淄職畢業(yè)論文哌拉西林和他唑巴坦的含量測定

淄博職業(yè)學(xué)院畢業(yè)論文-9-摘要應(yīng)用反相高效液相色譜法同時(shí)測定哌拉西林和他唑巴坦的含量。方法：以咖啡因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，uBondapakC18為固定相。甲醇-水(34.5:65.5)為流動相，檢測波長為220nm流速為1.0ml/min。結(jié)果:哌拉西林的線性范圍為40～200ug/ml（r=0.9996，n=6)，他唑巴坦的線性范圍為5.0～25.0ug/ml(r=0.9991，n=6)，平均回收率RSD(n=5)為哌拉西林(100.2±0.61)%，他唑巴坦唑(99.03±0.90)%。結(jié)論：本法簡便、快速、準(zhǔn)確。關(guān)鍵詞：哌拉西林；他唑巴坦；含量測定引言哌拉西林(piperacillin)是廣譜高效半合成青霉素，已臨床使用多年，對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有良好的抗菌活性，但對多種細(xì)菌耐藥株產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定；他唑巴坦(tazobactam)是新一代不可逆競爭性β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，其抑制作用優(yōu)于克拉維酸、舒巴坦．他唑巴坦通過抑制內(nèi)酰胺酶使哌拉西林對眾多產(chǎn)酶革蘭氏陽性菌、陰性菌和厭氧桿菌抗菌作用增強(qiáng)，抗菌譜寬，較已臨床應(yīng)用多年的舒巴坦/氨芐西林，克拉維酸/阿莫西林等具更廣的抗菌譜和適應(yīng)性，兩藥制成復(fù)方制劑的抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)。國內(nèi)研究測定哌拉西林含量的方法較多，有旋光法[1]、高效液相色譜法[2.3]等。本文應(yīng)用反相高效液相色譜法，建立一種內(nèi)標(biāo)法同時(shí)測定哌拉西林和他唑巴坦制劑中兩組分含量的方法。1儀器和試劑1.1儀器Waters高效液相色譜儀，Waters510高壓泵、Waters484紫外檢測器、U6K進(jìn)樣器(美國Waters公司)；WDL-95工作站(科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所、國家色譜研究分析中心)；uBondapakC18色譜拄(大連依利特科技儀器有限公司)；Mil1i-QLaBo小型純水機(jī)(Millipore公司)；765MC紫外分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)。1.2試劑哌拉西林對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量91.3%)；他唑巴坦對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量96.42%)；咖啡因?qū)φ掌?上海融禾醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司)；甲醇(色譜純，天津四友化工有限公司)；注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉（齊魯天和惠世制藥有限公司)；四丁基溴化銨(分析純)。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：uBondapakC18(300mm×40mm)；流動相：甲醇-水(每1000ml水中含濃度5.0mmol/L四丁基溴化銨27.3ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH至5.0±0.1(34.5:65.5)；內(nèi)標(biāo)：咖啡因；檢測波長：220nm；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫。2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2.2.1貯備液的制備：取哌拉西林對照品約50mg和他唑巴坦對照品約50mg，精密稱定，分別置50ml和500ml容量瓶中。用甲醇溶解后加超純水稀釋至刻度，混勻，得哌拉西林和他唑巴坦的濃度分別約為1000ug/ml和100ug/ml的貯備液。取咖啡因?qū)φ掌?5mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，用熱水溶解后加超純水稀釋至刻度，混勻，得濃度為150ug/ml的內(nèi)標(biāo)貯備液。2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取哌拉西林貯備液0.4、0.6、0.8、1.2、1.6、2.0ml和他唑巴坦貯備液0.5、0.75、1.0，1.5、2.0、2.5ml于10ml容量瓶中．各加入1.0ml咖啡因溶液，加超純水稀釋至刻度，混勻。配成的濃度分別為哌拉西林40、60、80、120、160、200ug/ml，他唑巴坦5、7．5、10、15、20、25ug/ml；內(nèi)標(biāo)濃度為15ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣量l0ul，以組分峰與內(nèi)標(biāo)峰面積比為R，相應(yīng)的組分濃度為C．得回歸方程：哌拉西林：C：38.5010R-7.7387，r-0.9996；他唑巴坦C：66.9643R-4.2188，r-0.9991。2.3精密度試驗(yàn)取注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉樣品約120mg，精密稱定，置100ml容量瓶中，加超純水至刻度，混勻。精密吸取樣品溶掖lml置l0ml容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)液1.0ml，加超純水至刻度，經(jīng)微孔濾膜過濾后取10ul濾液進(jìn)樣。連續(xù)測定5次，計(jì)算其精密度，得結(jié)果：哌拉西林RSD為0.60%．他唑巴坦RSD為0.65%。2.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取上述樣品溶液在室溫下放置0、2、4、8、12h后分別測定含量，并分別于1、2、3、4、5d后測定含量結(jié)果顯示：1d后哌拉西林含量為99.27%，他唑巴坦含量為99.83%；5d后哌拉西林降為82.22%，他唑巴坦降為92.05%。哌拉西林和他唑巴坦的日內(nèi)RSD分別為0.79%和1.8%，日間RSD為9.3%和3.6%：兩者在ld內(nèi)穩(wěn)定。2.5加樣回收試驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品粉末約50mg。加精密稱定的哌拉西林和他唑巴坦對照品適量，配成高、中、低3種濃度的試液，分別為哌拉西林50、65、80ug/ml，他唑巴坦15、20、25ug/ml。按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法測定兩組分含量，計(jì)算回收率：按《中國藥典》[5]方法測定樣品中哌拉西林的加樣回收率，并對結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果見表1。 表1內(nèi)標(biāo)法與CHP外標(biāo)法加樣回收試驗(yàn)對比(n=5)藥物濃度內(nèi)標(biāo)法CHP法PH值X（%）RSD(%)X（%）RSD(%)哌拉西林低99.900.1099.401.5＞0.05中100.90.7299.920.58＞0.05高99.840.27100.31.2＞0.05他唑巴坦低99.360.46中98.450.44高99.680.872.6樣品含量測定取同一批號注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉5瓶，測定平均裝量。精密稱取樣品3份，分別置100ml容量瓶中，配成約含他唑巴坦12ug/ml、哌拉西林96ug/ml的溶液，經(jīng)過濾后，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作，計(jì)算其濃度。按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的測定方法[4]和《中國藥典》[5]方法對樣品進(jìn)行測定，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表2。表2注射用哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉含量測定(n=3)批號藥物內(nèi)標(biāo)法產(chǎn)品方法CHP法P值※含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)含量（%）RSD(%)081024301哌102.51.999.920.41101.60.87＞0.05他98.032.099.880.38＞0.05081024401哌101.10.50102.50.84100.00.26＞0.05他98.260.2197.061.3＞0.05081024501哌100.40.35101.40.7598.530.87＞0.05他98.130.2198.060.94＞0.05注：哌：哌拉西林，他：他唑巴坦；※P值是產(chǎn)品方法和《中國藥典》方法分別與內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行比較。3討論3.1pH的選擇有文獻(xiàn)報(bào)道，在pH4.0條件下可同時(shí)測定哌拉西林和他唑巴坦的含量，但在實(shí)驗(yàn)測定時(shí)發(fā)現(xiàn)，在pH4.0條件下哌拉西林保留時(shí)間長且峰形寬，隨著流動相pH值的升高，哌拉西林的保留時(shí)間變短，峰形變窄，當(dāng)pH5.0±0.1時(shí)，能使它與內(nèi)標(biāo)分離良好且保留時(shí)間短，峰形對稱，哌拉西林和他唑巴坦兩峰高的比例合適。3.2流動相的選擇本方法采用甲醇-水作為流動相，比用乙腈【5】作為流動相安全且經(jīng)濟(jì)，配制方法簡單、方便。水相中加入四丁基溴化銨反相離子，可改善他唑巴坦的峰形，減少拖尾；哌拉西林對甲醇量的變化靈敏，隨著甲醇量的增加，峰形將變窄，保留時(shí)間變短。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)測定，得到合適的流動相配比為甲醇:水-34.5:65.5，此時(shí)各峰峰形好，分析時(shí)間短(在8min內(nèi)完成)。3.3內(nèi)標(biāo)的選擇分別對咖啡因和與他唑巴坦結(jié)構(gòu)相近的舒巴坦進(jìn)行考察，在不同色譜條件下進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)舒巴坦與他唑巴坦不能完全分離，而咖啡因能與各峰分離良好。且咖啡因穩(wěn)定性好，可長時(shí)間放置，在同一色譜條件下峰形穩(wěn)定。3.4波長的選擇經(jīng)紫外掃描得哌拉西林最大吸收約在230nm，他唑巴坦的最大吸收約在210nm。為提高靈敏度且減少雜質(zhì)峰的影響．檢測波長應(yīng)為220nm。3.5穩(wěn)定性樣品在一天內(nèi)穩(wěn)定，他唑巴坦穩(wěn)定性良好，但哌拉西林五天后含量降為82.22%。建議樣品的測定最好在一天內(nèi)完成。3.6方法比較按產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的測定方法，在相同固定相下，以甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨溶液(450:535:15，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5)為流動相，檢測波長為220nm，對相同樣品進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，他唑巴坦前有一不完全分離的雜峰,影響計(jì)算結(jié)果，而且哌拉西林保留時(shí)間長，兩組分的檢測靈敏度低。含量測定方法因《中國藥典》、《美國藥典》、《英國藥典》均只收載了哌拉西林的測量測定方法，沒有他唑巴坦測量測定方法，因此只作哌拉西林的對照。本方法得到的結(jié)果與《中國藥典》方法、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)方法相比無明顯差異，但能同時(shí)測定極性相差較大的哌拉西林和他唑巴坦兩組分的含量，而且檢測靈敏度高，操作簡便、準(zhǔn)確，分析時(shí)間短。參考文獻(xiàn)[1]黃老金.旋光法測定注射用哌拉西林鈉的含量[J]．上海醫(yī)藥，1997，(1)35.[2]袁耀佐，胡昌勤，金少鴻.他唑巴坦及其制劑注射用哌拉西林鈉/他唑坦鈉的HPLC含量測定方法的建立[J]．藥物分析雜志，1999，19(4)：256.[3]TsukamotoT，UshioT．Determinationof(2S，3S，5R)-3-methyl-7-oxo-3-(1H-1,2,3-triazo-1-ylreeky)-4-tkia-1-azobicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylicacid4,4-deoxide(YTR一830H)andpiperacillininpharmaceuticalpreparationsbybigh-performanceliquidchromatographv[J]．Chromatogr.A、1994，678(1)：69.[4]中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局試行標(biāo)準(zhǔn)[S]．WS-198(X-170)-99(1).[5]中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(二部)[S]．2000年版．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000，470.謝辭在這里我首先要感謝的是我的指導(dǎo)老師，本論文是在老師的親切關(guān)懷和耐心指導(dǎo)下完成的。論文成稿，得到了老師的熱情鼓勵(lì)和悉心指導(dǎo)，凝聚了恩師心血。她嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，深深地感染和激勵(lì)著我，使我受益匪淺。老師不僅在學(xué)業(yè)上給我以精心指導(dǎo)，同時(shí)還在生活上給我以無微不至的關(guān)懷，在此謹(jǐn)向老師致以誠摯的謝意和崇高的敬意。在實(shí)習(xí)過程中，得到上司的悉心指導(dǎo)和無私幫助，同時(shí)還