生物制藥技術(shù)復習題

生物制藥工藝學習題集生物藥物概述填空:1、我國藥物的三大藥源指的是化學藥物、生物藥物、中藥。2、現(xiàn)代生物藥物已形成四大類型，包括基因重組多肽和蛋白質(zhì)、基因藥物、天然生化藥物、合成與部分合成的生物藥物。3、請寫出下列藥物英文的中文全稱：IFN（Interferon）干擾素、IL（Interleukin）白介素、CSF（ColonyStimulatingFactor）集落刺激因子、EPO（Erythropoietin）促紅細胞生成素、EGF（EpidermalGrowthFactor）表皮生長因子、NGF（NerveGrowthFactor）神經(jīng)生長因子、rhGH（RecombinantHumanGrowthHormone）重組人生長激素、Ins（Insulin）胰島素、HCG（HumanChoriogonadotrophin）人絨毛膜促性腺激素、LH促黃體生成素、SOD超氧化物歧化酹、tPA組織纖溶酶原激活物4、常用的B-內(nèi)酰胺類抗生素有青霉素、頭孢菌素;氨基糖苷類抗生素有鏈霉素；大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有紅霉素;四環(huán)類抗生素有土霉素;多肽類抗生素有桿菌肽;多烯素抗生素有兩性霉B；蒽環(huán)類抗生素有阿霉素。5、嵌合抗體是指用人源抗體恒定區(qū)替換鼠源抗體恒定區(qū)，保留抗體可變區(qū)：人源化抗體是指抗體可變區(qū)中僅CDR（決定簇互補區(qū)）為鼠源，其FR（骨架區(qū)）及恒定區(qū)均來自人源。6、基因工程技術(shù)中常用的基因載體有質(zhì)粒、噬菌體（phage）、黏粒因琥!^技、病毒載體等。選擇題：TOC\o"1-5"\h\z1、以下能用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的藥物為 （ B）A、維生素B、生長素C、肝素D、鏈霉素2、下面哪一種藥物屬于多糖類生物藥物 （C）A、洛伐他汀 B、干擾素C、肝素D、細胞色素C3、能用于防治血栓的酶類藥物有 （D）A、SOD B、胰島素C、L-天冬酰胺酶D、尿激酶4、環(huán)抱菌素是微生物產(chǎn)生的 （A）A、免疫抑制劑 B、酶類藥物 C、酶抑制劑D、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素5、下列屬于多肽激素類生物藥物的是 （D）A、ATPB、四氫葉酸 C、透明質(zhì)酸D、降鈣素6、蛋白質(zhì)工程技術(shù)改造的速效胰島素機理是 （D）精選資料，歡迎下載A.將豬胰島素B30位改造為丙氨酸，使之和人胰島素序列一致B.將A21位替換成甘氨酸，B鏈末端增加兩個精氨酸，使之在pH4溶液中可溶C.將B29位賴氨酸用長鏈脂肪酸修飾，改變其皮下擴散和吸收速度D.將人胰島素B28位與B29位氨基酸互換，使之不易形成六聚體名詞解釋：藥物Medicine（remedy）：用于預防、治療或診斷疾病或調(diào)節(jié)機體生理功能、促進機體康復保健的物質(zhì)，有4大類：預防藥、治療藥、診斷藥和康復保健藥。生物藥物（biopharmaceutics）：是以生物體、生物組織或其成份為原料（包括組織、細胞、細胞器、細胞成分、代謝、排泄物）綜合應用生物學、物理化學與現(xiàn)代藥學的原理與方法加工制成的藥物基因藥物（genemedicine）：是以基因物質(zhì)（RNA或DNA及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎，包括基因治療用的重組目的DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酶等反義藥物：是以人工合成的十至幾十個反義寡核甘酸序列，它能與模板DNA或mRNA互補形成穩(wěn)定的雙鏈結(jié)構(gòu)，抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄和mRNA翻譯，從而達到抗腫瘤和抗病毒作用生物制品（biologics）：是應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備的，用于人類疾病預防、治療和診斷的藥品RNA干涉（RNAi，RNAinterference）：是指在生物體細胞內(nèi)，dsRNA引起同源mRNA的特異性降解，因而抑制相應基因表達的過程siRNA（smallinterferingRNA）：是一種小RNA分子（~21-25核甘酸），由Dicer（RNAaseIII家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。siRNA是siRISC（RNA-inducedsilencingcomplex由核酸內(nèi)切酶、核酸外切酶、解旋酶等構(gòu)成，作用是對靶mRNA進行識別和切割）的主要成員，激發(fā)與之互補的目標mRNA的沉默問答題基因重組藥物與基因藥物有什么區(qū)別？答：基因重組藥物是指應用重組DNA技術(shù)（包括基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的重組多肽、蛋白質(zhì)類藥物和疫苗、單克隆抗體與細胞因子等，藥物的化學成分屬于多肽或蛋白質(zhì)；基因藥物是以基因物質(zhì)（RNA或DNA及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎，包括基因治療用的重組目的DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酶等，藥物的化學成分為核酸或其衍生物。生物藥物有那些作用特點？精選資料，歡迎下載答：1）藥理學特性有：藥理活性高；治療針對性強；毒副作用較少，營養(yǎng)價值高；生理副作用常有發(fā)生等。2）理化特性有：生物材料中的有效物質(zhì)含量低，雜質(zhì)種類多且含量相對較高；生物活性物質(zhì)組成結(jié)構(gòu)復雜，穩(wěn)定性差；生物材料易染菌，腐??；生物藥物制劑有特殊要求?；蚬こ趟幬镏饕心膸最?？試舉例說明。答：基因工程藥物是指應用基因工程或蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造的重組活性多肽、蛋白質(zhì)及其修飾物，包括：1）重組細胞因子類：如干擾素（IFN）、白介素（IL）和腫瘤壞死因子（TNF）；2）重組生長因子類：如表皮生長因子（EGF）、神經(jīng)生長因子（NGF），以及促進造血系統(tǒng)的生長因子：如促紅細胞生成素（EPO）、集落刺激因子等（CSF）；3）重組多肽與蛋白質(zhì)類激素：如重組人胰島素（rhInsulin）、重組人生長激素等（rhGH）；4）心血管病治療劑及酶制劑：如水蛭素、tPA（組織纖溶酶原激活物）、天冬酰胺酶、超氧化物歧化酶（SOD）等。5）重組疫苗及單抗制品：如重組乙肝表面抗原疫苗（酵母）、腫瘤疫苗等。第二章生物制藥工藝技術(shù)基礎一、填空題1、從生物材料中提取天然大分子藥物時，常采用的措施有采用緩沖系統(tǒng)、添加保護劑、抑制水解酶作用等。2、生化活性物質(zhì)濃縮可采用的方法有鹽板濃縮、有機溶劑沉淀濃縮、超濾濃縮、真空減壓濃縮或薄膜濃維、用葡聚糖凝膠濃縮、用聚乙二醇濃縮。3、生化活性物質(zhì)常用的干燥方法有減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥。4、冷凍干燥是在低溫、低壓條件下，利用水的升空性能而進行的一種干燥方法。5、微生物菌種的分離和純化可以用的方法有平板劃線法、稀釋涂布平板法。6、微生物菌種的自然選育是指利用微生物在一定條件下產(chǎn)生自發(fā)突變的原理，通過分離、篩選排除衰變型菌落，選擇維持原有生產(chǎn)水平的菌株。7、誘變時選擇出發(fā)菌株時應考慮出發(fā)菌株的穩(wěn)定性、選用具備某種優(yōu)良特性、對誘變劑敏感、菌種的生理狀態(tài)及生長發(fā)育時間等問題。8、目前常用的誘變劑可分為物理誘變因子、化學誘變劑、生物誘變因子三大類。9、常用的菌種保藏方法有：斜面低溫保藏法、液體石蠟封藏法、冷凍干燥保藏法、液氮超低溫保藏法、甘油保藏法、沙土管保藏等。10、微生物生長需要的六大營養(yǎng)要素是碳源、氮源、能源、生長因子、無機鹽、水。11、生物藥物制備過程中，常用的滅菌及除菌方法有：加熱滅菌、輻射滅菌（紫外殺菌）、介質(zhì)過濾除菌、化學滅菌法。精選資料，歡迎下載

12、獲得具有遺傳信息的目的基因的方法有鳥槍克隆法（DNA文庫）、cDNA文庫法、化學合成法、PCR法。13、PCR由3個基本反應組.成，即高溫變性、低溫退火、適溫延伸。14、基因工程中原核表達常用的宿主有大腸桿菌、枯草桿菌等；常用的真核表達系統(tǒng)有酵母、動物（植物）細胞等。15、大腸桿菌表達系統(tǒng)的缺點是不能進行翻譯后加工（糖基化），因而像EPO等基因的表達需使用其核（酵母）表達系統(tǒng)。16、分泌表達是指將目的基因嵌合在信號肽基因下游進行表達，從而使目的基因分泌到細胞周質(zhì)或培養(yǎng)基中。17、固定化酶常采用的方法可分為吸附、包埋、交聯(lián)、共價鍵結(jié)合四大類。18、下面酶固定化示例圖分別代表哪種固定化方法：?―0?=Bf+A.吸附B.共價鍵結(jié)合 C.交聯(lián) D.包埋二、選擇題1、如果想要從生物材料中提取輔酶Q10,應該選取下面哪一種動物臟器 （D）A、胰臟 B、肝臟 C、小腸口、心臟2、目前分離的1000多種抗生素，約2/3產(chǎn)自 （B）A、真菌 B、放線菌C、細菌 D、病毒3、由于目的蛋白質(zhì)和雜蛋白分子量差別較大，擬根據(jù)分子量大小分離純化并獲得目的蛋白質(zhì)，可采用（C）A、SDS凝膠電泳 B、鹽析法C、凝膠過濾D、吸附層析4、以下可用于生物大分子與雜質(zhì)分離并純化的方法有 （D）A、蒸餾 B、冷凍干燥 C、氣相色譜法D、超濾5、分離純化早期，由于提取液中成分復雜，目的物濃度稀，因而易采用 （A）A、分離量大分辨率低的方法 B、分離量小分辨率低的方法C、分離量小分辨率高的方法 D、各種方法都試驗一下，根據(jù)試驗結(jié)果確定精選資料，歡迎下載TOC\o"1-5"\h\z6、以下可用于菌種純化的方法有 （B）A、高溫滅菌 B、平板劃線 C、富集培養(yǎng) D、誘變處理7、能夠?qū)崿F(xiàn)微生物菌種定向改造的方法是 （D）A、紫外誘變 8、自然選育 C、制備原生質(zhì)體 D、基因工程8、能夠用沙土管保存的菌種是 （C）A、大腸桿菌 B、酵母菌 C、青霉菌 D、乳酸桿菌9、以下關(guān)于PCR的說法錯誤的是 （C）A、PCR反應必須要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶B、應用PCR技術(shù)可以進行定點突變C、PCR的引物必須完全和模板互補配對D、PCR反應中，僅介于兩引物間的DNA片段得到大量擴增三、名詞解釋1、酶工程（enzymeengineering）：是從應用目的出發(fā)，研究酶和應用酶的特異催化功能，并通過工程化過程將相應原料轉(zhuǎn)化成所需產(chǎn)物的技術(shù)。2、固定化酶（immobilizedenzyme）：是指借助于物理和化學的方法把酶束縛在一定空間內(nèi)并具有催化活性的酶制劑，酶經(jīng)固定化以后穩(wěn)定性有所提高，而且可以反復使用，并能實現(xiàn)反應連續(xù)化、自動化，簡化產(chǎn)品的純化工藝。3、原生質(zhì)體融合：用脫壁酶處理將微生物細胞壁去除，制成原生質(zhì)，再用聚乙二醇（PEG）促進原生質(zhì)體發(fā)生融合，從而獲得融合子的技術(shù)。4、雜交育種：雜交育種一般指將兩個基因型不同的菌株通過接合使遺傳物質(zhì)重新組合，再從中分離和篩選出具有新性狀的菌株。雜交后的雜種不僅能克服原有菌種活力衰退的趨勢，而且，雜交育種使得遺傳物質(zhì)重新組合，擴大了變異范圍，改善了產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量。5、誘變育種：誘變育種是指有意識地將生物體暴露于物理的、化學的或生物的一種或多種誘變因子下，促使生物體發(fā)生突變，進而從突變體中篩選具有優(yōu)良性狀的突變株的過程。6、感受態(tài)細胞：在分子克隆過程中，宿主細胞需經(jīng)過人工處理成能吸收重組DNA分子的敏感細胞才能用于轉(zhuǎn)化，此時的細胞稱為感受態(tài)細胞。7、原代細胞：是直接取自動物組織器官，經(jīng)過分散、消化制得的細胞懸液。8、二倍體細胞系：原代細胞經(jīng)過傳代、篩選、克隆，從而由多種細胞成分的組織中挑選強化具有一定特性的細胞株，其特點是：1）染色體組織仍然是2n的模型；2）具有明顯貼壁依賴和接觸抑制特性；3）具有有限的增殖能力；4）無致癌性。精選資料，歡迎下載四、問答題1、生物藥物分離制備的基本特點有哪些？答：1）生物材料組成非常復雜；2）有些化合物在生物材料中含量極微；3）生物活性成分離開生物體后，易變性破壞，因而須注意保護其生理活性；4）生物制藥中的分離方法常帶有很大的經(jīng)驗成分；5）生物制藥中的分離方法多采用溫和的“多階式”方法進行；6）生物產(chǎn)品最后均一性的證明與化學上純度的概念不完全相同。2、簡述單克隆抗體（monoclonalantibody）的制備原理。答：B細胞群受抗原刺激后能產(chǎn)生針對抗原決定簇的特異性抗體，一個集體可產(chǎn)生多達100萬種特異性不同的抗體，但一個B細胞卻只能分泌一種特異性抗體。將B細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合后，用有限稀釋法把產(chǎn)生不同抗體的雜交瘤細胞分開，挑選出單個雜交瘤細胞，每個雜交瘤細胞只分泌一種特異性抗體。培養(yǎng)單個雜交瘤細胞，使之無性繁殖形成細胞集落（稱之為克?。?，同一個克隆的雜交瘤基因相同，合成并分泌的特異性抗體質(zhì)地均一，這種抗體稱為單克隆抗體。3、簡述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理。答：生物大分子分離純化的主要原理是：1）根據(jù)分子形狀和大小不同進行分離，如差速離心與超離心、膜分離、凝膠過濾等；2）根據(jù)分子電離性質(zhì)（帶電性）差異進行分離，如離子交換法、電泳法、等電聚焦法；3）根據(jù)分子極性大小及溶解度不同進行分離，如溶劑提取法、逆流分配法、分配層析法、鹽析法、等電點沉淀及有機溶劑分級沉淀等；4）根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同進行分離，如選擇性吸附與吸附層析等；5）根據(jù)配體特異性進行分離，如親和層析法等。第三章生物材料的預處理、細胞破碎和液-固分離一、填空題1、確定生物材料的預處理方法的依據(jù)是生物活性物質(zhì)存在方式與特點、后續(xù)操作的要求、目的物穩(wěn)定性。2、高價金屬離子的去處常用的方法：離子交換法、沉淀法。3、常用的細胞破碎方法：機械法、物理法、化學法、生物法。物理法主要包括：干燥法、反復凍融法、滲透壓沖擊法。生物法主要包括：酶解法、組織自溶法。4、常規(guī)的固液分離技術(shù)主要有過濾和離心分離等。二、問答1、簡述錯流過濾的優(yōu)點及其原因。答：①過濾收率高，由于過濾過程中，洗滌充分、合理，少量多次，故濾液稀釋量不大的情況下，獲得高達97-98%的收率。②濾液質(zhì)量好，凡體積大于膜孔的固體，包括菌體、培養(yǎng)基、雜蛋白等均不能通過精選資料，歡迎下載膜進入濾液，大部分雜質(zhì)被排除掉，給后續(xù)分離及最終產(chǎn)品質(zhì)量均帶來好處。③減少處理步驟，鼓式真空過濾器一般需涂助濾劑，板框過濾器則需清洗，拆裝費時、費力，而錯流過濾只需在18-20h連續(xù)操作之后，用清水沿原管流洗4-6h。④對染菌罐易于批處理，也容易進行擴大生產(chǎn)。2、簡述影響液-固分離的因素。答：①微生物種類對液固分離的影響；②發(fā)酵液的粘度；③發(fā)酵液的PH、溫度和加熱時間。3、簡述離心分離法的優(yōu)缺點。答：離心分離法速度快，效率高，操作時衛(wèi)生條件好，占地面積小，能自動化、連續(xù)化和程序控制，適合于大規(guī)模的分離過程，但是設備投資費用高、耗能也較高。4、簡述細胞及蛋白質(zhì)的預處理方式。答：①加入凝聚劑；②加入絮凝劑；③變性沉淀；④吸附；⑤等電點沉淀；⑥加各種沉淀劑沉淀第四章萃取分離法一、填空題1、常用的萃取方法有：單級萃取、多級錯流萃取、多級逆流萃取。2、影響溶劑萃取的因素：乳化和破乳化、PH的影響、溫度和萃取時間的影響、鹽析作用的影響、溶劑種類、用量及萃取方式的影響。3、破乳方法有：加入表面活性劑、離心、加電解質(zhì)、加熱、吸附法破乳、高壓由破乳、稀釋法、超濾、反應萃取。4、常用的破乳劑有：陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑。二、名詞解釋1、液-液萃?。菏侵赣靡环N溶劑將物質(zhì)從另一種溶劑（如發(fā)酵液）中提取出來的方法，根據(jù)所用溶劑的性質(zhì)不同或萃取機制不同，可將液-液萃取分為多種類型。2、萃?。涸谌軇┹腿≈?，被提取的溶液稱為料液，其中與提取的物質(zhì)稱溶質(zhì)，而用以進行萃取的溶劑稱為萃取劑。料液與萃取劑接觸后，料液中的溶質(zhì)向萃取劑轉(zhuǎn)移的過程稱為萃取，達到萃取平衡后，大部分溶質(zhì)轉(zhuǎn)移到萃取劑中，這種含有溶質(zhì)的萃取劑溶液稱為萃取液，而被萃取出溶質(zhì)以后的料液稱為萃余液。3、反萃取（stripping）：是將萃取液與反萃取劑（含無機酸或堿的水溶液，有時也可以是水）相接觸，使某種被萃入有機相的溶質(zhì)轉(zhuǎn)入水相，可把這種過程看作萃取的逆過程。4、分配定律：即在一定溫度，一定壓力下，某一溶質(zhì)在互不能相溶的兩種溶劑間分配時，達到平衡后，在兩相中的活度之比為一常數(shù)。精選資料，歡迎下載

5、萃取因素：也稱萃取比，其定義為被萃取溶質(zhì)進入萃取相的總量與該溶質(zhì)在萃余相中總量之比，通常以E表示。6、萃取率（percentageextraction）：生產(chǎn)上常用萃取率來表示一種萃取劑對某種溶質(zhì)的萃取能力，計算萃取效果，其公式為：萃取相中溶質(zhì)總量

原始料液中溶質(zhì)總量x100%萃取相中溶質(zhì)總量

原始料液中溶質(zhì)總量x100%= x100%E+17、分離因素：在同一萃取體系內(nèi)兩種溶質(zhì)在同樣條件下分配系數(shù)的比值。、問答1、簡述溶劑萃取法的優(yōu)點。答：①操作可連續(xù)化，反應速度快，生產(chǎn)周期短；②對熱敏物質(zhì)破壞少；③采用多級萃取時，溶質(zhì)濃縮倍數(shù)大、純化度高。2、簡述選擇萃取溶劑應遵守的原則。答：①分配系數(shù)愈大愈好，若分配系數(shù)未知，則可根據(jù)“相似相容”的原則，選擇與藥物結(jié)構(gòu)相近的溶劑；②選擇分離因數(shù)大于1的溶劑；③料液與萃取溶劑的互溶度愈小愈好；④盡量選擇毒性低的溶劑；⑤溶劑的化學穩(wěn)定性要高，腐蝕性低，沸點不宜太高，揮發(fā)性要小，價格便宜，來源方便，便于回收。第五章沉淀法一.填空.固相析出法主要包括鹽板法，有機溶劑沉淀法，等電點沉淀法，結(jié)晶法及其它多種沉淀方法等。.按照一般的習慣，析出物為晶體時稱為結(jié)晶法，析出物為無定形固體則稱為沉淀法。.影響鹽析的因素有：無機鹽的種類、溶質(zhì)（蛋白質(zhì)等）種類的影響、蛋白質(zhì)濃度的影響、溫度的影響、pH的影響。.結(jié)晶包括三個過程：（1）形成過飽和溶液:（2）晶核形成；（3）晶體生長。.影晶體大小的主要因素，歸納起來與過飽和度、溫度、攪拌速度、晶種等直接有關(guān)。.晶體的質(zhì)量主要是指晶體的大小、形狀和蛆度等3個方面二.選擇1、在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析，稱作 （A）A.KS鹽析法 B.B鹽析法C.重復鹽析法 D.分部鹽析法2、當向蛋白質(zhì)純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時，蛋白質(zhì)溶解度 （C）A.增大B.減小C.先增大，后減小 D.先減小，后增大精選資料，歡迎下載TOC\o"1-5"\h\z3、鹽析法與有機溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點是 （B）A.分辨率高 B.變性作用小C.雜質(zhì)易除D.沉淀易分離4、當向蛋白質(zhì)純?nèi)芤褐屑尤胫行喳}時，蛋白質(zhì)溶解度 （C）A.增大B.減小C.先增大，后減小D.先減小，后增大5、鹽析常數(shù)Ks是生物大分子的特征常數(shù)，它與下列哪種因素關(guān)系密切。 （B）A.鹽濃度B.鹽種類C.溶質(zhì)濃度D介質(zhì)pH6、將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體-配基復合物，該復合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，在一定條件下沉淀出來，此方法稱為 （A）A.親和沉淀 B.聚合物沉淀C.金屬離子沉淀D.鹽析沉淀7、將四環(huán)素粗品溶于pH2的水中，用氨水調(diào)pH4.5—4.6,28—30℃保溫，即有四環(huán)素沉淀結(jié)晶析出。此沉淀方法稱為 （B）A.有機溶劑結(jié)晶法B.等電點法 C.透析結(jié)晶法D.鹽析結(jié)晶法8、影響體大小的主要因素與下列哪些因素無關(guān) （D）A.過飽和度 B.溫度 C.攪拌速度 D.飽和度9、下列沉淀試劑不屬于表面活性劑的是 （D）A.CTAB B.CPCC.SDSD.PEG三名詞解釋：.鹽析法：是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數(shù)量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達到純化目的的方法。.Ks鹽析：在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析，稱作Ks鹽析法。Ks鹽析法多用于提取液的前期分離工作。.B鹽析：在一定離子強度下僅改變pH和溫度進行鹽析，稱作B鹽析法。在分離的后期階段，為了求得較好的分辨率，或者為了達到結(jié)晶的目的，有時應用B鹽析法。B鹽析法由于溶質(zhì)溶解度變化緩慢且變化幅度小，沉淀分辨率比KS鹽析法好。4.親和沉淀：利用親和反應原理，將配基與可溶性的載體偶聯(lián)后形成載體-配基復合物（親和沉淀劑），該復合物可選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，在一定條件下沉淀出來。四問答.什么是鹽析作用？鹽析的原理是什么？答：鹽析作用：向蛋白質(zhì)溶液中逐漸加入中性鹽，在高鹽濃度時，蛋白質(zhì)溶解度隨之減小，發(fā)生了鹽析作用。產(chǎn)生鹽析作用的一個原因是由于鹽離子與蛋白質(zhì)表面具相反電性的離子基團結(jié)合，形成離子對，因此精選資料，歡迎下載鹽離子部分中和了蛋白質(zhì)的電性，使蛋白質(zhì)分子之間電排斥作用減弱而能相互靠攏，聚集起來。鹽析作用的另一個原因是由于中性鹽的親水性比蛋白質(zhì)大，鹽離子在水中發(fā)生水化而使蛋白質(zhì)脫去了水化膜，暴露出疏水區(qū)域，由于疏水區(qū)域的相互作用，使其沉淀。.如何選擇鹽析所用中性鹽？（1）鹽析作用要強。一般來說多價陰離子的鹽析作用強，有時多價陽離子反而使鹽析作用降低。（2）鹽析用鹽要有足夠大的溶解度，且溶解度受溫度影響應盡可能小。這樣便于獲得高濃度鹽溶液，有利于操作，尤其是在較低溫度下的操作，不致造成鹽結(jié)晶析出，影響鹽析效果。（3）鹽析用鹽在生物學上是惰性的，不致影響蛋白質(zhì)等生物分子的活性，最好不引入給分離或測定帶來麻煩的雜質(zhì)。（4）來源豐富、經(jīng)濟。.有機溶劑沉淀的原理是什么？答：親水性有機溶劑加入溶液后降低了介質(zhì)的介電常數(shù)，使溶質(zhì)分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀；水溶性有機溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度，壓縮了親水溶質(zhì)分子表面原有水化層的厚度，降低了它的親水性，導致脫水凝集。.有機溶劑沉淀影響沉淀效果的因素有那些？答：（1）有機溶劑種類及用量（2）pH的影響（3）溫度無機鹽的含量（4）某些金屬離子的助沉淀作用（5）樣品濃度第六章吸附分離法（習題）一、填空1、吸附劑按其化學結(jié)構(gòu)可分為兩大類：一類是有機吸附劑，如—活性炭、—淀粉—、大孔吸附樹脂—等；另一類是無機吸附劑，如白陶土、氧化鋁、硅膠 硅藻土等。2、常用的吸附劑有活性炭 、硅膠和白陶土等。3、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑是在樹脂聚合時加入」性致孔劑，待網(wǎng)格骨架固化和鏈結(jié)構(gòu)單元形成后，用溶劑萃取或蒸餾水洗將致孔劑去掉，形成不受外界環(huán)境條件影響的聞隙，其孔徑遠大于2?4nm,可達.100nm，故稱“大孔”。4、大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑按骨架的極性強弱，可分為韭極性、中等極性、極性和強極性吸附劑四類。二、選擇題精選資料，歡迎下載1、用大網(wǎng)格高聚物吸附劑吸附的弱酸性物質(zhì)，一般用下列哪種溶液洗脫A.水B.高鹽C.低pHD.高pH2、“類似物容易吸附類似物”的原則，一般極性吸附劑適宜于從何種溶劑中吸附極性物質(zhì)（B）A.極性溶劑 B.非極性溶劑 C.水D.溶劑3、“類似物容易吸附類似物”的原則，一般非極性吸附劑適宜于從下列何種溶TOC\o"1-5"\h\z劑中吸附非極性物質(zhì)。 （A）A.極性溶劑B.非極性溶劑 C.三氯甲烷 D.溶劑4、下列屬于無機吸附劑的是： （A）A.白陶土B.活性炭C.淀粉D.纖維素5、活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強？ （A）A.水B.甲醇C.乙醇D.三氯甲烷6、關(guān)于大孔樹脂洗脫條件的說法，錯誤的是： （A）A.最常用的是以高級醇、酮或其水溶液解吸。B.對弱酸性物質(zhì)可用堿來解吸。C.對弱堿性物質(zhì)可用酸來解吸。D.如吸附系在高濃度鹽類溶液中進行時，則常常僅用水洗就能解吸下來。三、名詞解釋1、吸附法（adsorptionmethod）：指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質(zhì)或雜質(zhì)吸附于適當?shù)奈絼┥?，利用吸附劑對活性物質(zhì)和雜質(zhì)間吸附能力的差異，使目的物和其它物質(zhì)分離，達到濃縮和提純目的的方法。2、大網(wǎng)格高聚物吸附劑（macroreticularadsorbent）：在合成樹脂時，加入一種惰性組分，它不參與聚合反應，但能和單體互溶，稱為致孔劑。待網(wǎng)絡骨架固化和鏈結(jié)構(gòu)單元形成后，用溶劑萃取或水洗蒸餾的方法將致孔劑去掉，就留下了不受外界條件影響的永久孔隙，其孔徑遠大于2?4nm，可達到100nm甚至1000nm以上，故稱“大孔”。與大孔網(wǎng)狀離子交換樹脂相比，它不含離子交換樹脂的功能團，僅保留了多孔的骨架，其性質(zhì)與活性炭、硅膠等吸附劑相似，稱為大孔網(wǎng)狀聚合物吸附劑。精選資料，歡迎下載四、問答題1、簡述吸附法的定義和特點。吸附法（adsorptionmethod）指利用吸附作用，將樣品中的生物活性物質(zhì)或雜質(zhì)吸附于適當?shù)奈絼┥?，利用吸附劑對活性物質(zhì)和雜質(zhì)間吸附能力的差異，使目的物和其它物質(zhì)分離，達到濃縮和提純目的的方法。吸附法具有下列特點：（1）設備簡單、操作簡便、價廉、安全。（2）少用或不用有機溶劑，吸附與洗脫過程中pH變化小，較少引起生物活性物質(zhì)的變性失活。（3）天然吸附劑（特別是無機吸附劑）的吸附性能和吸附條件較難控制，吸附選擇性差，收率不高，難以連續(xù)操作。2、影響吸附的因素有哪些？（1）吸附劑的特性：吸附現(xiàn)象在界面發(fā)生，因此吸附劑比表面積愈大，吸附量愈多。通過活化的方法也可增加吸附劑的吸附容量。另外還要求吸附劑的機械強度好，吸附速度快（2）吸附物的性質(zhì)：能使表面張力降低的物質(zhì)，易為表面所吸附；一般極性吸附劑易吸附極性物質(zhì)，非極性吸附劑易吸附非極性物質(zhì)；溶質(zhì)從較易溶解的溶劑中被吸附時，吸附量較少；對于同系列物質(zhì)，吸附量的變化是有規(guī)則的；吸附物若能與溶劑形成氫鍵，則吸附物極易溶于溶劑之中。（3）吸附條件：溫度：吸附熱越大，溫度對吸附的影響越大。PH值：溶液的pH值溶液pH值可控制吸附劑或吸附物解離情況，進而影響吸附量，對蛋白質(zhì)或酶類等兩性物質(zhì)，一般在等電點附近吸附量最大。鹽濃度：溶劑的影響：單溶劑與混合溶劑對吸附作用有不同的影響。（4）吸附物濃度與吸附劑用量一般情況下吸附物濃度大時，吸附量也大。第七章凝膠層析一、填空題1、凝膠層析的分離原理有平衡排除理論、擴散分離理論、流動分離理論。這三種分離原理是互相補充的，在通常情況下平衡排除理論起主導作用：擴散分離理論的作用隨流速增加而加強；只有在流速很高時流動分離理論才起作用。精選資料，歡迎下載2、瓊脂糖凝膠的一個特征是分離的分子量范圍非常大，其分離范圍隨著凝膠濃度上升而。降，顆粒強度隨濃度上升而—提高。3、凝膠粒度的大小對分離效果有直接的影響。一般來說，細粒凝膠柱流速低，洗脫峰窄，分辨率—高—，多用于 精制分離等。粗粒凝膠柱流速高，洗脫峰平坦，分辨率低，多用于脫鹽等。4、在作分級分離時，為了提高分辨率，多采用比樣品體積大 25—倍以上的柱體積，25以上的柱比，較 大吸液量、較細粒的凝膠固定相。5、溶質(zhì)通過色譜柱時造成的峰加寬效應包括分子擴散、渦流擴散、流動相中傳質(zhì)阻力、固定相中傳質(zhì)阻力。6、葡聚糖凝膠的孔徑大小取決于交聯(lián)度，其越小，凝膠孔徑越—匕；而瓊脂糖凝膠的孔徑卻依賴于 瓊脂糖濃度。二、選擇題TOC\o"1-5"\h\z1、凝膠層析中，有時溶質(zhì)的Kd>1，其原因是 （B）A.凝膠排斥B.凝膠吸附 C.柱床過長 D.流速過低2、凝膠層析中，有時小分子溶質(zhì)的Kd<1，其原因是 （A）A.水合作用B.凝膠吸附 C.柱床過長 D.流速過低3、在凝膠層析中樣品各組分最先淋出的是 （B）A.分子量最大的B.體積最大的C.分子量最小的D.體積最小的4、為了進一步檢查凝膠柱的質(zhì)量，通常用一種大分子的有色物質(zhì)溶液過柱，常見的檢查物質(zhì)為藍色葡聚糖，下面不屬于它的作用的是 （C）A.觀察柱床有無溝流 B.觀察色帶是否平整C.測量流速 D.測量層析柱的外水體積5、在選用凝膠層析柱時，為了提高分辨率，宜選用的層析柱是 （A）A.粗且長的 B.粗且短的 C.細且長的D.細且短的三、名詞解釋1、全排阻：當具有一定分子量分布的高聚物溶液從柱中通過時，較大的分子完全不能進入顆粒內(nèi)部，只能從顆粒間隙流過，稱“全排阻”。其流經(jīng)體積最小，等于外水體積V。。2、類分離：將分子量極為懸殊的兩類物質(zhì)分開，如蛋白質(zhì)與鹽類，稱作類分離或組分離.選擇凝膠時，應使樣品中大分子組的分子量大于其排阻限，而小分子組的分子量小于滲入限。大分子的分配系數(shù)K=0,小d分子的K=1。d精選資料，歡迎下載

3、分級分離：將分子量相差不大的大分子物質(zhì)加以分離，如分離血清球蛋白與白蛋白，分級分離應盡量使待分離各物質(zhì)的Kd值相差大些，并使分子量分布不在凝膠分離范圍的一側(cè)。4、柱比：層析柱的長度與直徑的比值一般稱作“柱比”。5、操作壓：凝膠層析柱由于進出口之間液位壓力差形成的對凝膠顆粒的壓力稱作“操作壓”。其分子可以自由進出凝膠顆粒，這叫做“全滲入”。其流經(jīng)體積最大，等于外水體積與內(nèi)水體積之和，7、分離度Rs：Rs其分子可以自由進出凝膠顆粒，這叫做“全滲入”。其流經(jīng)體積最大，等于外水體積與內(nèi)水體積之和，7、分離度Rs：Rs2（V-V）V-V el e2=el -e2W1+W2 2%+%V0+V/AV廣不式中V、V——對應于兩個峰的淋出體積；W、ele2W2和Q、02兩個峰寬度和標準偏差。四、問答題1、試述公式Ve=V0+KdVi各字母的物理意義。答：公式VjV/K答：公式VjV/KdVi中七代表被分離組分的流經(jīng)體積V代表外水體積，V,代表內(nèi)水體積。K稱作“排阻系數(shù)”或“分配系數(shù)”，它反映了物質(zhì)分子進入凝膠顆粒的程度。對一定種類規(guī)格的凝膠，物質(zhì)的Kd值為該物質(zhì)的特征常數(shù)。排阻系數(shù):當K=1時，洗脫體積V=V+V.，為全滲入。當K=0時，洗脫體積V=V，為全排阻。0<K<1時，洗脫體積V=V+KV.,為部分滲入。2、利用凝膠層析如何測定蛋白質(zhì)的分子量?答：當具有一定分子量分布的高聚物溶液從柱中通過時，較小的分子在柱中停留時間比大分子停留的時間要長，于是樣品各組分即按分子大小順序而分開，最先淋出的是最大的分子。對于一個特定體系（凝膠柱），待測定物質(zhì)的洗脫體積與分子量的關(guān)系符合公式V=-KlogM+Ce先以3個以上（最好更多些）的已知分子量的標準蛋白過柱，測取各自的七值。以七作縱坐標，10gM作橫坐標制作標準曲線。在同一測定系統(tǒng)中測取未知物質(zhì)的Ve值便可由標準曲線求得分子量。3、凝膠層析的應用主要有哪些？并說明其原理。當具有一定分子量分布的高聚物溶液從柱中通過時，較小的分子在柱中停留時間比大分子停留的時間要長，于是樣品各組分即按分子大小順序而分開，最先淋出的是最大的分子。應用：精選資料，歡迎下載

一、脫鹽：脫鹽用的凝膠多為大粒度的，高交聯(lián)度的凝膠。此時溶液中蛋白質(zhì)等大分子的K=0,鹽類的dK=1。由于交聯(lián)度大，凝膠顆粒的強度較好，加之凝膠粒度大，柱層操作比較便利，流速也高。d、分子量測定：對于一個特定體系（凝膠柱），待測定物質(zhì)的洗脫體積與分子量的關(guān)系符合公式V=-KlogM+C先以3個以上（最好更多些）的已知分子量的標準蛋白過柱，測取各自的V值。以Ve作縱坐標，logM作橫坐標制作標準曲線。在同一測定系統(tǒng)中測取未知物質(zhì)的ve值便可由標準曲線求得分子量。三、分離純化：根據(jù)分子量不同流出先后順序不同，收集單一洗脫峰的物質(zhì)，得以純化。第八章離子交換法一、填空題1、離子交換劑由惰性的不溶性載體、功能基團和平衡離子組成。平衡離子帶正電荷為陽離子交換樹脂，平衡離子帶負電荷稱陰離子交換樹脂。2、常見的離子交換劑有離子交換樹脂，離子交換纖維素，葡聚糖凝膠離子交換劑等。3、離子交換樹脂的基本要求有有盡可能大的交換容量、有良好的交換選擇性—、化學性質(zhì)穩(wěn)定、化學動力學性能好和物理性能好。4、影響離子交換選擇性的因素主要有離子價與離子水合半徑、離子價與離子濃度 交換環(huán)境 樹脂結(jié)構(gòu) 偶極離子排斥等。5、請寫出下列離子交換劑的名稱和類型：CM-C的名稱是羧甲基纖維素，屬于弱酸型陽離子交換纖維素;DEAE-C的名稱是二乙基氨基乙基纖維素，屬于強堿型陰離子交換纖維素：。6、寫出下列離子交換劑類型：732強酸型陽離子交換樹脂，724弱酸型陽離子交換樹脂，717—強堿型陰離子交換樹脂，CM-C陽離子交換纖維素 ,DEAE-C陰離子交換纖維素，PBE94陰離子交換劑。二、選擇題1、用鈉型陽離子交換樹脂處理氨基酸時，吸附量很低，這是因為 （C）A.偶極排斥 B.離子競爭C.解離低D.其它2、在酸性條件下用下列哪種樹脂吸附氨基酸有較大的交換容量 （C）A.羥型陰A.羥型陰B.氯型陰C.氫型陽D.鈉型陽3、在尼柯爾斯基方程式中，K值為離子交換常數(shù)，K>1說明樹脂對交換離子吸引力（）。A.小于平衡離子B.A.小于平衡離子B.大于平衡離子C.等于平衡離子D.其它三、名詞解釋精選資料，歡迎下載1、蛇籠樹脂：由丙烯酸或甲基丙烯酸在季胺型陰離子交換樹脂（如Dowex）中聚合而成的一類樹脂稱蛇籠樹脂。它是一種兩性樹脂，它適宜于從有機物質(zhì)（如甘油）水溶液中吸附鹽類，再生時用水洗，就可將吸著的離子洗下來。TOC\o"1-5"\h\z.1 -L- .1 -L.mZ,.CZ. mZ、 CZ、2、尼柯爾斯基方程式：m11C22=K, 即工=K—L_L -L- -L-mZ2-CZi mZ2 CZ22 1 2 22其中mjm2及q、C2分別代表樹脂上和溶液中的兩種離子的濃度。K值的大小取決于樹脂和交換離子的性質(zhì)，以及交換條件。K>1時說明離子%比離子％對樹脂有較大的吸引力；反之，K<1時樹脂對％的吸引力大于A/3、偶極離子排斥作用：許多生化物質(zhì)都是兩性物質(zhì)。其中有些是偶極離子。因為它們即使凈電荷為零時，正電中心和負電中心并不重疊，遂成偶極。偶極離子在離子交換過程中的行為是很特殊的?，F(xiàn)以氨基酸的離子交換為例。SO-Na++H+NRCCO- SO-H+NRCOO-+Na+3 3 3 3式中由于使用了鈉型樹脂，被吸附氨基酸的竣基所帶的負電荷與樹脂磺酸基之負電荷產(chǎn)生排斥力。這就是所謂偶極離子的排斥作用。因此使樹脂對氨基酸的吸附量大大降低。四、問答題1、簡述離子交換纖維素的特點有哪些？答：離子交換纖維素的特點是：離子交換纖維素為開放的長鏈骨架，大分子物質(zhì)能自由地在其中擴散和交換，親水性強，表面積大，吸易附大分子；交換基團稀疏，對大分子的實際交換容量大；吸附力弱，交換和洗脫條件緩和，不易引起變性；分辨力強，能分離復雜的生物大分子混合物。2、請以CM-C為例說明離子交換纖維素分離純化蛋白質(zhì)時的洗脫方法有哪些？并說出各種方法的洗脫原理。答：無論是升高環(huán)境的pH還是降低pH或是增加離子強度都能將被吸附物質(zhì)洗脫下來?，F(xiàn)以竣甲基纖維素為例加以說明，圖中h2N-p表示蛋白質(zhì)，C表示纖維素。一OH-C-OCH2COO+qN：P」+qO+ I--1 I 1[C-OCH2COOH3N"P H \C」OCH2COOH+H+NUP」NaCl'LCrOCH2COO-Na++居+n4p]+Cl（1）、升高環(huán)境的pH,使蛋白質(zhì)在此pH下失去電荷，從而喪失與CM-C結(jié)合力而被洗脫下來。精選資料，歡迎下載（2）、降低環(huán)境的pH,使CM-C在此pH下不解離，從而不能吸附蛋白質(zhì)而被洗脫下來。（3）、用高濃度的同性離子根據(jù)質(zhì)量作用定律將目的物離子取代下來。3、請以DEAE-C為例說明離子交換纖維素分離純化蛋白質(zhì)時的洗脫方法有哪些？并說出各種方法的洗脫原理。答：無論是升高環(huán)境的pH還是降低pH或是增加離子強度都能將被吸附物質(zhì)洗脫下來。（1）、升高環(huán)境的pH，使DEAE-C在此pH下不解離，從而不能吸附蛋白質(zhì)而被洗脫下來。（2）、降低環(huán)境的pH，使蛋白質(zhì)在此pH下失去電荷，從而喪失與DEAE-C結(jié)合力而被洗脫下來。（3）、用高濃度的同性離子根據(jù)質(zhì)量作用定律將目的物離子取代下來。4、由下圖，利用給出的兩種離子交換劑（E/E2）分離3種蛋白質(zhì)（匕、P2、P3），用箭頭流程圖表示（并指出EjE2的類型）?！辏轂殛庪x子交換劑E2為陽離子交換劑洗滌洗脫 ? 樹脂吸附物—? —匕Ex 洗滌洗脫PH6~7 瓦 ?樹脂吸附物f—R流出液PH9-10 ?流出液R5、下圖為離子交換法應用實例，請?zhí)顚懮a(chǎn)工藝流程中的空格（可選因素：陰離子交換樹脂，陽離子交換樹脂，0.05mol/L氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水）。簡述從“濾液”開始，以后步驟的分離原理？精選資料，歡迎下載

豬血粉 一水解液〔過濾后）答*趕酸液SmoULHClMh …調(diào)pH3.4活性炭90ff調(diào)pH3.4活性炭90ffC2h洗脫開始脫色海液 4過濾除酪氨酸等 稀釋液PH2.5GWH4.5） （玲；喜■干二趾期答：.陽離子交換樹脂，0.05mol/L氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水濾液調(diào)節(jié)到PH2.5時，氨基酸帶正電荷，因此選用陽離子交換樹脂，之后根據(jù)氨基酸等電點的不同，依次用0.05mol/L氨水，0.1mol/L氨水，2mol/L氨水洗脫。酸性氨基酸等電點低，因此用0.05mol/L氨水就可洗脫下來，而堿性氨基酸等電點高，因此需用2mol/L氨水才能將之洗脫下來。第九章親和純化技術(shù)一、填空題1、親和層析洗脫方法有非專一性洗脫，特殊洗脫，專一性洗脫。2、親和力大小除由親和對本身的溷離常數(shù)決定外，還受許多因素的影響，其中包括親和吸附劑—微環(huán)境 載體空間位阻 載體孔徑 配基和配體的濃度 配基結(jié)構(gòu)—等。3、親和層析中常用作分離酶的配基有 酶抑制劑 ，輔酶，底物和底物結(jié)構(gòu)類似物_。4、親和層析中非專一性吸附有離子效應、疏水基團、復合親和力。5、親和過濾指的是將親和層析和膜過濾技術(shù)結(jié)合運用，官包括親和錯流過濾和親和膜分離一兩大方法。二、選擇題1、下面關(guān)于親和層析載體的說法錯誤的是 （B）A.載體必須能充分功能化。B.載體必須有較好的理化穩(wěn)定性和生物親和性，盡量減少非專一性吸附。C.載體必須具有高度的水不溶性和親水性。D.理想的親和層析載體外觀上應為大小均勻的剛性小球。2、制備親和柱時，應首先選用的配基是 （A）精選資料，歡迎下載A.大分子的B.小分子的 C.中等大小的 D.不確定3、親和層析的洗脫過程中，在流動相中加入配基的洗脫方法稱作 （C）A.陰性洗脫 B.劇烈洗脫 C.競爭洗脫 D.非競爭洗脫4、親和層析的洗脫過程中，在流動相中減去配基的洗脫方法稱作 （D）A.陰性洗脫 B.劇烈洗脫 C.正洗脫 D.負洗脫三、名詞解釋1、親和反膠團萃?。ˋffinity-basedresersedmicellarextraction）：是指在反膠團相中除通常的表面活性劑（如AOT）以外，添加另一種親水頭部為目標分子的親和配基的助表面活性劑，通過親和配基與目標分子的親和結(jié)合作用，促進目標產(chǎn)物在反膠團相的分配，提高目標產(chǎn)物的分配系數(shù)和反膠團萃取分離的選擇性。2、親和膜：利用親和配基修飾微濾膜為親和吸附介質(zhì)親和純化目標蛋白質(zhì)，是固定床親和層析的變型。將一張微濾膜比喻為一個固定床，則膜厚即為床層高度.優(yōu)點是傳質(zhì)阻力小，達到吸附平衡的時間短，配基利用率高；壓降小，流速快，設備體積小，配基用量低。3、二次作用親和沉淀（secondary-effectaffinityprecipitation）：利用在物理場（如pH、離子強度、溫度和添加金屬離子等）改變時溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基，制備親和沉淀介質(zhì)。親和介質(zhì)結(jié)合目標分子后，通過改變物理場使介質(zhì)與目標分子共同沉淀的方法成為二次作用親和沉淀。4、親和萃?。豪镁垡叶迹≒EG）/葡聚糖（Dx）或聚乙二醇/無機鹽等雙水相系統(tǒng)萃取分離蛋白質(zhì)等大生物分子，特別是胞內(nèi)酶的雙水相萃取法。利用偶聯(lián)親和配基的PEG為成相聚合物進行目標產(chǎn)物的雙水相萃取，可在親和配基的親和結(jié)合作用下促進目標產(chǎn)物在PEG相（上相）的分配，提高目標產(chǎn)物的分配系數(shù)和選擇性。5、親和吸附劑：由載體及配基偶聯(lián)構(gòu)成，在親和層析中起可逆結(jié)合的特異性物質(zhì)稱為配基（Ligand），與配基結(jié)合的層析介質(zhì)稱為載體（Matrix）。6、負洗脫：在雙底物反應中，與配基互補的酶的親和吸附，如果吸附取決于A物的存在與否，則洗脫液中除去A物時，吸附在配基上的互補分子也會洗脫下來，這種洗脫方法也稱負洗脫。四、問答題1、親和層析的原理是什么？主要特點是什么？答：親和層析的設計和過程大致分為以下三步：1）配基固定化：選擇合適的配基與不溶性的支撐載體偶鏈，或共價結(jié)合成具有特異親和性的分離介質(zhì)；2）吸附樣品：親和層析介質(zhì)選擇性吸附酶或其他生物活性物質(zhì)，雜質(zhì)與層析介質(zhì)間沒有親和作用，故不能被吸附而被洗滌去除；3）樣品解析：選擇適宜的條件使被吸附的親和介質(zhì)上的酶或其他生物活性物質(zhì)解析下柱。精選資料，歡迎下載親和層析技術(shù)的最大優(yōu)點在于，利用它從提取液中經(jīng)過一次簡單的處理便可得到所需的高純度活性物質(zhì)。此外親和層析還有對設備要求不高、操作簡便、適用范圍廣、特異性強、分離速度快、分離效果好、分離條件溫和等優(yōu)點：其主要缺點是親和吸附劑通用性較差，故要分離一種物質(zhì)差不多都得重新制備專用的吸附劑。另外由于洗脫條件較苛刻，須很好地控制洗脫條件，以避免生物活性物質(zhì)的變性失活。2、對親和層析的公式上=1+匕]進行說明。設K=10-7,求[L]VK L 00 LVe為洗脫體積（1分）；v0固定相（柱床）體積（1分）；[L]為固定化配基濃度（1分）；0KL為親和對解離常數(shù)（親和勢）（1分）；只有當阻留值210時，親和層析才是有效（分離）的。1+[L]/K210,將K=10-7代入得：[L]/10-729,所以，[L]29X10-7（2分）。0L L 0 03、何謂“手臂”？其長短與親和層析效果有何聯(lián)系？為什么？答：有時候用小分子物質(zhì)（如酶的輔因子）作為配基直接偶聯(lián)至瓊脂糖凝膠珠粒上制備親和層析介質(zhì)時，盡管配基和酶間的親和力在合適的范圍內(nèi)，但其吸附容量往往是低的。這是由于酶的活性中心常是埋藏在其結(jié)構(gòu)的內(nèi)部，它們與介質(zhì)的空間障礙影響其與親和配基的結(jié)合作用。為了改變這種情況可在載體和配基間插入一個物質(zhì)稱為“手臂”，以消除空間障礙。手臂的長度是有限的，不可太短也不可太長，太短不能起消除空間障礙的作用，太長往往會使非特異性吸附增加。4、從親和沉淀的機理和分離操作的角度出發(fā)，簡述親和沉淀純化技術(shù)的優(yōu)點。答：從親和沉淀的機理和分離操作的角度可以看出，親和沉淀純化技術(shù)具有如下優(yōu)點：1）配基與目標分子的親和結(jié)合作用在自由溶液中進行，無擴散傳質(zhì)阻力，親和結(jié)合速度快；2）親和配基裸露在溶液之中，可更有效的結(jié)合目標分子，即親和沉淀的配基利用率高；3）利用成熟的離心或過濾技術(shù)回收沉淀，易于規(guī)模放大；4）親和沉析法可用于高粘度或含微粒的料液中目標產(chǎn)物的純化，因此可在分離操作的較初期采用，有利于減少分離操作步驟，降低成本。同時，在分離過程的早期階段除去對目標產(chǎn)物有毒的雜質(zhì)（如蛋白酶），有利于提高目標產(chǎn)物質(zhì)量和收率。第十一章膜分離技術(shù)一、填空1微孔濾膜孔徑檢測方法有氣泡壓力法、細菌過濾法、水流量法。2克服濃差極化現(xiàn)象的措施有震動、攪拌、錯流（crossflow）、切流（tangentflow）。精選資料，歡迎下載攪拌或振動式裝置小棒超濾器,淺道系統(tǒng)超濾裝置（中3實驗用超濾器的類型有無攪拌式裝置，攪拌或振動式裝置小棒超濾器,淺道系統(tǒng)超濾裝置（中、選擇題1透析是膜分離技術(shù)的一種，通常利用透析技術(shù)進行 （B）A脫脂B脫鹽C除菌D除熱源2在超濾過程中，主要的推動力是 （C）A.濃度差B