雙波長法測定安鈉咖中組分含量

院系：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系班級：11檢驗(yàn)本科1班姓名：****雙波長法測定安鈉咖中組分含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?、掌握紫外可見分光光度計(jì)的基本操作；2、掌握雙波長分光光度法測定二元混合物中待測組分含量的原理和方法；

3、掌握在物質(zhì)中吸收曲線上尋找吸收點(diǎn)、測定波長、參比波長的方法；

4、掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及應(yīng)用；

5、了解雙波長分光光度法在單光束分光光度計(jì)上的測定方式。實(shí)驗(yàn)原理每毫升安鈉咖注射液中含0.12g無水咖啡因和0.13g苯甲酸鈉，要求二組分的含量均應(yīng)為標(biāo)示量的93%~107%。在0.10mol/L鹽酸溶液中，苯甲酸鈉在230nm波長處有一較強(qiáng)吸收峰，咖啡因在272nm波長處有一較強(qiáng)吸收峰；二者吸收曲線重疊十分嚴(yán)重，直接采用吸光度進(jìn)行定量測定時，相互之間有嚴(yán)重干擾。波長230nm吸光度波長230nm吸光度根據(jù)光吸收定律，溶液吸光度應(yīng)為各個組分吸光度的加合。當(dāng)在230nm波長處測定苯甲酸鈉（此時把咖啡因視為干擾組分）時，測定的吸光度為：

但是在咖啡因的吸收曲線可以發(fā)現(xiàn)，咖啡因在230nm和257nm兩波長處得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收點(diǎn)）：

因此，通過直接測定混合物溶液在230nm和257nm兩波長處得吸光度值，再計(jì)算二吸光度的差值，可消除咖啡因?qū)Ρ郊姿徕c測定的干擾：=KC苯甲酸鈉可以看出，混合物溶液在230nm和257nm兩波長處得吸光度差值僅與苯甲酸鈉濃度成正比，而與咖啡因濃度無關(guān)，從而實(shí)現(xiàn)苯甲酸鈉的定量分析。

同理，當(dāng)在272nm波長處測定咖啡因（視苯甲酸鈉為干擾組分）時，可選擇272nm和253nm兩個苯甲酸鈉的等吸收點(diǎn)波長進(jìn)行測定，混合物溶液在這兩個波長處得吸光度差值僅與咖啡因濃度成正比，而與苯甲酸鈉濃度無關(guān)，可消除苯甲酸鈉對咖啡因測定的干擾，從而實(shí)現(xiàn)咖啡因的定量分析：實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1.752Pro型紫外可見分光光度計(jì)2.標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲備溶液（0.2500mg/ml）標(biāo)準(zhǔn)甲酸鈉儲備溶液（0.2500mg/ml）4.鹽酸溶液（0.10mol/L）5.50ml容量瓶12個6.5ml移液管4只7.1cm石英比色皿2個8.安鈉咖樣品溶液實(shí)驗(yàn)步驟咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制按照下表配制咖啡因標(biāo)準(zhǔn)系列溶液編號咖1咖2咖3咖4咖5移取0.25mg/ml標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲備溶液體積1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml系列標(biāo)準(zhǔn)咖啡因溶液濃度5μg/ml10μg/ml15μg/ml20μg/ml25μg/ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻。2.苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制按照下表配制苯甲酸鈉標(biāo)準(zhǔn)系列溶液編號苯1苯2苯3苯4苯5移取0.25mg/ml標(biāo)準(zhǔn)苯甲酸鈉儲備溶液體積1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml系列標(biāo)準(zhǔn)咖啡因溶液濃度5μg/ml10μg/ml15μg/ml20μg/ml25μg/ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻。標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和樣品溶液配制按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和樣品溶液編號6（標(biāo)混）7（樣品溶液）移取0.2500mg/ml標(biāo)準(zhǔn)咖啡因儲備溶液2.00ml，0.2500mg/ml標(biāo)準(zhǔn)苯甲酸鈉儲備溶液2.00ml移取安鈉咖樣品溶液1.00ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用0.10mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度并搖勻

。4.咖啡因等吸收點(diǎn)波長組合

在選定的波長處，用1cm比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表測定咖3溶液在下列波長處的吸光度值，并對測定數(shù)值進(jìn)行比較，選擇用于苯甲酸鈉定量測定的波長組合。波長230nm253nm254nm255nm256nm257nm258nm259nm260nm261nm吸光度0.4880.3900.4110.4310.4580.4870.5130.5370.5580.589測定波長出吸光度值測定波長為230nm，其吸光度：A=0.488選擇的參考波長吸光度與230nm波長相等點(diǎn)的波長：λ1=257nm5.苯甲酸鈉等吸收點(diǎn)波長組合

在選定的波長處，用1cm比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表測定苯3溶液在下列波長處的吸光度值，并對測定數(shù)值進(jìn)行比較，選擇用于咖啡因定量測定的波長組合。波長272nm249nm250nm251nm252nm253nm254nm255nm256nm257nm吸光度0.1470.2140.1880.1750.1620.1510.1470.1380.1320.128測定波長出吸光度值測定波長為272nm，其吸光度：A=0.147選擇的參考波長吸光度與272nm波長相等點(diǎn)的波長：λ2=254nm6.系列標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液的測定

在選定的組合波長處，用1cm比色皿，以0.10mol/L鹽酸溶液作為參比溶液，按照下表分別測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、標(biāo)準(zhǔn)混合溶液及樣品溶液的吸光度值，并計(jì)算對應(yīng)的吸光度差值。溶液編號測定波長測定波長230nmλ1ΔA1272nmλ2ΔA2咖10.2950.1800.115咖20.5430.2950.248咖30.7850.4020.383咖41.0320.5170.515咖51.2680.6310.637苯10.4590.0810.378苯20.8260.1000.726苯31.1490.1231.026苯41.5090.1451.364苯51.8650.1691.6966（標(biāo)混）1.0580.3880.6700.6020.3420.2607（樣品）2.010.6721.3381.0780.5950.483實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制根據(jù)上述測定結(jié)果，在以吸光度差值作為縱坐標(biāo)，系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度作為橫坐標(biāo)制圖，分別繪制ΔA1-苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、ΔA2-咖啡因系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品溶液中苯甲酸鈉、咖啡因含量的計(jì)算

根據(jù)7號樣品溶液在組合波長的吸光度差值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線函數(shù)式求出其中苯甲酸鈉、咖啡因的濃度值，用下式計(jì)算出苯甲酸鈉、咖啡因的含量：根據(jù)ΔA1-苯甲酸鈉系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式y(tǒng)=0.0655x+0.0558可得到樣品溶液中苯甲酸鈉溶液濃度所以根據(jù)ΔA2-咖啡因系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式y(tǒng)=0.0262x-0.0137可得樣品溶液中咖啡因溶液濃度所以3.比較法計(jì)算苯甲酸鈉、咖啡因標(biāo)示量

分別采用下列公式計(jì)算樣品溶液中苯甲酸鈉、咖啡因標(biāo)示量，其中120、250、130為國家藥典規(guī)定的轉(zhuǎn)換系數(shù)：實(shí)驗(yàn)討論實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意：=1\*GB3①測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液時，必須使用同一只比色皿；=2\*GB3②比色皿放入分光光度計(jì)樣品室前，必須用吸水紙將外表面擦拭干凈；=3\*GB3③比色皿在換裝不同濃度溶液時，必須用待測液潤洗至少三次；測定過程中首先確定等吸收點(diǎn)是因?yàn)楦鶕?jù)等吸收點(diǎn)可以消除一種組分對另一種組分的干擾；并且雙波長分光光度法是通過測定一種組分的等吸收點(diǎn)，再計(jì)