關(guān)于骨質(zhì)增生的小鼠實驗

白馬寺消痛貼化瘀消炎作用的實驗研究山東中醫(yī)藥大學(xué)2013-01-30骨質(zhì)增生與白馬寺消痛貼骨質(zhì)增生癥又稱骨刺、骨關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)退行性病變，屬于祖國醫(yī)學(xué)“痹證”的范疇，為中老年人的常見病、多發(fā)病，近年來發(fā)病率呈上升趨勢。其機理除神經(jīng)根機械性受壓外，還與血淤、痰濕等密切相關(guān)。扆志德認為骨質(zhì)增生多由腎虛、痰阻或血淤所致，治療應(yīng)重在祛痰通絡(luò)、活血化淤，兼以補腎軟堅。白馬寺消痛貼具有消炎、祛風(fēng)散寒、疏通血脈、祛除血淤之功效，臨床可用于治療頸椎、腰椎骨質(zhì)增生。且該袪痛膏為軟膏劑，可以避免肝臟的“首過效應(yīng)”和胃腸道的破壞效應(yīng)，降低藥物的毒性和副作用，具有給藥方便的優(yōu)點。為評價該藥的治療作用，本實驗從抗炎和活血化淤兩方面對白馬寺消痛貼進行了以下主要藥效學(xué)實驗研究。材料、藥物與儀器材料實驗動物昆明種小鼠，體重（20g±2）g,大鼠，體重(200±20)g，均由山東大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號分別為：魯動質(zhì)字D20021023號、D20021024號。藥物與試劑白馬寺消痛貼，北京濟德漢方國際中醫(yī)產(chǎn)品研究院研發(fā)；阿司匹林腸溶片，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：03051912；硫化鈉，濟寧市化工研究所生產(chǎn)，批號：970609；冰醋酸（分析純），淄博化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號：980715；伊文思藍，F(xiàn)luka進口分裝，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝，批號：801102；瓊脂，廣州醫(yī)藥站試劑公司生產(chǎn)，批號：910817；巴豆油致炎液，自配；蛋清，自配。儀器:GB3031千電子天平，瑞士梅特勒公司制造；T1000型電子天平，美國雙杰兄弟集團有限公司常熟市雙杰測試儀器廠制造；DDL-5型低速冷凍離心機，上海安亭科學(xué)儀器廠制造；WJF2100型可見分光光度儀，外商獨資上海合利有限公司制造；FASCO-3010型全自動血流變快測儀，重慶大學(xué)維多生物工程研究所生產(chǎn)。方法與結(jié)果抗炎作用白馬寺消痛貼對巴豆油所致小鼠耳廓腫脹的影響小鼠50只，雄性，體重（20±2）g，小鼠頸部、腰部用8%硫化鈉飽和溶液脫毛，脫毛面積：頸部約1.2cm*1cm，腰部約2.0cm*1.5cm。次日根據(jù)體重將小鼠隨機分為正常對照組、阿司匹林組、白馬寺消痛貼大、中、小劑量組，共5組。正常對照組在頸部、腰部脫毛區(qū)涂抹白馬寺消痛貼賦形劑，阿司匹林組0.2g/kg灌胃給藥，白馬寺消痛貼組5,10,20g/kg在脫毛區(qū)涂抹藥物后，用紗布、膠布固定。1次/d，連續(xù)8d。末次給藥后1h，用微量移液器，將2%巴豆油致炎液50位l涂在小鼠左耳前后兩面，右耳作空白對照，4h后脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱重，以左耳重=右耳重作為腫脹度。比較給藥組和正常對照組腫脹度的差異，并按公式（左耳重=右耳重）:右耳重計算出各給藥組抑制腫脹率。結(jié)果說明，白馬寺消痛貼能明顯對抗巴豆油所致小鼠耳腫脹，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，給藥組耳廓腫脹度明顯低于正常對照組，且藥物的腫脹抑制率與劑量成依賴性關(guān)系。白馬寺消痛貼對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響小鼠50只，雌雄各半，體重（20±2）g，小鼠頸部、腰部脫毛，脫毛面積：頸部約1.2cm*1cm，腰部約2cm*1.5cm。次日根據(jù)體重將小鼠隨機分為正常對照組、阿司匹林組、白馬寺消痛貼大、中、小劑量組，共5組。正常對照組在頸部、腰部脫毛區(qū)涂抹白馬寺消痛貼賦形劑，阿司匹林組按0.2g/kg劑量灌胃給藥，白馬寺消痛貼5,10,20g/kg組在脫毛區(qū)涂抹藥物后，用紗布、膠布固定。1次/d，連續(xù)8d，末次給藥1h后，尾靜脈注射0.5%伊文思藍生理鹽水液0.1ml/10g，立即腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/只。20min后脫臼處死小鼠，剪開腹部皮膚，注入生理鹽水5ml，輕揉腹部約1min，抽出洗滌液，3000r/min,離心15min，在590nm處測定吸收度（OD值），評價藥物對毛細血管通透性的影響。白馬寺消痛貼對蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響wistar大鼠50只，雌雄各半，體重（200±20）g，頸部、腰部用8%硫化鈉飽和溶液脫毛，脫毛面積：頸部約3cm*2.5cm，腰部約8.5cm*6.0cm。脫毛24h后根據(jù)體重將大鼠隨機分為正常對照組，阿司匹林組0.25g/kg，白馬寺消痛貼4,8,16g/kg組。阿司匹林組灌胃給藥，正常對照組、白馬寺消痛貼組分別在頸部、腰部脫毛部位涂抹賦形劑和受試物，并用紗布、膠布固定。1次/d，連續(xù)7d，第8天，用玻璃容器法測定每鼠右后肢正常足跖容積，用記號筆在大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)周圍做一標記，將大鼠右后肢浸入容器，使標記與液面重疊，多余液體自容器內(nèi)溢出。取出大鼠后肢，可見玻璃容器中液面下降，其下降容積即為足跖容積。測量正常足跖容積后，各組大鼠給藥，藥后1h，分別在大鼠右后肢足跖皮下注射100%蛋清0.1ml/只致炎。分別在致炎后1,2,4,6h各測一次足跖容積，記錄結(jié)果，并計算腫脹率%。白馬寺消痛貼對瓊脂所致大鼠肉芽腫的影響大鼠50只，雄性，體重160-180g，大鼠頸部、腰部用8%硫化鈉飽和溶液脫毛，脫毛面積頸部約3.0cm*2.5cm，腰部約8.5cm*6.0cm。脫毛24h后，在大鼠背部皮下注射2%瓊脂水溶液2ml，制造瓊脂肉芽腫模型。造模后24h根據(jù)大鼠體重隨機分為5組，模型對照在頸部、腰部脫毛區(qū)涂抹白馬寺消痛貼賦形劑，阿司匹林組0.25g/kg灌胃給藥，白馬寺消痛貼組4,8,16g/kg在脫毛區(qū)涂抹藥物后，用紗布、膠布固定。1次/d，連續(xù)15d，末次給藥后1h，處死大鼠，剖取肉芽腫，電子天平稱濕重。由結(jié)果可見：模型對照組肉芽增生明顯，白馬寺消痛貼低、中、高劑量組均能明顯抑制肉芽增生（p<0.001），且給藥組隨藥物劑量增加抑制肉芽腫增生的作用加強，表明白馬寺消痛貼能明顯抑制瓊脂所致大鼠肉芽腫的形成。白馬寺消痛貼對炎癥模型大鼠血液流變學(xué)的影響大鼠60只，雄性，體重160-180g，大鼠頸部、腰部用8%硫化鈉飽和溶液脫毛，脫毛面積頸部約3.0cm*2.5cm、腰部約8.5cm*6.0cm。脫毛24h后，在大鼠背部皮下注射2%瓊脂水溶液2ml，制造瓊脂肉芽腫模型。造模后24h根據(jù)大鼠體重隨機分為6組，正常對照組、模型對照在頸部、腰部脫毛區(qū)涂抹白馬寺消痛貼賦形劑，阿司匹組0.25g/kg灌胃給藥，白馬寺消痛貼組4,8,16g/kg在脫毛區(qū)涂抹藥物后，用紗布、膠布固定。1次/d，連續(xù)15d，末次給藥后1h，頸靜脈取血，進行血液流變學(xué)測定。由結(jié)果可見，模型對照組與正常對照組相比，全血黏度顯著升高，說明血淤動物造模成功。給藥15d后，白馬寺消痛貼低、中、高劑量組血液流變學(xué)全血黏度與模型對照組比較有顯著性差異，表明白馬寺消痛貼組能明顯降低瓊脂所致大鼠肉芽腫慢性炎癥的全血黏度，改善損傷組織的血液供應(yīng)，減輕炎癥反應(yīng)，促進炎癥的吸收，具有一定的活血化淤作用。討論

骨質(zhì)增生多發(fā)生在負重較大和動力傳動的關(guān)節(jié)端側(cè)緣部位，該病的臨床表現(xiàn)，是以骨關(guān)節(jié)軟骨組織退行性病變?yōu)樘卣鳎跃植刻弁?、腫脹、關(guān)節(jié)畸形、活動功能障礙、肢體麻痹等癥狀等為主癥。是多種原因所致軟組織變性、攣縮，局部血液循環(huán)受阻，內(nèi)壓增高，關(guān)節(jié)滑膜產(chǎn)生炎癥、增生肥厚，關(guān)節(jié)周圍軟組織發(fā)生病變，從而壓迫周圍組織、神經(jīng)及血管，產(chǎn)生疼痛，關(guān)節(jié)活動受限等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，血液黏度增高可影響微循環(huán)的有效灌注，產(chǎn)生局部缺血癥狀；但缺血時組織缺氧，pH下降，這可使紅細胞變形性降低；組織血流不暢時，細胞容易聚集，導(dǎo)致血栓形成，血管栓塞，反過來會使血液黏度進一步升高，形成惡性循環(huán)。這是骨質(zhì)增生病變發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。本藥效學(xué)實驗是以骨質(zhì)增生引起的常見的臨床表現(xiàn)，設(shè)計并觀察了不同劑量白馬寺消痛貼的抗炎和消腫祛淤的藥理作用。結(jié)果表明，白馬寺消痛貼具有明顯的抗炎及活血化淤作用，能明顯抑制巴豆油引起的小鼠耳廓腫脹，且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系；可以拮抗醋酸引起的小鼠腹腔毛細血管通透性亢進（P<0.001），減少炎性介質(zhì)的滲出，測得給藥組小鼠腹腔洗滌液的OD值隨給藥劑量的增大而降低；可以抑制由蛋清引起的大鼠足跖腫脹（p<0.05）；能抑制大鼠瓊脂肉芽腫（p<0.001），表明白馬寺消痛貼具有抑制結(jié)締組織增生的作用；能明顯降低慢性炎癥模型