細(xì)胞培養(yǎng)中的黑膠蟲(chóng)問(wèn)題

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercial細(xì)胞培養(yǎng)中的黑膠蟲(chóng)問(wèn)題1.我實(shí)驗(yàn)室最近一次的情:我們前后從上海細(xì)胞中心買(mǎi)了三批細(xì)胞細(xì)胞剛到的時(shí)候，觀察均生長(zhǎng)良好，密度適中，培養(yǎng)液清亮也有見(jiàn)小黑點(diǎn)但是對(duì)細(xì)胞傳代以后就陸續(xù)出現(xiàn)多少不等的小黑點(diǎn)時(shí)候在一夜之間暴長(zhǎng)給養(yǎng)液加慶大素也濟(jì)于事對(duì)貼壁細(xì)胞用生理鹽水及D-hanks液沖洗七遍后見(jiàn)減少但是隨后幾天出現(xiàn)剛始懷疑操作有問(wèn)題但由有經(jīng)驗(yàn)的老師操作也出現(xiàn)這種問(wèn)題，陸續(xù)對(duì)培養(yǎng)液，血清及胰酶進(jìn)行培養(yǎng)也沒(méi)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題。同時(shí)培養(yǎng)箱也有本實(shí)驗(yàn)室保存的3t3胞進(jìn)行培養(yǎng)生快很快鋪滿(mǎn)仔細(xì)觀察也可以見(jiàn)到少量的黑點(diǎn)。后來(lái)還有從軍科院過(guò)來(lái)的Hela細(xì)，沒(méi)有使用我們的血清，直接吸出多余的培養(yǎng)液后，進(jìn)行培養(yǎng)，傳代后用原來(lái)吸出的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，同樣發(fā)現(xiàn)了問(wèn)題。可以發(fā)現(xiàn)如下的特點(diǎn)：（）與胞共生，細(xì)胞長(zhǎng)好或密度大的話(huà)，小黑點(diǎn)就少，反之則多（）對(duì)生素?zé)o效；（）可通過(guò)培養(yǎng)箱空氣行污染；（）單培養(yǎng)液及血清培沒(méi)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題。（）換沖洗后也無(wú)效。以下是論壇里我找來(lái)的相關(guān)帖子內(nèi)容“黑膠蟲(chóng)”是近十幾年才發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞污染物，“黑膠蟲(chóng)”的分類(lèi)目前尚無(wú)鑒定確認(rèn)。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代“黑膠蟲(chóng)與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒(méi)有什么影響當(dāng)黑膠蟲(chóng)的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候，細(xì)胞長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行所以“黑膠蟲(chóng)的污染常在培養(yǎng)條件改變胞接種密度降低細(xì)胞狀態(tài)不佳時(shí)顯現(xiàn)并使實(shí)驗(yàn)中斷，尤其在凍存細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)可造成大量細(xì)胞死亡。目前比較公認(rèn)的觀點(diǎn)認(rèn)為“黑膠蟲(chóng)”是一種微生物殖緩慢但對(duì)細(xì)胞有損害量到一定程度可引起細(xì)胞死亡來(lái)源可能是細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)污染造成的污在全世界細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中普遍存在，解決該問(wèn)題是一個(gè)世界性難題關(guān)于是什么的問(wèn)題的討論A.玻培養(yǎng)瓶中的類(lèi)似氧化的東西（曾經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道過(guò)）B.據(jù)這是黑膠蟲(chóng)，又有人是原生動(dòng)物，好象也沒(méi)個(gè)統(tǒng)一的說(shuō)法C.據(jù)毒所和軍科院鑒定是種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲(chóng)和履蟲(chóng)和變形蟲(chóng)有類(lèi)似之處，然而由于課題經(jīng)費(fèi)不夠而不能繼續(xù)進(jìn)行下去。D.有說(shuō)納級(jí)細(xì)菌其他的特點(diǎn)（）態(tài)上有些像細(xì)菌，直徑約在0.5~1微米（）在400X倒置顯微鏡小，典型的布朗運(yùn)動(dòng)（不規(guī)則的原地小距離抖動(dòng)）。（）細(xì)內(nèi)好像也有存在，（）但不引起培養(yǎng)液混濁（）時(shí)稍長(zhǎng)，細(xì)胞狀態(tài)明顯化，并最后死亡

大家的處理：1.換一點(diǎn)的血清（我覺(jué)著和血的關(guān)系不大）。2.如是貼壁細(xì)胞的話(huà)可無(wú)的PBS洗幾次可一定程度上緩解若懸浮的話(huà)就太好處理拉以其中少加一滋養(yǎng)細(xì)小鼠腹腔內(nèi)取的巨噬細(xì)胞種胞不分裂，過(guò)一陣就死掉了做抗體雜交瘤合的同志肯定知道加滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)有黑膠蟲(chóng)的剛復(fù)蘇的細(xì)胞很有效！還有就是實(shí)驗(yàn)環(huán)境要注意好，保持細(xì)胞間整個(gè)環(huán)境的潔凈度。3.換進(jìn)口的一次性塑料培養(yǎng)瓶4.建清理無(wú)菌室所有物品，重滅菌KMnO4熏按首次使用無(wú)菌室做，細(xì)胞重新復(fù)蘇，。5.在液前先加入生理鹽水并輕輕拍打，沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液，堅(jiān)持天天洗，傳代時(shí)加生理鹽水再離心一次接密稍大一些一段時(shí)間后，蟲(chóng)子就會(huì)大大減少，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)也不會(huì)有大的影響。6.有料稱(chēng)minocycline具一的作用，可以和換液結(jié)合起來(lái)使用。殺滅蟲(chóng)的一種估計(jì)養(yǎng)細(xì)胞，很多人到過(guò)所謂“黑膠蟲(chóng)”。最近養(yǎng)細(xì)胞，不幸的，也中獎(jiǎng)，看到培養(yǎng)瓶里仿一夜之間出來(lái)的密麻麻的小黑東西真是有苦難言為曾在園里看過(guò)有“黑膠蟲(chóng)”帖子，不對(duì)付，沒(méi)有效的殺滅方法，據(jù)說(shuō)有專(zhuān)殺培養(yǎng)，但又有么好的方可以消除實(shí)室和培養(yǎng)內(nèi)的污染？紫外照射、甲醛高錳酸鉀熏蒸------些方法不其對(duì)“黑膠蟲(chóng)”確切效果有些對(duì)人毒害，有沒(méi)有一種方法，即能殺死黑膠蟲(chóng)”人毒性又較小呢？想到了試新?tīng)枺ㄔ澹┦欠褚?，新潔滅是外用膚消毒劑，我們實(shí)驗(yàn)室常規(guī)來(lái)擦洗手工作臺(tái)面。首先說(shuō)明這東西在低下呈黑色狀在高倍下呈狀確實(shí)是不停地運(yùn)動(dòng)有些戰(zhàn)友不相信它動(dòng)也有人不相有這種所謂的“黑膠蟲(chóng)”只靜下心來(lái)仔盯住一點(diǎn)你就會(huì)能注意到它實(shí)在運(yùn)動(dòng)我也錄了段相，足以可以證明，太大，160多M題：殺滅處理黑膠的一種新法目：找到種高效且或無(wú)毒的滅處理“黑膠蟲(chóng)”的方法。方取有黑膠蟲(chóng)污染的六孔板內(nèi)有2ml培養(yǎng)液污染的孔內(nèi)別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔滅原液，邊邊在倒置微鏡下觀。結(jié)加入潔爾滅時(shí)培養(yǎng)液內(nèi)漸變得有些混濁且有絮狀的東西形成（肉看是白色的），這際上是由黑膠蟲(chóng)”集而成（見(jiàn)下面的圖），約2-3分鐘后“黑膠蟲(chóng)”慢慢停止了運(yùn)動(dòng)。了進(jìn)一步察其效果把六孔板放入37度培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)第二天觀察發(fā)現(xiàn)：有些仍成團(tuán)絮但不會(huì)動(dòng)有貼在瓶壁也不會(huì)動(dòng)有些已由桿變成了圓球象是生了水腫一樣，更會(huì)動(dòng)了，計(jì)“黑膠”已死亡。這幾種劑量的新潔爾滅果是一樣。結(jié)：新潔滅與水或養(yǎng)基的比為1：時(shí)即殺死“黑蟲(chóng)”（更的濃度沒(méi)有試，當(dāng)時(shí)殺蟲(chóng)心，就想多點(diǎn)，反正不貴，一瓶新潔爾滅才7多錢(qián)）。以噴灑或洗用于實(shí)驗(yàn)室或培養(yǎng)內(nèi)消毒若胞不珍貴不想要了也以用來(lái)殺滅其中的“黑蟲(chóng)”若細(xì)珍貴，不要輕嘗試，除你不想要；你試了，本人概不負(fù)責(zé)

以下無(wú)正僅供個(gè)用學(xué)習(xí)、究不得用商業(yè)用。толькдлялюдей,которыеиспользуютсядляобучения,исследованийинедолжныиспользоваьсявкомерческихцелях.Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfürdenpers?nlichenfürStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'étudeetrecherche