分支桿菌培養(yǎng)技術(shù)課件

分枝桿菌培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)目的、意義、分類目的：分離培養(yǎng)臨床標(biāo)本中的分枝桿菌

意義：

診斷結(jié)核病金標(biāo)準(zhǔn)獲得菌株鑒定試驗(yàn)純培養(yǎng)物

獲得藥敏試驗(yàn)所需的純培養(yǎng)物

療效評(píng)估分類：簡單法:酸性羅氏培養(yǎng)法離心集菌法：中性羅氏培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)法（如MGIT960液體培養(yǎng)法）結(jié)核分枝桿菌生長要求

專性需氧菌最適生長溫度為37℃最適PH為6.5～7.2營養(yǎng)要求：氮源、碳源、無機(jī)鹽（磷、鐵、鎂、鉀、硫等）、生長因子簡單法操作步驟痰標(biāo)本2-3ml1－2倍4%NaOH振蕩勻化靜置15分鐘均勻接種0.1ml,2支斜面朝上，放置24小時(shí)37℃，培養(yǎng)8周簡單法掌握要點(diǎn)1、原理2、標(biāo)本類型3、儀器設(shè)備4、試劑耗材5、操作注意事項(xiàng)6、結(jié)果判讀7、質(zhì)量控制8、討論一、原理分枝桿菌因較厚的細(xì)胞壁有耐受酸堿的特點(diǎn)，能耐受堿性消化液的處理，消化液直接接種于酸性培養(yǎng)基上，酸性培養(yǎng)基能中和堿性標(biāo)本處理液，分枝桿菌能在酸性的培養(yǎng)基上生長

2%NaOH4%NaOH4%H2SO4注：不同濃度消化處理液對(duì)結(jié)核菌生長的影響二、標(biāo)本類型痰、BF、體液（胸腹水、尿液、CSF等）、大便、組織等

注：標(biāo)本是否留取合格

不同標(biāo)本類型的不同前處理過程

保存方法四、試劑耗材1、4%NaOH2、酸性羅氏培養(yǎng)基成分味精（谷氨酸鈉）（純度95%以上）7.2gKH2PO414g(中性2.4g)枸櫞酸鎂0.6gMgSO4·7H2O0.24g甘油（丙三醇）12ml蒸餾水600ml新鮮雞卵液1000ml2%孔雀綠20ml85℃蒸氣鍋50分鐘注：配制培養(yǎng)基需注意的問題、注意識(shí)別不合格培養(yǎng)基六、結(jié)果判讀及報(bào)告分枝桿菌培養(yǎng)陰性：斜面無菌落生長。分枝桿菌培養(yǎng)陽性(1十)：菌落生長占斜面面積的1／4。分枝桿菌培養(yǎng)陽性(2十)：菌落生長占斜面面積的1／2。分枝桿菌培養(yǎng)陽性(3十)：菌落生長占斜面面積的3／4。分枝桿菌培養(yǎng)陽性(4十)：菌落生長布滿全斜面。

分枝桿菌培養(yǎng)陰性應(yīng)以“(培養(yǎng)陰性)”報(bào)告，不能以“(—)”表示。菌落生長不足以斜面面積1／4時(shí)，實(shí)報(bào)菌落數(shù)。（對(duì)可疑培養(yǎng)陽性標(biāo)本，必須涂片進(jìn)行抗酸染色確診）七、質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制（QC）室間質(zhì)量評(píng)估（EQA）現(xiàn)場評(píng)價(jià)(on-siteevaluation)：人力物力，難以日常監(jiān)控盲法復(fù)檢(blinded-rechecking)：痰標(biāo)本用完難以重復(fù)批量測(cè)試(paneltesting)：在樣本準(zhǔn)備方面還需要更多的技術(shù)投入培養(yǎng)的質(zhì)量保證目前主要依賴室內(nèi)質(zhì)量控制，輔以定期或不定期的現(xiàn)場評(píng)價(jià)。七、質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制

人員培訓(xùn)、儀器設(shè)備監(jiān)控、培養(yǎng)基無菌試驗(yàn)、生長試驗(yàn)每月對(duì)培養(yǎng)情況培養(yǎng)陽性率、涂陽培陽率和污染率的統(tǒng)計(jì)分析涂陽培陽率

公式:培養(yǎng)陽性的病例總數(shù)

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涂片檢查陽性并進(jìn)行培養(yǎng)的病例數(shù)初診病人涂陽培陽率應(yīng)大于90％污染率公式:污染的培養(yǎng)管數(shù)量

———————————×100%

培養(yǎng)管總數(shù)污染率應(yīng)小于5%(2-5%)。涂陽培陽率過低？污染率過高？總結(jié)簡單法操作流程痰標(biāo)本中加入1－2倍體積4％氫氧化鈉渦旋振蕩30-60秒室溫靜置15分鐘接種：0.1ml，2管37C溫箱培養(yǎng)水平向上培養(yǎng)24小時(shí)直立放置37C繼續(xù)培養(yǎng)觀察報(bào)告結(jié)果：第3天、7天、此后每周一次，直至滿8周BACTECTMMGITTM960液體培養(yǎng)技術(shù)原理：MGIT960液體培養(yǎng)操作步驟痰標(biāo)本2-5ml1－2倍NaOH(3%)-NALC振蕩勻化靜置15分鐘