第三講糖蛋白質(zhì)鑒定

具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2＋反應(yīng)生成絡(luò)合物含醛基的可溶性還原糖將Cu(OH)2還原為Cu2O沉淀反應(yīng)原理0.01g/mLCuSO4溶液0.1g/mL

NaOH溶液0.05g/mLCuSO4溶液0.1g/mL

NaOH溶液B液A液乙液甲液成分雙縮脲試劑斐林試劑比較項(xiàng)目都含有NaOH、CuSO4兩種成分，且所用NaOH溶液濃度都是0.1g/mL相同點(diǎn)樣液變紫色樣液淺藍(lán)色→棕色→磚紅色反應(yīng)現(xiàn)象不需加熱50～65℃水浴加熱反應(yīng)條件先加入A液2mL搖勻，再加3～4滴B液搖勻甲、乙兩液等量混勻后立即使用添加順序選項(xiàng)取樣時(shí)間檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果A第10d斐林試劑不顯色B第20d雙縮脲試劑不顯色C第30d蘇丹Ⅲ染液橘黃色D第40d碘液藍(lán)色

第10d有可溶性糖，不排除有還原糖的可能，故加入斐林試劑，水浴加熱后可能出現(xiàn)磚紅色沉淀；種子中一定有蛋白質(zhì)，加入雙縮脲試劑后會(huì)出現(xiàn)紫色反應(yīng)；第30d種子中有脂肪，與蘇丹Ⅲ染液發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)橘黃色；第40d種子中無(wú)淀粉，加入碘液后不會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。發(fā)芽的小麥種子勻漿中含有淀粉酶，淀粉酶能使小麥種子中的淀粉水解產(chǎn)生麥芽糖等還原糖。

1～4號(hào)試管中加入斐林試劑后，因1、3號(hào)試管中是蒸餾水而無(wú)還原糖，故顯示斐林試劑本身的藍(lán)色，2號(hào)試管中雖含還原糖，但未水浴加熱，故仍呈藍(lán)色，4號(hào)試管進(jìn)行水浴加熱后出現(xiàn)磚紅色沉淀。

用于鑒定還原糖的斐林試劑甲液和乙液，必須混合均勻后再使用，而鑒定蛋白質(zhì)時(shí)需先加A液，再加B液，且兩者CuSO4溶液濃度也不同；用雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時(shí)，不需要加熱。

溶液雙縮脲試劑碘液斐林試劑甲＋－－乙－＋＋－甲、乙混合＋＋＋根據(jù)溶液甲中的顏色變化可知其含有蛋白質(zhì)；根據(jù)乙溶液中的顏色變化可知其含有淀粉；甲、乙混合后，兩溶液中的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生了還原糖，由此可知，甲溶液中含有淀粉酶，乙溶液中含有淀粉。20℃和30℃培養(yǎng)條件下相比較，30℃時(shí)淀粉酶的活性相對(duì)較高，淀粉酶催淀粉水解成麥芽糖的速率更快，相同條件下產(chǎn)生的麥芽糖更多。麥芽糖屬于還原糖，與斐林試劑反應(yīng)生成磚紅色沉淀，麥芽糖越多顯色越明顯，斐林試劑本身為藍(lán)色，可得出甲試管呈淺磚紅色，乙試管呈磚紅色，丙試管呈藍(lán)色。試劑種類碘液蘇丹