湖北麥冬莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)研究

1、湖北麥冬莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)研究【關(guān)鍵詞】湖北麥冬；,莖尖；,離體培養(yǎng)摘要：目的討論湖北麥冬種質(zhì)改進的途徑。方法利用莖尖分生組織離體培養(yǎng)技術(shù)再生植株。結(jié)果莖尖外植體愈傷組織誘導，不定芽分化與增殖的適宜培養(yǎng)基為S+BA(1.02.0)g/L+IBA0.10.3g/L;生根適宜培養(yǎng)基為1/2S+NAA0.1或IBA0.10.3或IAA0.3。結(jié)論初步試驗湖北麥冬莖尖再生植株消費性狀優(yōu)于當?shù)仄贩N。關(guān)鍵詞：湖北麥冬；莖尖；離體培養(yǎng)TheTehnlgialResearhninvitrulturefrSteTipfLiripespiatavar.prliferaY.T.aAbstrat:bjetiveTexp

2、lretheaytiprvethegerplasfLiripespiatavar.prliferaY.T.a.ethdsakeusefstetiperistetissueinvitrulturetehnlgytregenerateplant.ResultsThesuitableultureediufsteptipexplantalustissuesabdutianandindefinitepuddifferentiatinandutipliatinisS+BA1.02.0+IBA0.10.3,thesuitableultureediufradiatinis1/2S+NAA0.1rIBA0.10

3、.3rIAA0.3.nlusinExperientshsthattheprdueharaterflirlpespiatavar.prliferaY.T.aregeneratinplantinitialisbetterthanlalvariety.Keyrds:Liripespiatavar.prliferaY.T.a;Stetip;Invitrulture湖北麥冬Liripespiatavar.prliferaY.T.a屬百合科山麥冬屬植物，為?中國藥典?1995年版新增品種山麥冬的原植物。其塊根與麥冬塊根有相似的化學成分與藥理活性1。湖北麥冬含多種甾皂苷。此外，還含有71%的單糖類和寡糖類，

4、具有養(yǎng)陰生津、潤肺補心、除煩安神等成效2。湖北襄樊市為湖北麥冬主產(chǎn)區(qū)，種植面積現(xiàn)已開展到3000ha，成為全國麥冬三大消費基地之一，但在其主栽區(qū)湖北襄樊市歐廟鎮(zhèn)，湖北麥冬長期單一采用無性分株方式繁殖，導致湖北麥冬種質(zhì)退化；品質(zhì)與單產(chǎn)呈逐年下降趨勢。為此，湖北省科技廳在2001年立項的科技攻關(guān)工程?湖北麥冬標準化種植與示范基地建立?中，將湖北麥冬種質(zhì)改進列為重要的研究內(nèi)容之一。本試驗利用莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)成功地建立了湖北麥冬無性繁殖系，為進一步利用生物技術(shù)改進湖北麥冬種質(zhì)奠定了一定根底，具重要現(xiàn)實意義。1材料與方法1.1材料于20010506，取湖北麥冬植株，去根、剝離葉片，只留包裹莖尖的嫩葉回實

5、驗室。材料取自湖北襄樊市歐廟鎮(zhèn)湖北麥冬大田。1.2方法1.2.1莖尖外表滅菌將嫩葉包裹的莖尖用飽和洗滌液浸泡510in，用自來水沖洗510in，除去外表污物，然后在超凈臺上用70%酒精浸泡2030s，無菌水沖洗1次，再用0.1%Hgl2浸泡67in，最后用無菌水沖洗45次，12in/次，濾干水分以備接種。1.2.2莖尖剝離在超凈臺上，將已外表滅菌的芽放在有無菌紙的培養(yǎng)皿中，在一臺帶光源的解剖鏡下，一手用鑷子將芽固定于視野中，一手用解剖針將幼葉與葉原基剝離，至出現(xiàn)裸露生長點，用鋒利的長柄刀片將莖尖0.20.3切下，可帶12葉原基或不帶葉原基，然后及時用解剖針將切下的莖尖接種于分化培養(yǎng)基上。1.2

6、.3培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件以S為根本培養(yǎng)基，附加兩種不同濃度程度的外源激素6-BA0.1,0.5,1.0,2.0,3.0和IBA0.05,0.1,0.3,0.5，共20個不同濃度程度的組合進展愈傷組織的誘導培養(yǎng)，并用上述雙因子組合共4個處理進展不定芽誘導和增殖培養(yǎng)；以1/2SS中礦質(zhì)元素減半為根本培養(yǎng)基，附加激素NAA0.1,0.3,0.6、0.1,0.3,0.6和IAA0.1,0.3,0.6，并以1/2S為對照，共10個處理進展不定根分化培養(yǎng)。以上培養(yǎng)基中均附加3%蔗糖、0.68%瓊脂、pH值5.86.2.。培養(yǎng)條件：溫度：231，光照1500-2000LX，光照時間：1214h/d。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)

7、盟.ll.2結(jié)果與分析2.1兩種激素不同程度組合對莖尖外植體愈傷組織形成的影響莖尖接種于上述愈傷分化培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1520d，局部培養(yǎng)基上的莖尖有明顯膨大，3035d形成愈傷組織塊，初期為白色，后轉(zhuǎn)為淡黃綠色，4045d后出現(xiàn)少量綠色顆粒狀物。試驗說明：在不同激素程度組合的培養(yǎng)基中，愈傷組織啟動、生長與分化具明顯差異見表1。最早啟動分化愈傷組織的培養(yǎng)基為S+BA1.02.0+IBA0.10.3，而且愈傷組織分化率在40%以上，愈傷組織生長速度快，構(gòu)造致密，分化才能強，說明6-BA1.02.0與IBA0.10.3程度范圍組合誘導愈傷效果好；在BA0.10.5程度范圍內(nèi)，愈傷分化啟動慢、分化率較低

8、，愈傷組織塊??；在BA2程度時，愈傷分化率亦較高，但構(gòu)造稀疏。不定芽分化才能呈下降趨勢。表1兩種激素不同程度組合對湖北麥冬莖尖外植物分化愈傷組織的影響略表中數(shù)據(jù)為外植物培養(yǎng)50d的平均值；表中愈傷組織誘導率=已分化愈傷組織莖尖數(shù)/接種莖尖總數(shù)1002.2兩種激素不同程度組合對不定芽分化與增殖的影響將分化的愈傷組織切成3小方塊接種于愈傷分化率大于40%的兩種激素不同程度組合的培養(yǎng)基中進展不定芽分化與增殖培養(yǎng)。接種710d后，愈傷組織上綠色顆粒狀物變?yōu)榫G色芽點，芽點不斷增大，培養(yǎng)35d后，統(tǒng)計增殖系數(shù)并考察不定芽生長情況見表2。表2兩種激素不同程度組合對湖北麥冬不定芽分化與增殖系數(shù)及生長的影響略實

9、驗結(jié)果說明：從增殖系數(shù)、試管苗的質(zhì)量等方面綜全評判，適宜增殖的培養(yǎng)為S+6-BA1.02.0+IBA0.10.3，增殖系數(shù)可達11.413.5。以S+BA2.0+IBA0.1效果最正確。2.3不同激素種類與程度對不定根分化的影響將帶34葉的不定芽切成單芽，接種于誘導生根培養(yǎng)基中。每處理接種20瓶，每瓶接5株。培養(yǎng)57d，局部培養(yǎng)基上芽基部形成根源基突起，連續(xù)培養(yǎng)25d后，隨機統(tǒng)計生根率與根的生長情況見表3。試驗結(jié)果說明：在1/2S中附加NAA0.1或IBA0.10.3或IAA0.3中，生根率可達96%以上，根生長強健。表3不同激素種類與程度對湖北麥冬不定芽分化的影響激素種類與程度略2.4試管苗

10、馴化與移栽將45葉生根試管苗根上的培養(yǎng)基洗凈，用8001000倍百菌清浸泡基部12in，植于珍珠巖蛭石腐葉土=111的基質(zhì)中，移至苗室內(nèi)，保持適宜溫、濕度，調(diào)節(jié)光照強度，其馴苗成活率可達97%以上。3小結(jié)湖北地道藥材湖北麥冬在醫(yī)藥保健方面具廣泛用處，年產(chǎn)量占全國麥冬總產(chǎn)量的50%以上。但在其主產(chǎn)區(qū)，湖北麥冬種質(zhì)改進問題長期不受重視，造成其單產(chǎn)量與品質(zhì)逐年呈下降趨勢。利用莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)再生植株，是對湖北麥冬進展提純復壯、種質(zhì)改進的有效途徑，亦為進一步利用細胞工程、基因工程等生物技術(shù)對湖北麥冬種質(zhì)改進奠定了基矗本實驗研究結(jié)果說明：湖北麥冬以莖尖為外植體，愈傷組織誘導與不定芽分化增殖的適宜培養(yǎng)基為S+6-BA1.02.0+IBA0.10.3，愈傷分化率在40%以上，增殖系數(shù)達11.413.5，試管苗的質(zhì)量好；不定根誘導適宜培養(yǎng)基為1/2S附加NAA0.1或IBA0.10.3或IAA0.3，25d內(nèi)生根率達96%以上，根長勢旺、強健。在珍珠巖蛭石腐葉土=111基質(zhì)中過渡煉苗，成活率可達97%以上。關(guān)于湖北麥冬莖尖再生植株的消費性狀，初步試驗其單產(chǎn)量較當?shù)剞r(nóng)家品種高，成熟期提早，但有待進一步試驗驗證。參考文獻：1余伯陽,徐國鈞,徐珞珊,等.中藥麥冬的資源利用研究J