大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定

1、大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆蛰祯赵奶崛》椒?雙相酸水減法掌握梯度 PH 萃取法提取分離大黃中各種蒽醌苷元的原理及操作方法掌握羥基蒽醌類化合物的顏色反應(yīng)及薄層色譜鑒別方法二、實(shí)驗(yàn)原理提取原理雙向酸水解法，為一相與酸水不相互溶的有機(jī)溶劑，另一相為酸水，加熱回流水解的方法。 由于大黃中的羥基蒽醌類化合物多以苷的形式存在，所以首先要將苷水解成苷元，本實(shí)驗(yàn)選 用硫酸和乙酸乙酯作為雙向酸水解的溶劑，采用加熱回流方法，提取大黃藥材中的游離蒽醌 類化合物。根據(jù)苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，即在加熱 回流提取過程中，稀硫酸可將蒽醌苷元水解成苷元，游離出來

2、的蒽醌苷元隨即溶于乙酸乙酯 中，從而將蒽醌苷元提取出來。分離原理pH梯度萃取法 羥基蒽醌類化合物酸性強(qiáng)弱不同，用pH梯度法進(jìn)行分離。具有羧基或多 個B位酚羥基的蒽醌可溶于5%碳酸氫鈉溶液；具有一個B位酚羥基的蒽醌可溶于5%碳酸鈉 溶液；只具有a位酚羥基的蒽醌，酸性弱，只溶于氫氧化鈉溶液。以分離酸度不同的蒽醌苷 元。也可利用游離蒽醌的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。（1） 大黃中游離蒽醌的酸性強(qiáng)弱順序 大黃酸（-COOH） 大黃素（B酚-0H） 蘆薈大 黃素（醇-oh）大黃素甲醚（-och）大黃酚（-CH）（2）大黃中游離蒽醌的極性大小順序 大黃酸大黃素蘆薈大黃素大黃素甲醚大 黃酚大黃酚和大

3、黃素甲醚酸性相近，但極性不同，可用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。三、實(shí)驗(yàn)方法四、 1.總蒽醌苷元的提取、分離工藝流程大黃藥材（粗粉）50g加20%HS0 100ml,乙酸乙酯250ml,水浴回流2h,稍冷過濾24乙酸乙酯提取液藥渣乙酸乙酯提取液藥渣1 去除下層酸水層，再用蒸餾水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯層pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO 溶液萃取三次（80ml，60ml, 40ml）堿水層乙酸乙酯層堿水層卄滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2,卄滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2,放置5%NaCO溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黃色結(jié)晶或黃色絮狀沉淀）堿水層乙酸乙酯層沉淀過濾，冰醋酸精制黃色結(jié)晶（大黃

4、酸）滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，放置沉淀物（橙色結(jié)晶或橙色絮狀沉淀）沉淀過濾,丙酮精制|橙色結(jié)晶大黃素）堿水層沉淀過濾，0.25%NaOH溶液萃v取三次（40ml/次）滴加濃鹽酸，調(diào)乙酸乙酯層5%NaOH溶液萃卄節(jié)pH=2，放置 嚴(yán)三次（40ml/沉淀物（黃色結(jié)晶或黃色絮狀沉淀）堿水層乙酸乙酯層沉淀過濾，冰醋酸精制黃色結(jié)晶（大黃酸）滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，放置沉淀物（橙色結(jié)晶或橙色絮狀沉淀）沉淀過濾,丙酮精制|橙色結(jié)晶大黃素）堿水層沉淀過濾，0.25%NaOH溶液萃v取三次（40ml/次）滴加濃鹽酸，調(diào)乙酸乙酯層5%NaOH溶液萃卄節(jié)pH=2，放置 嚴(yán)三次（40ml/次） 沉淀物調(diào)pH=2,沉

5、淀過濾橙色絮狀沉淀）黃色沉淀物乙酸乙酯層乙酸乙酯精制硅膠柱色譜黃色針晶洗脫劑為石油醚（60-90C）蘆薈大黃素）卄-乙酸乙酯（15： 1）大黃酚和大黃素甲醚混合物2. 總蒽醌苷元的提取大黃粗粉50g，置500ml燒瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml,水浴回流提 取2h,放置，冷后過濾，殘渣棄去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水層，乙酸乙 酯提取液用蒸餾水洗2次（20ml/次），將乙酸乙酯放置在錐形瓶中，密封。游離蒽醌的分離和精制（1）將乙酸乙酯提取液置500ml分液漏斗中，用5%NaHC03溶液萃取三次（80ml，60ml， 40ml），合并堿液，在攪拌下滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)

6、pH=2,放置，待沉淀析出完全后，過濾， 并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60C干燥，得深褐色粉末，主為大黃素。沉淀干燥后， 樣品加冰醋酸 10ml 加熱溶解，趁熱過濾，濾液放置析晶，過濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶， 得黃色針晶為大黃酸。（ 2）大黃素的分離和精制經(jīng)NaHCO3溶液提取的乙酸乙酯液，繼用5%NaHCO3萃取三次，每次用量40ml，合并酸堿， 在攪拌下滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，析出棕黃色沉淀，抽濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性， 60C干燥，沉淀經(jīng)干燥后，用15ml丙酮熱熔，趁熱過濾，濾液靜置，析出橙色針晶，過濾 后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶，得大黃素。（3）蘆薈大黃素的分離和精制經(jīng)Na2C

7、03提取過的乙酸乙酯液，再用0.25%NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后 的堿液同（1）法處理。萃取液經(jīng)酸化后析出黃色沉淀，過濾，水洗至中性，干燥，用10ml 乙酸乙酯精制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。（4）大黃素甲醚和大黃酚混合物的分離和精制萃取除去蘆薈大黃素后余下的乙酸乙酯層，再用5%NaOH溶液萃取多次（每次100ml）， 至堿水液呈無色為止，合并堿水層，加鹽酸至呈酸性（pH23），析出黃色沉淀，過濾，水 洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚的混合物。將此混合物溶于乙酸乙酯，用硅膠柱色 譜分離。（ 5）柱層析分離大黃酚和大黃素甲醚裝柱 取一玻璃層析柱,垂直固定在鐵架臺上，在管的下

8、端墊入少量棉花，裝入100200 目硅膠（約1/3 高，濕法裝柱）。上樣 將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅膠拌和均勻，并于 水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。洗脫 將色譜柱活塞打開，洗脫劑為石油醚（沸程 60-90C） -乙酸乙酯（15:1）混合 液。收集 洗脫液 25ml 一份，分別收集，回收溶劑至小體積，放置，即可析出結(jié)晶，合并 相同晶形部分。先洗脫下的化合物為大黃酚，后洗脫下的化合物為大黃素甲醚。游離蒽醌類化合物的鑒定（1）化學(xué)鑒定堿液試驗(yàn)分別取各蒽醌結(jié)晶少許置于小試管中，加lml乙醇溶液，加10%氫氧化 鈉溶液數(shù)滴，觀察顏色

9、變化。羥基蒽醌應(yīng)顯橙色到藍(lán)紫色。醋酸鎂試驗(yàn)分別取各蒽醌結(jié)晶少許置于小試管中，各加乙醇lml使溶解，滴加0.5% 醋酸鎂乙醇溶液，觀察顏色變化，羥基蒽醌應(yīng)顯橙色到藍(lán)紫色。（2）色譜鑒定 薄層色譜鑒定吸附劑：硅膠G-CMC-Na板樣 品：上述分別獲得的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚的三氯甲 烷溶液及各相應(yīng)對照品的三氯甲烷溶液。展開劑：石油醚-乙酸乙酯-醋酸（2:1:0.2）展開方式：上行展開。顯 色：在可見光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置，然后用濃氨水熏成或噴5%醋酸鎂 甲醇溶液，斑點(diǎn)顯紅色。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：觀察斑點(diǎn)顏色，記錄圖譜并計算Rf值。四數(shù)據(jù)記錄、結(jié)果討論與分析：實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象加5

10、% NaHCO3溶液萃取后，收集下層溶液，一天后未發(fā)現(xiàn)結(jié)晶，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)后，最 終得到黃色絮狀大黃酸沉淀。加 5%NaCO 溶液萃取后，最終得到橙色大黃素結(jié)晶。加0.25% NaOH 溶液萃取后，精制最終得到黃色蘆薈大黃素結(jié)晶。加 5% NaOH 溶液萃取后，得到黃色 的大黃酚和大黃素甲醚混合物，無法調(diào)節(jié)pH值分開，故使用柱層析分離。（1）堿液試驗(yàn)：取各類蒽醌的標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液，滴加10%Na0H后。大黃酸呈紅色，大黃素呈 粉紅色，蘆薈大黃素呈紅色，大黃酚呈紅色。（2）醋酸鎂試驗(yàn)：取各類蒽醌的標(biāo)準(zhǔn)乙醇溶液，滴加 0.5%的醋酸鎂溶液后，大黃酸呈紅色， 大黃素呈粉紅色，蘆薈大黃素呈橘黃色，大黃

11、酚呈橘黃色。（ 3）薄層板鑒定點(diǎn)樣次序?yàn)椋?1.2.3.4依次為柱層析洗脫液， 5 為大黃酚標(biāo)準(zhǔn)液， 6為大黃酸標(biāo)準(zhǔn)液， 7為大 黃酸自制， 8為大黃素標(biāo)準(zhǔn)液， 9為大黃素自制， 10 為蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)液， 11 為蘆薈大黃素 自制， 12為大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)液。測得 Rf 值：大黃酸：標(biāo)準(zhǔn)液的Rf值為2.75/6.6=0.42,我組制得產(chǎn)物的數(shù)據(jù)缺失，圖上無明顯斑點(diǎn)大黃素：標(biāo)準(zhǔn)液的 Rf 值為 4.21/6.6=0.64,我組制得產(chǎn)物的 Rf 值為 5.8/6.6=0.88 蘆薈大黃素：標(biāo)準(zhǔn)液的 Rf 值為 3.95/6.6=0.60,我組制得產(chǎn)物的 Rf 值為 4.81/6.6=0.73 大黃

12、酚標(biāo)準(zhǔn)液的 Rf 值為 5.65/6.6=0.86,大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)液的 Rf 值為 5.7/6.6=0.86 柱層析洗脫液 1.2.3.4 的 Rf 值依次為 6.05/6.6=0.92; 5.9/6.6=0.89; 5.8/6.6=0.88; 5.71/6.6=0.87結(jié)果討論加5% NaHC03溶液萃取后，收集下層溶液，一天后未發(fā)現(xiàn)結(jié)晶，可能與之前加的NaCl溶液過多，使收集的液體體積過大，大黃酸濃度過低引起，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)后，最終得到黃 色絮狀大黃酸沉淀。蒽醌類與醋酸鎂顯色反應(yīng)的必要條件是蒽醌化合物中有a-酚羥基或鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)。3.分析（1）游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。要注意堿液濃度及萃取時的靜置時間 對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。2）0H22）0H2A大黃酸R1=HR2=COOHB 大黃素R1=CH3R2=OHC 蘆薈大黃素