資料八乳鐵蛋白可以向社會公開的內(nèi)容

1、資料八乳鐵蛋白可以向社會公開的內(nèi)容無錫科捷諾生物科技有限責任公司第二部分通用名稱、功能分類，用量和使用范圍通用名稱、功能分類，用量及使用范圍詳見下表:通用名稱功能分類使用范圍使用重(g/kg)備 注食品分類 號食品名稱乳鐵蛋白Lactoferrin營養(yǎng)強化 劑01.01.03調(diào)制乳1.001.02.02風味發(fā)酵乳1.001.03.02調(diào)制乳粉1.014.03.01含乳飲料1.013.01嬰幼兒配方食 品1.0第三部分證明技術上確有必要和使用效果的資料或文件（一）重組人乳鐵蛋白的開發(fā)應用及功能研究鑒于乳鐵蛋白廣泛的生物學功能，國際上開展了利用基因工程菌、 轉(zhuǎn)基因植物、轉(zhuǎn)基因動物大規(guī)模生產(chǎn)重組人乳

2、鐵蛋白的研究與開發(fā)， 匯總結果如表6,同時相繼開發(fā)了一系列以重組人乳鐵蛋白為主要功 效成分的抗腫瘤、抗菌等新藥和功能食品（表7）,表明國際上利用基因工程技術生產(chǎn)重組人乳鐵蛋白已經(jīng)日趨成熟，即將產(chǎn)業(yè)化。表6轉(zhuǎn)基因表達重組人乳鐵蛋白表達系統(tǒng)物種名稱奔f文獻微生物米曲霉Ward, P.P. 199216構巢曲霉Ward, P.P 199217黑曲變種泡盛曲霉Ward, P.P 199518昆蟲桿狀病毒Salmon, V. et al 199719釀酒酵母Liang, Q.W et al 199320巴斯德畢赤酵母Choi, B.K. et al 200821Jo, J.H et al 199422植

3、物煙草Mitra, A et al 199423土豆Chong, D.K et al 200024水稻Nandi, S. et al 200225Lin, C. et al 201026圖麗參來源細胞Kwon, S.Y. et al 200327Jo, S.H. et al 200628梨樹Malnoy, M. et al 200329大麥Kamenarova, K. et al 2007 30紫花苜.蓿Tanasienko, I.V. et al 201131動物家雷Liu, T et al 200532小鼠Platenburg, G.J. et al 199833Sokolov, A.V.

4、 et al 200634奶牛van Berkel,et al 200235,36魚Zhong, J.Y. et al 200237兔子Li, L. et al 200638山羊Han,乙S. et al 200739Zhang, J. et al 200840雞utykhina, I.L. et al 200941表7國際上正在開發(fā)的乳鐵蛋白產(chǎn)品表適應癥公司表達宿主狀態(tài)腎細胞癌Agennix基因一工程酵母完成臨床II期惡性膿毒癥Agennix基因一工程酵母完成臨床II期非小細胞肺癌Agennix基因一工程酵母臨床iii期早產(chǎn)兒醫(yī)院感染Agennix基因一工程酵母臨床i/ii期粘膜炎Agenn

5、ix基因一工程酵母臨床i/ii期哮喘Agennix基因一工程酵母臨床i/ii期非小細胞肺癌NCI基因一工程酵母臨床II期細菌感染AM-Pharma基因一工程酵母完成臨床II期提高免疫力、補血Pharming轉(zhuǎn)基因奶牛臨床II期腹瀉Ventria Bioscience轉(zhuǎn)基因水稻FDA GRAS 認定資料源自：美國 NIH臨床研究網(wǎng)以下是已在國外期刊雜志發(fā)表證明重組人乳鐵蛋白有效功能的 論文摘要整理：1)調(diào)節(jié)先天免疫Spasaro M等人2008年在美國實驗生物學會聯(lián)合會會志 發(fā)表研究論文稱 重組人乳鐵蛋白能夠促進人樹突狀細胞成熟， 調(diào)節(jié)先天性免疫42 (Lactoferrin, a major

6、defense protein of innate immunity, is a novel maturation factor for human dendritic cells)。2)免疫調(diào)節(jié)治療作用Hwang等人2014年在國際免疫學雜志上發(fā)表稱重組人乳鐵蛋白對 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus MRSA) 的免疫調(diào)節(jié)性治療作用，重組人乳鐵蛋白能夠促進感染MRSA的單核細胞和顆粒細胞 IFN-g 和 IL-2 的表達，抑制 TNF- a、IL-6、IL-1b、IL-12p40 和 IL-10 表達 43 (

7、Immunomodulatory effects of recombinant lactoferrin during MRSA infection)。Lewis MA等人2011年在J Clin Med Res雜志上發(fā)表研究論文稱口服 重組人乳鐵蛋白可以有效的延長轉(zhuǎn)移性腎細胞癌病人的生命44 (Talactoferrinimmunotherapy in metastatic renal cell carcinoma: a case series of four long-term survivors)。Hwang SA等人2009年在疫苗雜志上發(fā)表論文稱重組人乳鐵蛋白增 強卡介苗免疫力，保護

8、結核桿菌感染的小鼠 的肺泡完整性45 (A novel recombinant human lactoferrin augments the BCG vaccine and protects alveolar integrity upon infection with Mycobacterium tuberculosis in mice)。Yakuwa K等人2007年在婦產(chǎn)科檔案雜志上發(fā)表論文稱重組人乳鐵 蛋白能夠抑制子宮的過早成熟預防早產(chǎn)的發(fā)生46 ( Recombinant human lactoferrin has a potential to suppresses uterine c

9、ervical ripening in preterm delivery in animal model)。Dial EJ等人2005年在藥劑和藥理學雜志雜志上發(fā)表論文稱重組人 乳鐵蛋白能夠抑制非番醇類抗炎癥藥物引起的腸出血，表明重組人乳鐵蛋白可用于治療腸道損傷 47 ( Recombinant human lactoferrin prevents NSAID-induced intestinal bleeding in rodents)。Varadhachary A等人2004年在國際癌癥雜志雜志上發(fā)表論文稱重組 人乳鐵蛋白作為安全無任何副作用的免疫調(diào)節(jié)劑，結合化療藥物可以有效的治療癌癥48

10、 (Oral lactoferrin inhibits growth of established tumors and potentiates conventional chemotherapy。3)補鐵和抗菌Bethell DR等人2004年生物金屬雜志上發(fā)表綜述文章稱重組人乳鐵蛋 白可以用于治療全球性的健康問題：缺鐵性貧血和急性腹瀉疾病49 (Recombinant human lactoferrin treatment for global health issues: iron deficiency and acute diarrhea。4)皮膚損傷修復Engelmayer J等人2

11、008年在外科研究雜志發(fā)表論文稱重組人乳鐵蛋 白調(diào)節(jié)免疫因子分泌，促進糖尿病模型鼠足潰爛部位的皮膚損傷修復。Lyons, T.E等人2007年在美國外科雜志發(fā)表論文稱重組人乳鐵蛋白 治療糖尿病人的足潰爛的修復50 (Talactoferrin Alfa, a Recombinant HumanLactoferrin Promotes Healing of Diabetic Neuropathic Ulcers: A Phase 1/2 Clinical Study)。Tang L等人2010年同時在英國皮膚病需學雜志和創(chuàng)傷修復和再生 上發(fā)表研究論文，表明飽和鐵的重組人乳鐵蛋白能促進角質(zhì)細胞增殖

12、和 遷移，并且抑制其凋亡，非常有利于皮膚的損傷后修復51,52 (Humanlactoferrin stimulates skin keratinocyte function and wound re-epithelialization 和 A rice-derived recombinant human lactoferrin stimulates fibroblast proliferation, migration, and sustains cell survival。(二)人乳鐵蛋白相對于牛乳鐵蛋白的生物活性優(yōu)勢及經(jīng)濟優(yōu)勢生物活性優(yōu)勢人乳鐵蛋白在人乳中的高表達對嬰幼兒的生長發(fā)育非常重

13、要，相比較而言，盡管人乳鐵蛋白與牛乳鐵蛋白有較大的同源性，但還是存在以下區(qū)別，及牛乳鐵蛋白在牛乳中的低豐度表達。(1)人乳鐵蛋白對胰酶的水解抵抗能力是牛LF的100倍53。(2)人小腸粘膜吸收人LF轉(zhuǎn)運的鐵是牛LF的5倍54,因而在胃 腸道內(nèi)能夠更好地發(fā)揮生物學作用。(3)牛LF與人腸上皮細胞受體的結合能力僅為人LF的1/555。綜合以上三點，尤其是與同源受體的高親合力以及人乳鐵蛋白的應用消除了潛在的牛源蛋白的致敏性，人乳鐵蛋白相對于牛乳鐵蛋白更能有效的被人體吸收利用經(jīng)濟優(yōu)勢牛乳鐵蛋白的有益功能使得其在市場的需求逐步增大，已成供不應求的態(tài)勢，預期市場對乳鐵蛋白的需求年增長率20%,如圖1所示。

14、到2013年為止，市場對乳鐵蛋白的需求量達到了216.5噸。圖1牛乳鐵蛋白市場需求趨勢（二）在擬添加的食品中添加與否的效果對比根據(jù)GB14880-2012及衛(wèi)生部公告2012年第15號的規(guī)定，乳鐵蛋白的添加量設定為小于等于1.0 g/kg,添加食品類別為：調(diào)制乳、 風味發(fā)酵乳、調(diào)制乳粉、含乳飲料、嬰幼兒配方食品。選取三類食品 風味發(fā)酵乳（酸奶）、調(diào)制乳粉、含乳飲料添加重組人乳鐵蛋白，考 察其在在添加后對食品的功能屬性的影響。我們選擇 5 個不同添加量（0.00 g/kg；0.25 g/kg；0.5 g/kg；0.75 g/kg； 1.0 g/kg）人乳鐵蛋白，分別添加到酸奶、配方乳粉、含乳飲料

15、三類食品中，考察不同時間食品的均勻性、溶解性、風味對比(滋氣味， 口感，接受度)，人乳鐵蛋白含量和鐵元素的含量。關于考察時間，奶粉實驗選擇12個月，酸奶選擇7天，含乳飲 料選擇6個月。經(jīng)過試驗結果分析，不同時間食品的均勻性、溶解 性、風味對比(滋氣味，口感，接受度)，人乳鐵蛋白含量和鐵的含 量并未發(fā)生顯著變化。人乳鐵蛋白在酸奶中的應用(1)實驗目的：考察人乳鐵蛋白在保質(zhì)期內(nèi)對酸奶的穩(wěn)定性和風味 的影響。(2)實驗方法:選擇5個不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳鐵蛋白，分別添加到酸奶中，考察 7天時間 內(nèi)食品的均

16、勻性、溶解性、風味對比(滋氣味，口感，接受度) ，人 乳鐵蛋白含量和鐵的含量。(3)實驗結果：表11含人乳鐵蛋白酸奶的均勻性對比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.00狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.25狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.5狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.75狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻1.0狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均_勻_狀態(tài)均 勻表12含人乳鐵蛋白酸奶的滋氣味對比添

17、加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.02.02.02.02.02.02.00.252.02.02.02.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.02.00.752.02.02.02.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.02.0評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表13含人乳鐵蛋白酸奶的口感對比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.52.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.52.50.752.52.

18、52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表14含人乳鐵蛋白酸奶的接受度對比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.52.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.52.50.752.52.52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表15含人乳鐵蛋白酸奶的乳鐵蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)

19、1天2天3天4天5天6天7天0.00未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出0.250.240.250.250.260.250.240.240.50.510.500.500.500.480.510.500.750.750.760.760.770.750.740.751.00.980.991.021.001.010.991.00表16 含人乳鐵蛋 白酸奶的鐵元素含量 (mg/kg)添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.003.243.243.253.243.253.243.240.253.253.253.253.253.253.253.250.53.253.263.253.263

20、.263.243.250.753.263.253.263.263.273.253.281.03.273.273.273.283.273.273.28人乳鐵蛋白在含乳飲料中的應用(1)實驗目的：考察人乳鐵蛋白在保質(zhì)期內(nèi)對含乳飲料的穩(wěn)定性和風味的影響。(2)實驗方法：選擇5個不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg； 0.75 g/kg； 1.0 g/kg)人乳鐵蛋白，分別添加到含乳飲料中，考 察6個月時間內(nèi)食品的均勻性、溶解性、風味對比(滋氣味，口感， 接受度)，人乳鐵蛋白含量和鐵的含量。(3)實驗結果：表17添加人乳鐵蛋白含乳飲料的均勻性對比添加量 (g/kg)

21、1個月2個月3個月4個月5個月6個月0.00狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.25狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.5狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻0.75狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻1.0狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻狀態(tài)均 勻表18添加人乳鐵蛋白含乳飲料的滋氣味對比添加量 (g/kg)1個月2個月3個月4個月5個月6個月0.002.02.02.02.02.02.00.252.02.012.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.0

22、0.752.02.02.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.0評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表19添加人乳鐵蛋白含乳飲料的口感對比添加量 (g/kg)1個月2個月3個月4個月5個月6個月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.512.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 :2.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表20添加人乳鐵蛋白含乳飲料的接受度對比添加量 (g/kg)1個月2個月3

23、個月4個月5個月6個月0.002.52.52.52.52.52.50.25r 2.52.512.52.5P 2.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 12.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表21添加人乳鐵蛋白含乳飲料的乳鐵蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)1個月2個月3個月4個月5個月6個月0.00未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出0.250.270.25 :0.260.250.260.240.50.510.530.500.480.480.510.750.750

24、.78 10.780.770.750.741.00.981.031.011.051.010.99表22添加人乳鐵蛋白含乳飲料的鐵離子含量(mg/kg)添加量 (g/kg)1個月2個月3個月4個月5個月6個月0.004.574.584.554.564.584.570.254.574.5814.574.574.594.580.54.594.594.584.574.594.600.754.614.60 14.604.604.604.601.04.624.624.614.604.624.62人乳鐵蛋白在奶粉中的應用(1)實驗目的：考察人乳鐵蛋白在保質(zhì)期內(nèi)對奶粉的穩(wěn)定性和風味的影響。 實驗方法：選擇5個

25、不同添加量(0.00 g/kg;0.25 g/kg;0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳鐵蛋白，分別添加到奶粉中，考察 12個月 時間內(nèi)食品的均勻性、溶解性、風味對比(滋氣味，口感，接受度)， 人乳鐵蛋白含量和鐵的含量。(3)實驗結果：表23添加人乳鐵蛋白奶粉的均勻性對比添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.00狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻0.25狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻1狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻0.5狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻0.75狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻1.0狀態(tài)均勻狀態(tài)

26、均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻狀態(tài)均勻表24添加人乳鐵蛋白奶粉的滋氣味對比添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.002.02.02.02.02.02.00.25r 2.02.012.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.00.752.02.0 12.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.0評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表25添加人乳鐵蛋白奶粉的口感對比添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.

27、50.5P 2.52.512.52.52.52.50.752.52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表26添加人乳鐵蛋白奶粉的接受度對比添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.512.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 12.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5評分標準：-5-0-5分，以0分為基準，分值偏左的差，偏右的好表27添加人乳鐵蛋白奶

28、粉的乳鐵蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.00未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出未檢出0.250.260.2510.250.260.250.240.50.540.530.500.520.530.520.750.770.76 10.760.750.750.741.00.981.021.011.031.021.01表28添加人乳鐵蛋白奶粉的鐵離子含量(mg/kg)添加量 (g/kg)2個月4個月6個月8個月10個月12個月0.008.278.288.288.288.278.290.25P 8.278.2718.298.298.298.290.58.28

29、8.298.308.298.308.300.758.298.30 18.308.308.308.301.08.298.318.318.318.308.31綜上所述，選擇5個不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳鐵蛋白，分別添加到酸奶、配方乳粉、含乳 飲料三類食品中，不同時間食品的均勻性、溶解性、風味對比(滋氣 味，口感，接受度)，人乳鐵蛋白含量和鐵的含量并未發(fā)生顯著變化。添加人乳鐵蛋白牛奶的功能性研究結果重組人乳鐵蛋白有很多有益功能，目前研究性研究成果如下表29所示:表29重組人乳鐵蛋白功能研究結果歸納功能類別義獻

30、調(diào)節(jié)先天免疫Spasaro M, 2008免疫調(diào)節(jié)治療Hwang,2014;LewisMA,2011;HwangSA, 2009;YakuwaK,2007;Dial EEJ,2005;VaradhacharyA,2004;補鐵抗菌Bethell DR, 2004皮膚損傷修復EngelmayerJ, 2008; Lyons T.E.,2007; Tangl, 2010促進生長發(fā)育王小丹等，2011改善缺鐵性貧血王小丹等，2012調(diào)節(jié)腸道菌群Hu W,2012增加小腸內(nèi)微絨毛長 度，改善腸道健康狀況Cooper CA,2013使用從基因工程奶牛牛乳中分離純化出來的人乳鐵蛋白飼喂 大鼠，具有促進大鼠

31、生長發(fā)育的作用，飼喂組的體重、身長及食物 利用率指標均顯著高于對照組56。止匕外，從基因工程奶牛牛乳中 分離純化出來的人乳鐵蛋白對缺鐵性貧血大鼠鐵的營養(yǎng)狀況有一 定的改善作用57。含有人乳鐵蛋白的基因工程奶牛牛奶飼喂仔豬， 可以調(diào)節(jié)仔豬的腸道菌群，使其腸道內(nèi)容物的菌群培養(yǎng)計數(shù)結果表 明，回腸中的沙門氏菌的數(shù)量顯著降低，而大腸桿菌的數(shù)量在十二 指腸、空腸、回腸、結腸4個腸道中，人乳鐵蛋白飼喂組都顯著降 低。而雙岐桿菌的數(shù)量在回腸中，人乳鐵蛋白飼喂組有顯著升高，乳酸桿菌的數(shù)量，在4個腸道中都更高58,見表30。同時，有研究 表明，用含有人乳鐵蛋白的基因工程牛奶飼喂仔豬，可以降低系統(tǒng) 性炎癥發(fā)生并增

32、加小腸內(nèi)微絨毛的長度和腸道隱窩的深度，有效改 善胃腸道的健康狀況59,見表31。另外，中國農(nóng)業(yè)大學研究有證 據(jù)表明，人乳鐵蛋白有促進成骨細胞增殖分化的作用，人乳鐵蛋白 奶粉飼喂仔豬后，可以提高仔豬脛骨骨密度、骨礦鹽含量（如圖3） 及最大抗壓力，表明人乳鐵蛋白對骨形成有促進的作用。圖3 rhLF對仔豬脛骨骨密度和骨礦鹽含量的影響A: BMD骨密度；B: BMC骨礦鹽含量；數(shù)值為最小二乘均值 晰準誤；*:與對照組相比差異水平P 0.05OM :普通牛奶；MM :普通牛奶與人乳鐵蛋白牛奶 1:1; LFM :人乳鐵蛋白牛奶表30三組實驗動物十二指腸、空腸、回腸、結腸中所檢測的六種細菌的數(shù)量（logc

33、fu/g）對比情況（源于58）實驗組平均標P-值項目0MMM LFM 準誤總需十二指腸10.6910.4810.730.100.221空腸10.0910.2310.170.140.765回腸9.03a8.17c8.64b0.110.001結腸9.470b9.80a9.12b0.210.102總厭氧菌十二指腸10.5010.5610.630.090.560空腸8.858.668.800.150.649回腸11.68010.93b11.34a0.130.003結腸10.3110.2510.230.160.770沙門氏菌十二指腸6.756.696.760.130.915空腸6.917.026.970

34、.100.715回腸6.856.966.800.120.611結腸6.96a6.75ab6.51b0.080.005大腸桿菌十二指腸6.60a5.38b5.29b0.170.001空腸6.90a6.21b5.35c0.120.001回腸9.34a7.28b6.91c0.110.001結腸9.86a9.10b8.67b0.220.006雙歧桿菌十二指腸7.887.947.800.090.599空腸7.867.877.910.090.901回腸7.66b8.03a7.97a0.080.011結腸8.628.668.740.080.582乳酸桿菌十二指腸9.0小9.67a10.12a0.160.00

35、1空腸8.48b8.71b9.43a0.160.002回腸7.54c8.21b9.50a0.120.001結腸9.40b9.50b10.11a0.120.002注：統(tǒng)計分析采用單因素方差分析，LSD(Least-significantdifference)及 Duncan（Duncans multiple range test） （SPSS 11.5）。 同排的不同的 ac上標表示 P 0.05。表31人乳鐵蛋白牛奶飼喂組與對照組十二指腸、回腸腸絨毛及隱窩深度分析a （源于60）十二指腸對照組（n=8）人乳鐵蛋白組（n=8）P值腸絨毛高度（pm）539.70 至4.14609.60 至3.76

36、0.0914腸絨毛寬度（pm）184.20 37.03182.150 40.800.8565隱窩深度（pm）109.90 加.27183.96 33.6470.0001*粘膜固有層厚度（pm）496.00 315.5359.13 48.730.2978淋巴細胞數(shù)目/單位高度0.223 01320.1617 009500.1155杯狀細胞數(shù)目/單位高度0.031 00150.0302。0110.8807回腸對照組（n=8）人乳鐵蛋白組（n=8）P值腸絨毛高度（pm）413.83 41.17571.32 至4.490.0002*腸絨毛寬度（pm）162.15 51.36167.59 51.740.

37、4386隱窩深度（pm）90.17 53.68166.72 35.1495.01GB 5009.5-2010乳鐵蛋白，%90.0附錄A.1鐵含量，mg/100g35GB/T 5009.90-2003水分，%5.0GB 5009.3灰分，%5.0GB 5009.4PH5.5-7.5中國藥典2015版鉛（以 Pb 計，mg/kg）0.15GB 5009.12總神（以As計,mg/kg）0.2GB/T 5009.11總汞（以Hg計,mg/kg）0.02:GB/T 5009.17a 20c下測定2%K溶液微生物指標：應符合表3的規(guī)定表3微生物指標項目指標檢驗方法菌落總數(shù)/ （cfu/。1000GB 4

38、789.21大腸菌群/ （cfu/。10GB 4789.3金黃色葡穩(wěn)球菌/ （cfu/。10GB 4789.10酵母和霉菌/（cfu/1GB 4789.151沙門氏菌/（CFu/g0/25 gGB 4789.44檢驗規(guī)則：原輔料檢驗合格后方可入庫使用表4檢驗規(guī)則檢驗分類檢驗項目檢驗規(guī)則判斷規(guī)則出廠檢驗感官指標、蛋白質(zhì)、乳鐵蛋 白、鐵飽和度、水分、菌落 總數(shù)、大腸菌群。1每批產(chǎn)品應經(jīng)質(zhì)量檢驗 部門進行檢驗，合格后， 附有合格證方可出廠。2出廠檢驗項目包括：感 官指標、蛋白質(zhì)、乳鐵蛋 白、鐵飽和度、水分、菌 落總數(shù)、大腸菌群。產(chǎn)品經(jīng)檢 驗,如有 不合格 項，允許 自同批產(chǎn) 品中加倍 取樣，對 不合

39、格項 進行復 檢，復檢 結果仍不 合格，則 判批產(chǎn)品 或該次型 式檢驗不 合格。微 生物指標 不允許復 檢型式檢驗3.2、3.3和3.4中所列項目有卜列情況之一時，應進 行型式檢驗：a）正常情況 下，每半年1次；b）停產(chǎn) 三個月以上，恢復生產(chǎn)時； c）原料來源或產(chǎn)地發(fā)生變 化時；d）食品安全監(jiān)管部門提出要求時；組批與抽樣3.2、3.3和3.4中所列項目以一次投料生產(chǎn)的產(chǎn)品為 一批次。每批隨機抽取生 產(chǎn)總量的0.1%0.2%,不 少于25g,作為檢驗和備用 樣本。型式檢驗樣本應從 出廠檢驗合格的產(chǎn)品中隨機抽取。5標志、包裝、運輸、貯存：應符合表 5的規(guī)定表5標志、包裝、運輸、貯存規(guī)定項 目規(guī)定標

40、 志.銷售包裝標志應符合 GB 7718和GB28050的規(guī)定。.運輸包裝標志應標明：產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)廠名、廠址、生產(chǎn)日期或批號、規(guī) 格、重量、商標、標準號、許可證號、保質(zhì)期及符合GB/T 191-2008規(guī)定的圖小標志。包 裝.內(nèi)包裝材料應符合食品衛(wèi)生要求，包裝應密封。.包裝容器應清潔、干燥、無異味、無毒。包裝箱應封裝、捆扎牢固；正常 運輸、裝卸時不得松散。運輸運輸時應避免日曬，雨淋，裝卸時應輕拿輕放，防止碰撞、重壓，嚴禁與 后毒、有害、有異味物品混運。貯 存產(chǎn)品應貯存在清潔、干燥、陰涼、通風的庫房內(nèi)。保存溫度需低于20C,相對濕度低于70%。紙箱離墻30cm,離地面10cm。不得與有毒、有害

41、、 有異味物品混貯。保 質(zhì) 期在上述貯運條件下，產(chǎn)品保質(zhì)期為 24個月。（五）使用擬申請的添加劑生產(chǎn)的食品的生產(chǎn)工藝添加人乳鐵蛋白配方奶粉生產(chǎn)工藝流程圖添加人乳鐵蛋白含乳飲料生產(chǎn)工藝流程圖添加人乳鐵蛋白酸奶生產(chǎn)工藝流程圖（六）食品中人乳鐵蛋白的檢驗方法或者相關情況說明高效液相色譜法測定食品中人乳鐵蛋白的含量.范圍適用于配方奶粉、含乳飲料、酸奶中人乳鐵蛋白含量的測定。檢出限為0.05 g/L。.原理樣品通過加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至酪蛋白的等電點4.6,使酪蛋白聚 沉，離心后除去。而人乳鐵蛋白為堿性蛋白，不會引起沉淀，樣品經(jīng)預處理后通過配制紫外檢測器的高效液相色譜進行分析測定，外標法定量。3,試劑和材料

42、乙睛，色譜純。三氟乙酸，色譜純。超純水：經(jīng)純水凈化系統(tǒng)處理（電阻率達 18兆歐）。鹽酸，分析純。人乳鐵蛋白標準品，購于Sigma公司。4儀器高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。電子天平：感量為 0.001 g離心機：最大轉(zhuǎn)速為8000 r/min。離心管：15 mL聚丙烯離心管。高速渦流混合器。微量移液器：10-100區(qū)和1000-5000國L酸度計：精度為0.02樣品過濾器：0.45微米水系過濾膜。5分析步驟樣本制備奶粉樣品準確稱取8.00 g奶粉樣品于50 mL離心管，加25 mL水充分溶解，用2 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)至pH4.6附近。室溫靜置30 min后4000 r/min 離心10 min

43、,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用4 mL水加入離心 管中，漩渦震蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/min離心10 min, 合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL過0.45區(qū)破孔濾膜后用 于高效液相色譜測定。含乳飲料樣品準確稱取10.00 g含乳飲料樣品于15 mL離心管，用2 mol/L鹽 酸調(diào)節(jié)至pH4.6附近。室溫靜置30 min后4000 r/min離心10 min, 收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入離心管中，漩渦震 蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/min離心10 min,合并上清 液，用水定容至10 mL。取2.0 mL

44、過0.45小秋孔濾膜后用于高效液 相色譜測定。酸奶樣品準確稱取10.00 g酸奶樣品于15 mL離心管，4000 r/min離心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入離心管中， 漩渦震蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/min離心10 min,合 并上清液，用水定容至15 mL取2.0 mL過0.45區(qū)微孔濾膜后用于 高效液相色譜測定。標樣制備5 mg/mL人乳鐵蛋白標準儲備液的配置：準確稱取 50.00 mg人 乳鐵蛋白標準品于10 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容，-20C下 保存，有效期6個月。根據(jù)人乳鐵蛋白的檢測靈敏度和儀器檢測線 性范圍，用水稀釋

45、標準儲備液制備不同濃度的人乳鐵蛋白標準工作溶液。5.3測定條件液相色譜參考條件色譜柱：Xbridge Peptide BEH G Column, 300A, 4.6mm*250mm 或同類型色譜柱流動相：A:水+0.1%三氟乙酸，B:乙睛+0.1%三氟乙酸，流速：1.0 mL/min,柱溫：30C,檢測波長：220nm,進樣量：20區(qū)L梯度洗脫時間（min）A (%)B (%)0.0065.035.024.0060.040.025.0065.035.030.0065.035.0液相色譜測定取一系列濃度的人乳鐵蛋白的標準溶液分別進樣，以峰面積和標準溶液濃度繪制標準曲線，樣品溶液中人乳鐵蛋白的響應

46、值應在儀器 測定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，人乳鐵蛋白的色譜圖見附圖 1。6.結果計算樣品中人乳鐵蛋白含量按公式（1）計算X c V （ 1）m式中：X樣品中人乳鐵蛋白含量，單位為克每千克（g/Kg）;c從標準工作曲線得到的被測樣品溶液濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL);V樣品溶液定容體積，單位毫升（mL）;m樣品質(zhì)量，單位克（g）7.標準圖譜，如圖3所示:分鐘UA分鐘UA圖3人乳鐵蛋白標準物質(zhì)色譜圖（七）食品中人乳鐵蛋白高效液相色譜測定方法的驗證報告一、方法與材料試齊I乙睛，色譜純；三氟乙酸，色譜純；超純水：經(jīng)純水凈化系統(tǒng) 處理（電阻率達18兆歐）；鹽酸，分析純。標準與樣本人乳鐵蛋白標

47、準品，購于 Sigma公司；添加1 g/Kg人乳鐵蛋白奶粉樣品；添加1 g/Kg人乳鐵蛋白酸奶樣品；添加1 g/Kg人乳鐵蛋白乳飲料樣品。樣本制備與色譜分析系統(tǒng)奶粉樣品準確稱取8.00 g奶粉樣品于50 mL離心管，加25 mL水充分溶 解，用2 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)至pH4.6附近。室溫靜置30 min后4000 r/min 離心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用4 mL水加入離心 管中，漩渦震蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/min離心10 min, 合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL過0.45區(qū)破孔濾膜后用 于高效液相色譜測定。含乳飲料樣品準確稱

48、取10.00 g含乳飲料樣品于15 mL離心管，用2 mol/L鹽 酸調(diào)節(jié)至pH4.6附近。室溫靜置30 min后4000 r/min離心10 min, 收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入離心管中，漩渦震蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/min離心10 min,合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL過0.45區(qū)弒孔濾膜后用于高效液相色譜測定。酸奶樣品準確稱取10.00 g酸奶樣品于15 mL離心管，4000 r/min離心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入離心管中， 漩渦震蕩3 min洗滌沉淀中的殘留蛋白，4000 r/mi

49、n離心10 min,合 并上清液，用水定容至15 mL取2.0 mL過0.45區(qū)微孔濾膜后用于 高效液相色譜測定。標樣制備5 mg/mL人乳鐵蛋白標準儲備液的配置：準確稱取50.00 mg人乳鐵蛋白標準品于10 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容，-20C下 保存，有效期6個月。根據(jù)人乳鐵蛋白的檢測靈敏度和儀器檢測線 性范圍，用水稀釋標準儲備液制備不同濃度的人乳鐵蛋白標準工作 溶液。1.3.5液相色譜測定條件色譜柱：Xbridge Peptide BEH G Column, 300A, 4.6mm*250mm 或同 類型色譜柱流動相：A:水+0.1%三氟乙酸，B:乙睛+0.1%三氟乙酸，流速： 1.0 mL/min,柱溫：30C ,檢測波長：220nm，進樣量：20區(qū)L梯度洗脫時間（min）A (%)B (%)0.0065.035.024.0060.040.025