微生物培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)

1、微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量的重重要性培養(yǎng)基是是微生物物試驗(yàn)的的基礎(chǔ)，直接影影響微生生物試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果。適宜的的培養(yǎng)基基制備方方法、貯貯藏條件件和質(zhì)量量控制試試驗(yàn)是提提供優(yōu)質(zhì)質(zhì)培養(yǎng)基基的保證證。主 要內(nèi)內(nèi)容容培養(yǎng)基制制備、使使用、貯貯存中的的注意事事項(xiàng)培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制2010版藥典附附錄實(shí)例（培培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量對實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果果的影響響）CHP與USP的異同點(diǎn)點(diǎn)同行的方方法介紹紹新技術(shù)部分菌種種在培養(yǎng)養(yǎng)基上的的典型特特征培養(yǎng)基制制備過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的水化培養(yǎng)基水水化時(shí)不不得用銅銅鍋或鐵鐵鍋,以防有離離子混入培培養(yǎng)基中中,影響微生生物的生生長；配制培養(yǎng)養(yǎng)基最常常用的溶溶劑是純純化

2、水,不能含有任何可可能抑制制或影響響微生物物生長的的物質(zhì)；培養(yǎng)基制制備過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的溶解在培養(yǎng)基基分裝滅滅菌前,各成分應(yīng)應(yīng)溶解均均勻,使用電爐爐等設(shè)備備煮沸培培養(yǎng)基時(shí)時(shí),應(yīng)用小火火加熱,并邊加熱熱邊攪拌拌,避免培養(yǎng)養(yǎng)基焦化化或爆沸沸溢出。培養(yǎng)基制制備過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的滅菌已配制好好的培養(yǎng)養(yǎng)基必須須立即滅滅菌濕熱滅菌菌必須嚴(yán)嚴(yán)格控制制滅菌溫溫度和時(shí)時(shí)間培養(yǎng)基制制備過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的pH微生物必必須在適適宜的pH范圍內(nèi)才才能正常常生長繁繁殖或體現(xiàn)其其生物特特性。調(diào)整培養(yǎng)養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1 mol/LNaOH或1 mol/LHCl調(diào)整pH，一般滅滅菌前比

3、比最終pH高0.20.3。培養(yǎng)基制制備過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的保溫滅菌以后后培養(yǎng)基基應(yīng)該迅迅速冷卻卻至所需需溫度,避免長時(shí)時(shí)間保存存在滅菌菌鍋內(nèi),造成過度度滅菌,影響培養(yǎng)養(yǎng)基的營營養(yǎng)成分分或選擇擇性效果果。培養(yǎng)基使使用過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)培養(yǎng)基的的接種平板在接接種使用用時(shí),表面必須須無明顯潮濕水水珠；對于保存存的培養(yǎng)養(yǎng)基,需待溫度度回復(fù)至室溫后后才可使使用,并且使用用前應(yīng)檢查；培養(yǎng)基貯貯存過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)干燥培養(yǎng)養(yǎng)基應(yīng)遵循先先入先出出的原則則；貯存于陰陰涼干燥燥處,避免強(qiáng)光光直射；培養(yǎng)基貯貯存過程程中的注注意事項(xiàng)項(xiàng)已配制的的培養(yǎng)基基建議平板板傾注后后立即使使用；在平板上上標(biāo)上制

4、制備日期期和/或有效期期和名稱；固體培養(yǎng)養(yǎng)基滅菌菌后的再再融化只只允許一次；實(shí)例例三糖鐵培培養(yǎng)基（TSI）未校正pH時(shí)，不同同廠家的的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)產(chǎn)硫化氫氫強(qiáng)度不不一；校正pH7.5后，各培養(yǎng)基基硫化氫氫反應(yīng)均均有改善善,不同廠家家的TSI培養(yǎng)基產(chǎn)產(chǎn)硫化氫氫強(qiáng)度仍仍不相同同；實(shí)例例三糖鐵培培養(yǎng)基（TSI）由于培養(yǎng)養(yǎng)基pH太低,本身就是是黃色,細(xì)菌生長長后下層層仍為黃黃色,而斜面變變?yōu)槌燃t紅色,易誤判斷斷為下層層“變?yōu)辄S色”。由此此定為發(fā)發(fā)酵菌，造成誤誤判；培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制（2010版藥典）培養(yǎng)基適適用性檢檢查計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基控制菌檢檢查用培養(yǎng)基計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基適用用性檢查查對照培養(yǎng)養(yǎng)基系指按培培養(yǎng)

5、基處處方特別別制備、質(zhì)量優(yōu)優(yōu)良的培培養(yǎng)基，用于培培養(yǎng)基適適用性檢檢查。由由中國藥藥品生物物制品檢檢定所研研制及分分發(fā)。計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基適用用性檢查查 大腸埃希希菌金黃色葡葡萄球菌菌枯草芽孢孢桿菌 白色念珠珠菌黑曲霉白色念珠珠菌營養(yǎng)瓊脂脂培養(yǎng)基基玫瑰紅鈉鈉瓊脂培培養(yǎng)基酵母浸出出粉胨葡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)養(yǎng)基計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基適用用性檢查查結(jié)果判定定被檢培養(yǎng)養(yǎng)基上的的菌落平平均數(shù)對照培養(yǎng)養(yǎng)基上的的菌落平平均數(shù)菌落形態(tài)態(tài)大小應(yīng)應(yīng)與對照照培養(yǎng)基基上的菌菌落一致致計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基70%控制菌檢檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查促生長能能力抑制能力力指示能力力檢查項(xiàng)目目控制菌檢檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查增菌培養(yǎng)養(yǎng)基促生生長能力力

6、檢查：分別接接種不大大于100cfu的的試驗(yàn)菌菌于被檢檢培養(yǎng)基基和對照照培養(yǎng)基基中，在在相應(yīng)控控制菌檢檢查規(guī)定定的培養(yǎng)養(yǎng)溫度及及最短培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)間下培養(yǎng)。與對照照培養(yǎng)基基管比較較，被檢檢培養(yǎng)基基管試驗(yàn)菌應(yīng)應(yīng)生長良良好?？刂凭鷻z檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查固體培養(yǎng)養(yǎng)基促生生長能力力檢查：取試驗(yàn)驗(yàn)菌各0.1ml（含含菌數(shù)50100cfu）分別涂布于被檢培培養(yǎng)基和和對照培培養(yǎng)基平平板上，在相應(yīng)應(yīng)控制菌菌檢查規(guī)規(guī)定的培培養(yǎng)溫度度及最短短培養(yǎng)時(shí)時(shí)間下培培養(yǎng)。被被檢培養(yǎng)養(yǎng)基與對對照培養(yǎng)養(yǎng)基生長長的菌落大小小形態(tài)特特征應(yīng)一一致。控制菌檢檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查培養(yǎng)基抑抑制能力力檢查：接種不不少于100cfu

7、的的試驗(yàn)驗(yàn)菌于被被檢培養(yǎng)養(yǎng)基中，在相應(yīng)應(yīng)控制菌菌檢查規(guī)規(guī)定的培培養(yǎng)溫度度及最長時(shí)間間下培養(yǎng)，試驗(yàn)菌應(yīng)應(yīng)不得生生長?？刂凭鷻z檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查固體培養(yǎng)養(yǎng)基指示示能力檢檢查：取取試驗(yàn)菌菌各0.1ml（含菌菌數(shù)不大大于100cfu）分分別涂布布于被檢檢培養(yǎng)基基和對照照培養(yǎng)基基平板上上，在相相應(yīng)控制制菌檢查查規(guī)定的的培養(yǎng)溫溫度及時(shí)時(shí)間下培培養(yǎng)。被檢培養(yǎng)養(yǎng)基中試試驗(yàn)菌生生長的菌菌落形態(tài)態(tài)、大小小、指示示劑反應(yīng)應(yīng)情況等等應(yīng)與對對照培養(yǎng)養(yǎng)基一致致?？刂凭鷻z檢查用培培養(yǎng)基適適用性檢檢查液體培養(yǎng)養(yǎng)基指示示能力檢檢查：分分別接種種不大于于100cfu 的試試驗(yàn)菌于于被檢培培養(yǎng)基和和對照培培養(yǎng)基中中，在相

8、相應(yīng)控制制菌檢查查規(guī)定的的培養(yǎng)溫溫度及最最短培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)間下下培養(yǎng)。與對照培培養(yǎng)基管管比較，被檢培培養(yǎng)基管管試驗(yàn)菌菌生長情情況、指指示劑反反應(yīng)等應(yīng)應(yīng)與對照照培養(yǎng)基基一致。培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制（2010版版藥典）實(shí)驗(yàn)室配配制的培培養(yǎng)基的的常規(guī)監(jiān)監(jiān)控項(xiàng)目目pH適適用性檢檢查試驗(yàn)驗(yàn)定期的穩(wěn)穩(wěn)定性檢查以確確定有效效期培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制（CHP與與USP的異同同點(diǎn)）計(jì)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基的適適用性檢檢查：CHPUSP菌種的選選擇大大腸埃埃希菌銅銅綠綠假單胞胞菌結(jié)果判定定比比值大于于70%1/22培養(yǎng)基營營養(yǎng)養(yǎng)瓊脂培培養(yǎng)基大大豆消化化酪素培培養(yǎng)基玫瑰紅鈉鈉瓊脂培培養(yǎng)基沙沙氏葡萄萄糖培養(yǎng)養(yǎng)基酵母浸出出粉胨葡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)養(yǎng)

9、基(YPD)培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制（CHP與與USP的異同同點(diǎn)）控制菌檢檢查用培培養(yǎng)基的的適用性性檢查：CHP與與USP方法基基本一致致，檢查查用培養(yǎng)養(yǎng)基不同同。同行的方方法介紹紹培養(yǎng)基質(zhì)質(zhì)量控制制理化試驗(yàn)驗(yàn)方法包包括測定定培養(yǎng)基基的pH值和凝凝膠強(qiáng)度度微生物學(xué)學(xué)方法包包括固體體培養(yǎng)基基和液體體培養(yǎng)基基同行的方方法介紹紹固體培養(yǎng)養(yǎng)基定量質(zhì)控控采采用傾注注平板法法、涂布布法、劃線法(半定量量法)、改良良的MilesMisra法等測定定生長情情況；定性質(zhì)控控評評價(jià)目標(biāo)標(biāo)微生物物非目標(biāo)標(biāo)微生物接種以以后的生生長情況況 ；同行的方方法介紹紹液體培養(yǎng)養(yǎng)基采用定量量稀釋法法,用目標(biāo)菌菌和雜菌菌的混合合菌株評價(jià)

10、價(jià)選擇性性增菌培培養(yǎng)基的的選擇性性；利用OD值評價(jià)液液體培養(yǎng)養(yǎng)基生長長率；同行的方方法介紹紹分值計(jì)算算質(zhì)質(zhì)量比較較新技術(shù)介介紹BioBall是一個(gè)很很小的水水溶性球球狀物，包含了數(shù)量精精確的微微生物個(gè)個(gè)體，它它可以使微生物物質(zhì)控中中的定量量控制達(dá)達(dá)到非常高的精精確度。新技術(shù)介介紹BioBall目前可以以提供超超過25種菌株；可應(yīng)用于于培養(yǎng)基基質(zhì)控、方法驗(yàn)驗(yàn)證等需要定量量質(zhì)控的的各個(gè)領(lǐng)領(lǐng)域；新技術(shù)介介紹BioBallSingleShot提供1次精確接接種量BioBallMultiShot-550提供10次精確接接種量新技術(shù)介介紹BioBallSingleShot每個(gè)BioBallSingleShot都含28至33cfu；標(biāo)準(zhǔn)誤差差小于或或等于3cfu；新技術(shù)介介紹BioBall與常規(guī)稀稀釋法相相比的優(yōu)優(yōu)勢使用方便便；精確的cfu數(shù)量；不同批次次間cfu數(shù)量穩(wěn)定定；減少了由由于接種種量的變變化，造造成的質(zhì)質(zhì)控失敗的風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)；BioBall