣管上皮細(xì)

7、胞存在退行變，支氣管腺體增生等導(dǎo)致呼吸濾過功能減退，并合并機(jī)體免疫功能低下、感染(如患肺心并糖尿并惡性腫瘤)等，極易造成體內(nèi)環(huán)境失衡，使定植于上呼吸道的致病菌進(jìn)入肺部引起感染8，其中金黃色葡萄球菌的感染居于首位。由于該菌的生存范圍廣泛，在正常人群中帶菌率達(dá)30%80%，而廣泛地使用抗生素又可以使其耐藥性不斷增強(qiáng)，增加了治療難度。研究說明，鱗毛蕨科植物具有顯著的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、乳酸桿菌、真菌和革蘭氏陰性菌均有不同程度的抗菌活性。貫眾做為較常用中藥，用作商品貫眾的原植物均是蕨類植物，但化學(xué)成分卻有很大差異。以往對(duì)綿馬貫眾化學(xué)成分研究較深人，含綿馬酸類包括綿馬酸BBB、綿馬酸PBB、綿馬酸PBP等；黃綿馬酸類包括黃綿馬