非小細胞肺癌患者EGFR基因檢測完美課課件

非小細胞肺癌患者EGFR基因檢測文檔ppt非小細胞肺癌患者EGFR基因檢測文檔ppt197%的基因突變互相排斥單個突變數(shù)ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11METAMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKrisMG.etal.ASCO2011,Abstract#CRA7506.

97%的基因突變互相排斥單個突變數(shù)ALKAKTBRA23高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖3高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖34中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖4中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖4關(guān)于“驅(qū)動基因”近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因同時突變罕見對已知的靶點，已有很多上市或在研的藥物驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。關(guān)于“驅(qū)動基因”近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)5NSCLC基因檢測的意義基因檢測決定了分子靶向治療2011年我國制定了:中國非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識NSCLC基因檢測的意義基因檢測決定了分子靶向治療6EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進行EGFR基因突變的檢測，國內(nèi)外均推薦EGFR基因突變陽性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢人群不代表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進7EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR突變不同類型療效也不一8EGFR基因突變檢測的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA標本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對34.5%，P<0.001）提示檢測更有必要，決定TKI一線治療的時機EGFR基因突變檢測的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)9全國檢測情況(基康+迪安)全國檢測情況(基康+迪安)10國內(nèi)EGFR基因突變率在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突變約30%，腺癌突變約42.5%，非腺癌約9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者樣品，全部完成檢測，其中108名患者的樣品因DNA質(zhì)量不合格而終止檢測，因此共有1392名患者已出檢測結(jié)果，其中660名患者突變陽性（47%），其中腺癌、腺鱗癌、BAC為52%，鱗癌為14%。國內(nèi)EGFR基因突變率在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突11國內(nèi)EGFR基因突變率國內(nèi)EGFR基因突變率12銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）送檢66份標本,11份無結(jié)果，55份有結(jié)果，檢出率83.33%，不同標本檢出率n有結(jié)果檢出率手術(shù)3030100%淋巴結(jié)活檢66100%氣管鏡13538.5%肺穿11872.7%胸腔鏡11100%胸水55100%合計665583.33%銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）送檢66份標本,11份無結(jié)果，513EGFR突變率55份有結(jié)果的標本中，29份EGFR突變陽性，突變率55.7%EGFR突變率55份有結(jié)果的標本中，29份EGFR突變陽性，14EGFR突變類型n檢出率L858R1448.3%19-del1137.9%L858R+19-del310.3%G719X14.2%合計293.5%EGFR突變類型n檢出率L858R1448.3%19-del15EGFR突變與病理類型突變率腺癌男44.4%(8/18)女68%(17/25)腺鱗癌男33.33%(1/3)女100%（1/1）鱗癌男14.3%(1/7)女50%(1/2)合計55.7%(24/42)EGFR突變與病理類型突變率腺癌男44.4%(8/18)女16用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法2006;29(4):373-9.EGFR基因突變檢測的臨床意義高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖50%(1/2)送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。NSCLC基因檢測的意義胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。2006;119(10):2353-8.胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究33%(1/3)銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性化療能改變EGFR突變狀態(tài)胸膜活檢組織EGFR突變狀況在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）EGFR基因突變檢測的一般原則為使患者盡可能地從最有效的治療中受益，所有NSCLC，只要條件許可，都應(yīng)進行EGFR突變的檢測，特別是肺腺癌。用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法EGFR基因突變檢測的17EGFR基因突變檢測標本腫瘤部位的新鮮組織、活檢組織、手術(shù)切除標本和細胞學(xué)標本均可用于EGFR突變的檢測。理想的標本，需保證200～400個腫瘤細胞（文獻報道大于100個即可）EGFR基因突變檢測標本腫瘤部位的新鮮組織、活檢組織、手術(shù)切18檢測標本冰凍組織外科手術(shù)標本：最好標本，可獲得高質(zhì)量腫瘤DNA，取得可靠檢測結(jié)果---廣泛使用穿刺活檢、支氣管鏡標本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好，獲得較可靠檢測結(jié)果---使用受限檢測標本冰凍組織19檢測標本固定包埋組織外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。---極度受限檢測標本固定包埋組織20檢測標本淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？外周血、癌性胸水、經(jīng)支氣管細針穿刺標本有研究也有陽性結(jié)果外周血標本：血漿中游離DNA（cfDNA）濃度變化很大（10~1200ng/ml）,cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡產(chǎn)生，腫瘤釋放的cfDNA在總cfDNA中的含量不穩(wěn)定（3%~93%）胸水可以做——前景很好檢測標本淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原21標本的處理新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg（約米粒大小，盡量提供所有穿刺樣本），經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈。取癌組織的中心位置組織塊，切至厚度在0.5cm以下，浸沒于75～100%的乙醇中60分鐘以上；可在4℃冰箱暫時保存。送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。標本的處理新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）22標本的處理癌性胸水脫落細胞盡量收集更多胸水，離心后去掉上清，沉淀物必須>1毫升。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運要求，可付運前可離心后倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保3天內(nèi)到達。標本的處理癌性胸水脫落細胞23EGFR檢測方法目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）EGFR檢測方法目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因24EGFR檢測方法測序法ARMS法敏感度10~30%(變異)1~0.1%(變異)發(fā)現(xiàn)突變已知和未知已知石蠟包埋組織成功率低高假陽性（交叉污染）多少假陰性多少檢測流程復(fù)雜漫長，污染多簡單快速儀器成本高低試劑成本低略高EGFR檢測方法測序法ARMS法敏感度10~30%(變異)125EGFR檢測方法北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC直接測序法中24例無結(jié)果，ARMS法均有結(jié)果，且16例檢測到變異中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）有結(jié)果變異率測序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）EGFR檢測方法北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC26國內(nèi)EGFR基因突變率支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。優(yōu)勢人群不代表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。2006;119(10):2353-8.胸膜活檢組織EGFR突變狀況北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC理想的標本，需保證200～400個腫瘤細胞（文獻報道大于100個即可）2006;29(4):373-9.送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）BrJCancer.在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；2006;29(4):373-9.胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究EGFR基因突變檢測的臨床意義2006;29(4):373-9.

關(guān)于胸水EGFR突變的檢測國內(nèi)EGFR基因突變率27CancerSci.2006;97(7):642-8.IntJCancer.2006;119(10):2353-8.ChangGungMedJ.2006;29(4):373-9.BrJCancer.2006;95(10):1390-5.JCancerResClinOncol.2010;136(9):1341-7.國內(nèi)外胸水標本EGFR檢測的研究作者國家/地區(qū)病例數(shù)EGFR突變率（%）KimuraH日本2433%SohJ日本6126%HungMS臺灣2941%KimuraH日本4325.6%JianG中國3228.1%CancerSci.2006;97(7):642-8.國28用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法用胸水中細胞及無細胞液均可檢測EGFR突變，且檢出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本檢測）數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結(jié)論用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法29胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標本及相應(yīng)的胸膜轉(zhuǎn)移病灶組織，共35對樣本。胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移30研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進行胸腔鏡檢查術(shù)鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集31研究步驟胸腔積液樣本采集每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。研究步驟胸腔積液樣本采集32胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變突變率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸煙史101100.007無吸煙史251664胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變突變率%P男性33胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較

胸膜組織EGFR突變胸液沉淀EGFR突變+-合計+12416-2810合計141226符合率為73.1%胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR34胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計+14216-31619合計171835符合率為85.7%胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR突35胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較胸液沉淀EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計+12113-4913合計161026符合率為80.8%胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較胸液沉淀EGFR突36外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存?；熌芨淖僂GFR突變狀態(tài)支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究國內(nèi)EGFR基因突變率在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；胸膜活檢組織EGFR突變狀況每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存2006;119(10):2353-8.國內(nèi)EGFR基因突變率每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；2006;29(4):373-9.2006;119(10):2353-8.IntJCancer.淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？BrJCancer.驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。METAMP(3)關(guān)于胸水EGFR突變的檢測中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。用胸水中細胞及無細胞液均可檢測EGFR突變，且檢出率基本相同97%的基因突變互相排斥鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊IntJCancer.每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；33%(1/3)中國非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）EGFR檢測方法送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。國內(nèi)EGFR基因突變率每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。55份有結(jié)果的標本中，29份EGFR突變陽性，突變率55.高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖提示檢測更有必要，決定TKI一線治療的時機鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊100%（1/1）基因檢測決定了分子靶向治療7%（58/82例）ChangGungMedJ.METAMP(3)外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；33%，不同標本檢出率97%的基因突變互相排斥68%(17/25)ChangGungMedJ.近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；胸水可以做——前景很好關(guān)于胸水EGFR突變的檢測送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）BrJCancer.全國檢測情況(基康+迪安)2006;119(10):2353-8.目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)2006;29(4):373-9.中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）ChangGungMedJ.在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較關(guān)于胸水EGFR突變的檢測淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？2006;29(4):373-9.國內(nèi)外胸水標本EGFR檢測的研究IntJCancer.EGFR基因突變檢測的臨床意義驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。2011年我國制定了:謝謝觀看！外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得37非小細胞肺癌患者EGFR基因檢測文檔ppt非小細胞肺癌患者EGFR基因檢測文檔ppt3897%的基因突變互相排斥單個突變數(shù)ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11METAMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKrisMG.etal.ASCO2011,Abstract#CRA7506.

97%的基因突變互相排斥單個突變數(shù)ALKAKTBRA3940高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖3高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖4041中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖4中國人肺腺癌各基因構(gòu)成比圖41關(guān)于“驅(qū)動基因”近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)雙基因同時突變罕見對已知的靶點，已有很多上市或在研的藥物驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。關(guān)于“驅(qū)動基因”近50%NSCLC驅(qū)動基因已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)42NSCLC基因檢測的意義基因檢測決定了分子靶向治療2011年我國制定了:中國非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變檢測專家共識NSCLC基因檢測的意義基因檢測決定了分子靶向治療43EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進行EGFR基因突變的檢測，國內(nèi)外均推薦EGFR基因突變陽性的NSCLC給予EGFR-TKI一線治療優(yōu)勢人群不代表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR-TKI一線治療必須進44EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性EGFR基因突變檢測的臨床意義EGFR突變不同類型療效也不一45EGFR基因突變檢測的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)264例一線化療的Шb~IV期NSCLC患者的血DNA標本，EGFR突變率在化療后顯著降低（23.1%對34.5%，P<0.001）提示檢測更有必要，決定TKI一線治療的時機EGFR基因突變檢測的臨床意義化療能改變EGFR突變狀態(tài)46全國檢測情況(基康+迪安)全國檢測情況(基康+迪安)47國內(nèi)EGFR基因突變率在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突變約30%，腺癌突變約42.5%，非腺癌約9.5%。2012年基康公司共收到1500名患者樣品，全部完成檢測，其中108名患者的樣品因DNA質(zhì)量不合格而終止檢測，因此共有1392名患者已出檢測結(jié)果，其中660名患者突變陽性（47%），其中腺癌、腺鱗癌、BAC為52%，鱗癌為14%。國內(nèi)EGFR基因突變率在我國未經(jīng)選擇的NSCLC中EGFR突48國內(nèi)EGFR基因突變率國內(nèi)EGFR基因突變率49銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）送檢66份標本,11份無結(jié)果，55份有結(jié)果，檢出率83.33%，不同標本檢出率n有結(jié)果檢出率手術(shù)3030100%淋巴結(jié)活檢66100%氣管鏡13538.5%肺穿11872.7%胸腔鏡11100%胸水55100%合計665583.33%銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）送檢66份標本,11份無結(jié)果，550EGFR突變率55份有結(jié)果的標本中，29份EGFR突變陽性，突變率55.7%EGFR突變率55份有結(jié)果的標本中，29份EGFR突變陽性，51EGFR突變類型n檢出率L858R1448.3%19-del1137.9%L858R+19-del310.3%G719X14.2%合計293.5%EGFR突變類型n檢出率L858R1448.3%19-del52EGFR突變與病理類型突變率腺癌男44.4%(8/18)女68%(17/25)腺鱗癌男33.33%(1/3)女100%（1/1）鱗癌男14.3%(1/7)女50%(1/2)合計55.7%(24/42)EGFR突變與病理類型突變率腺癌男44.4%(8/18)女53用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法2006;29(4):373-9.EGFR基因突變檢測的臨床意義高加索人腺癌各基因構(gòu)成比圖50%(1/2)送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。NSCLC基因檢測的意義胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。2006;119(10):2353-8.胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究33%(1/3)銅陵檢測結(jié)果（ARMS法）EGFR突變不同類型療效也不一樣，19-del較L858R療效好,檢測的必要性化療能改變EGFR突變狀態(tài)胸膜活檢組織EGFR突變狀況在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）EGFR基因突變檢測的一般原則為使患者盡可能地從最有效的治療中受益，所有NSCLC，只要條件許可，都應(yīng)進行EGFR突變的檢測，特別是肺腺癌。用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法EGFR基因突變檢測的54EGFR基因突變檢測標本腫瘤部位的新鮮組織、活檢組織、手術(shù)切除標本和細胞學(xué)標本均可用于EGFR突變的檢測。理想的標本，需保證200～400個腫瘤細胞（文獻報道大于100個即可）EGFR基因突變檢測標本腫瘤部位的新鮮組織、活檢組織、手術(shù)切55檢測標本冰凍組織外科手術(shù)標本：最好標本，可獲得高質(zhì)量腫瘤DNA，取得可靠檢測結(jié)果---廣泛使用穿刺活檢、支氣管鏡標本：量少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好，獲得較可靠檢測結(jié)果---使用受限檢測標本冰凍組織56檢測標本固定包埋組織外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。---極度受限檢測標本固定包埋組織57檢測標本淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原發(fā)灶中EGFR狀態(tài)？外周血、癌性胸水、經(jīng)支氣管細針穿刺標本有研究也有陽性結(jié)果外周血標本：血漿中游離DNA（cfDNA）濃度變化很大（10~1200ng/ml）,cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡產(chǎn)生，腫瘤釋放的cfDNA在總cfDNA中的含量不穩(wěn)定（3%~93%）胸水可以做——前景很好檢測標本淋巴結(jié)標本也可——淋巴結(jié)標本中EGFR突變能否反映原58標本的處理新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）含有腫瘤組織50%以上；重量≥10ｍg（約米粒大小，盡量提供所有穿刺樣本），經(jīng)PBS或生理鹽水沖洗干凈。取癌組織的中心位置組織塊，切至厚度在0.5cm以下，浸沒于75～100%的乙醇中60分鐘以上；可在4℃冰箱暫時保存。送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。標本的處理新鮮組織（手術(shù)、穿刺、支纖鏡下活檢樣本等）59標本的處理癌性胸水脫落細胞盡量收集更多胸水，離心后去掉上清，沉淀物必須>1毫升。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。為符合托運要求，可付運前可離心后倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保3天內(nèi)到達。標本的處理癌性胸水脫落細胞60EGFR檢測方法目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）EGFR檢測方法目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因61EGFR檢測方法測序法ARMS法敏感度10~30%(變異)1~0.1%(變異)發(fā)現(xiàn)突變已知和未知已知石蠟包埋組織成功率低高假陽性（交叉污染）多少假陰性多少檢測流程復(fù)雜漫長，污染多簡單快速儀器成本高低試劑成本低略高EGFR檢測方法測序法ARMS法敏感度10~30%(變異)162EGFR檢測方法北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC直接測序法中24例無結(jié)果，ARMS法均有結(jié)果，且16例檢測到變異中華病理學(xué)雜志，2008,37（5）有結(jié)果變異率測序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）EGFR檢測方法北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC63國內(nèi)EGFR基因突變率支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。優(yōu)勢人群不代表個體：盡管在女性、亞裔、不吸煙或少吸煙、腺癌EGFR基因突變發(fā)生頻率較高，但在鱗癌、腺鱗癌，甚至SCLC中也可檢測到EGFR基因突變。驅(qū)動基因突變狀態(tài)與人種、性別、病理類型、吸煙狀況等有關(guān)，不同類型用藥不同。2006;119(10):2353-8.胸膜活檢組織EGFR突變狀況北京協(xié)和張靜報道：82例NSCLC理想的標本，需保證200～400個腫瘤細胞（文獻報道大于100個即可）2006;29(4):373-9.送檢前可倒掉試管內(nèi)的乙醇，倒入所提供的標準試管，擰緊蓋子，常溫運輸，確保樣本在3天內(nèi)到達。如需長途運輸，加入乙醇浸泡60分鐘以上。目前公認有兩種：測序法和ARMS法（等位基因特異PCR+熒光探針）BrJCancer.在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；2006;29(4):373-9.胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究EGFR基因突變檢測的臨床意義2006;29(4):373-9.

關(guān)于胸水EGFR突變的檢測國內(nèi)EGFR基因突變率64CancerSci.2006;97(7):642-8.IntJCancer.2006;119(10):2353-8.ChangGungMedJ.2006;29(4):373-9.BrJCancer.2006;95(10):1390-5.JCancerResClinOncol.2010;136(9):1341-7.國內(nèi)外胸水標本EGFR檢測的研究作者國家/地區(qū)病例數(shù)EGFR突變率（%）KimuraH日本2433%SohJ日本6126%HungMS臺灣2941%KimuraH日本4325.6%JianG中國3228.1%CancerSci.2006;97(7):642-8.國65用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法用胸水中細胞及無細胞液均可檢測EGFR突變，且檢出率基本相同目前缺少胸水與腫瘤組織直接對比（配對樣本檢測）數(shù)據(jù)，故對其敏感度與特異性尚無結(jié)論用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法66胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變檢測的一致性，從而判斷當存在胸膜轉(zhuǎn)移灶時，胸液EGFR基因突變狀態(tài)檢測的價值。收集2011年4月-2012年12月間就診于上海長海醫(yī)院呼吸科符合入組條件患者的胸液標本及相應(yīng)的胸膜轉(zhuǎn)移病灶組織，共35對樣本。胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究本研究的目的：探索胸腔積液與胸膜轉(zhuǎn)移67研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集電子胸腔鏡在局麻下進行胸腔鏡檢查術(shù)鏡下見病灶后以活檢4-6塊組織，10%中性福爾馬林固定，后包埋成蠟塊每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存研究步驟胸膜轉(zhuǎn)移灶樣本采集68研究步驟胸腔積液樣本采集每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存。研究步驟胸腔積液樣本采集69胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變突變率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸煙史101100.007無吸煙史251664胸膜活檢組織EGFR突變狀況病人數(shù)EGFR突變突變率%P男性70胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較

胸膜組織EGFR突變胸液沉淀EGFR突變+-合計+12416-2810合計141226符合率為73.1%胸液沉淀與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR71胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計+14216-31619合計171835符合率為85.7%胸液上清與相應(yīng)胸膜轉(zhuǎn)移灶EGFR突變的比較胸膜組織EGFR突72胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較胸液沉淀EGFR突變胸液上清EGFR突變+-合計+12113-4913合計161026符合率為80.8%胸液上清與相應(yīng)沉淀EGFR突變的比較胸液沉淀EGFR突73外科手術(shù)標本：可得足量腫瘤DNA，雖然DNA片段化，但仍獲得可靠檢測結(jié)果---使用受限用胸水檢測腫瘤EGFR突變需要敏感方法支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存?；熌芨淖僂GFR突變狀態(tài)支氣管鏡、穿刺活檢標本：可得腫瘤DNA量少且片段化，獲得較可靠檢測結(jié)果，有時DNA量少。胸膜轉(zhuǎn)移和胸水的對比研究國內(nèi)EGFR基因突變率在去除上清液后，將剩余沉淀物室溫1000g轉(zhuǎn)速離心10min，包裹細胞沉淀，常規(guī)固定、包埋并切片（具體同胸膜轉(zhuǎn)移灶標本），為待檢測的胸液沉淀；胸膜活檢組織EGFR突變狀況每例蠟塊切取10-12片5μm厚連續(xù)切片，切片在37℃烘箱內(nèi)烤片3h后常溫保存2006;119(10):2353-8.國內(nèi)EGFR基因突變率每例患者同時收集胸水100-200ml，常溫靜置30min后取上清15ml，-80℃保存，為待檢測的胸液上清；2006;29(4):373-9.2006