藍白斑篩選課件

Blue-whitescreening

藍白斑篩選生技1132班24號顏淑影1Blue-whitescreening:InsertionalinactivationoftheLacZ'geneonaplasmidcanbeusedtoscreenfor

recombinantsonaplatecontainingIPTGandX-gal.TheX-galisconvertedtoablueproductiftheLacZ'geneisintactandinducedbyIPTG;hencerecombinantsgrowaswhitecolonies.藍白斑的篩選：在一個質粒上LacZ'基因的插入失活能夠在含有IPTG和X-gal的平板上用來篩選重組株。如果LacZ'基因完好無缺并且通過IPTG誘導，那么X-gal最終將被改變成一種藍色產(chǎn)物，因此重組株以白色菌落生長。

LacZ'：半乳糖苷酶

IPTG：異丙基-β-d-硫代半乳糖苷

X-gal:半乳糖苷藍白斑篩選簡述2（多克隆位點）（為藍白斑篩選設計的質粒載體）（啟動子）（氨比西林耐藥性基因）備注：野生型大腸桿菌產(chǎn)生的β-半乳糖苷酶可以將無色化合物X-gal切割成半乳糖和深藍色的物質。3Thismethodalsoinvolvestheinsertionalinactivationofageneand,asthenameimplies,usestheproductionofabluecompoundasanindicator.這種方法也涉及到基因的插入滅活，顧名思義，利用一種藍色復合物的產(chǎn)物作為一種指示劑。ThegeneinthiscaseisLacZ',whichencodestheenzymeβ-galactosidase[ɡ?'l?ktos?,des],andisunderthecontrolofthelacpromoter.在這里的基因叫LacZ'，是編碼β半乳糖苷酶，以及是在lac啟動子控制下的。5IfthehostE.coliStrainisexpressingthelacrepressor[r?'pr?s?],thenexpressionofaLacZ'

geneonthevectormaybeinducedusingIPTG,andtheexpressedenzymecanutilizethesyntheticsubstrateX-galtoyieldablueproduct.如果宿主大腸桿菌株是正在表達lac阻遏蛋白，然后在載體上一個LacZ'基因的表達可以誘導利用IPTG，接著表達的酶可以利用人工合成的X-gal培養(yǎng)基產(chǎn)出一種藍色的產(chǎn)物。6Inthismethod(Fig.2),thetransformedcellsarespreadontoaplatecontainingampicillin(toselectfortransformantsintheusualway),IPTGandX-gal,toyieldamixtureofblueandwhitecolonies.InsertionalinactivationofLacZ'intheproductionofarecombinantplasmidwouldpreventthedevelopmentofthebluecolor.在這種方法中，轉換細胞被傳播在一個人含有氨比西林（用正常的方法選擇轉換株）、IPTG和X-gal的平板上產(chǎn)出藍色和白色菌落的混合物。重組質粒中LacZ'基因的產(chǎn)物的插入失活將有礙藍色物質的形成。7Thewhitecolonieshavenoexpressedβ-galactosidaseandarehencelikelytocontaintheinsertedtargetfragment.Thebluecoloniesprobablycontainreligatedvector.白色菌落沒有表達β半乳糖苷酶，因此可能含有插入的目標片段。藍色菌落可能含有重組載體。Inpractice，thevectorsusedinthismethodhaveashortenedderivativeofLacZ',whichproduce