園藝植物組織培養(yǎng)-第3章

第三章培養(yǎng)基及其配制2023/2/51HuoXW,IMAUOUTLINE培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)2023/2/52HuoXW,IMAU第一節(jié)培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基(Medium):是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì).在離體培養(yǎng)條件下，不同種植物的組織對(duì)營(yíng)養(yǎng)有不同的要求.同一種植物不同部位的組織對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求也不相同.沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官.在建立一項(xiàng)新的培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí)，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培養(yǎng)才有可能成功.2023/2/53HuoXW,IMAU一、培養(yǎng)基的成分

培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機(jī)鹽、有機(jī)物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。

1．水

配制培養(yǎng)基母液時(shí)要用蒸餾水，以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性，防止貯藏過程發(fā)霉變質(zhì)。

2、無機(jī)元素(inorganicnutrition)

大量元素，指濃度大于0.5mmol／L的元素，有N，P，K，Ca，Mg，S等。其作用是：2023/2/54HuoXW,IMAU(1)N:蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分。氮（N）：細(xì)胞中核酸的組成部分，也是生物體許多酶的成分，氮被植物吸收后轉(zhuǎn)化為氨基酸再轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)，然后被植物利用。氮還是葉綠素、維生素和植物激素的組成成分。氮主要以銨態(tài)氮、銷態(tài)氮兩種形式被使用，實(shí)際中常常將兩者混合使用，以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的離子平衡，利于細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育。有KN03、NH4NO3，Ca(NO3)2等。一般認(rèn)為，銨態(tài)氮的含量超過8mmol?L-1時(shí)容易傷害培養(yǎng)物，但這種情況也依植物種類、培養(yǎng)部位、培養(yǎng)類型而定。2023/2/55HuoXW,IMAU(2)P:

是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生質(zhì)、細(xì)胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。促進(jìn)對(duì)N的吸收。參與植物生命活動(dòng)中核酸和蛋白質(zhì)合成、光合作用、呼吸作用以及能量的儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)化與釋放等重要的生理生化過程，增強(qiáng)植物的抗逆能力，促進(jìn)早熟。組織培養(yǎng)過程中需大量的磷。磷常以鹽的形式供給。

常用的物質(zhì)有KH2P04或NaH2P04等。2023/2/56HuoXW,IMAU(3)K：許多酶的活化劑。促進(jìn)器官和不定胚的分化，促進(jìn)葉綠體ATP的合成，增強(qiáng)植物的光合作用和產(chǎn)物的運(yùn)輸，能調(diào)節(jié)植物細(xì)胞水勢(shì)，調(diào)控氣孔運(yùn)動(dòng)，提高植物的抗逆能力。濃度不易過大，一般為1-3mg／L為好。制備培養(yǎng)基時(shí)，常以KCl、KNO3，等鹽類提供。2023/2/57HuoXW,IMAU(4)Mg、S和Ca：Mg是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑；S是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分。它們常以MgS04·7H20提供。用量為1-3mg／L較為適宜。Ca是構(gòu)成細(xì)胞壁的一種成分。Ca對(duì)細(xì)胞分裂、保護(hù)質(zhì)膜不受破壞有顯著作用，常以CaCl2·2H20提供。

2023/2/58HuoXW,IMAU(5)微量元素

指小于0.5mmol／L的元素，F(xiàn)e，B，Mn，Cu，Mo，Co等。鐵是一些氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。同時(shí)，它又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對(duì)胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進(jìn)作用。在制做培養(yǎng)基時(shí)用FeS04·7H20和Na2-EDTA結(jié)合成螯合物使用，避免Fe2+氧化產(chǎn)生Fe(OH)3沉淀。2023/2/59HuoXW,IMAU硼能促進(jìn)生殖器官的正常發(fā)育，參與蛋白質(zhì)合成或糖類運(yùn)輸，可調(diào)節(jié)和穩(wěn)定細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)和細(xì)胞分裂；錳參與植物的光合作用、呼吸代謝過程，影響根系生長(zhǎng)，對(duì)維生素C的形成以及加強(qiáng)莖的機(jī)械組織優(yōu)良好作用；鋅是各種酶的構(gòu)成要素，增強(qiáng)光合作用效率，參與生長(zhǎng)素的代謝，促進(jìn)生殖器官發(fā)育和提高抗逆性；銅能促進(jìn)花器官的發(fā)育；鉬是氮素代謝的重要元素，參與繁殖器官的建成。2023/2/510HuoXW,IMAU缺素癥：

當(dāng)某些營(yíng)養(yǎng)元素供應(yīng)不足時(shí)，愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。缺氮，會(huì)表現(xiàn)出一種花色素苷的顏色，不能形成導(dǎo)管；缺鐵，細(xì)胞停止分裂；缺硫，表現(xiàn)出非常明顯的褪綠；缺錳或鉬，則影響細(xì)胞的伸長(zhǎng)。2023/2/511HuoXW,IMAU3．有機(jī)化合物(organiccompound)

培養(yǎng)基中若只含有大量元素與微量元素，常稱為基本培養(yǎng)基。常加入的有機(jī)成分主要有以下幾類：(1)碳水化合物（carbohydrate）最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是較好的碳源，麥芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在組織培養(yǎng)中也有應(yīng)用。蔗糖使用濃度在2％-3％，常用3％，胚培養(yǎng)時(shí)采用4％-15％的高濃度，因蔗糖對(duì)胚狀體的發(fā)育起重要作用。不同糖類對(duì)生長(zhǎng)的影響不同。從各種糖對(duì)水稻根培養(yǎng)的影響來看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相當(dāng)，麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同，高壓滅菌時(shí)一部分糖發(fā)生分解。在大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，可用食用的綿白糖代替。2023/2/512HuoXW,IMAU(2)維生素(vitamin)

在植物細(xì)胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動(dòng)，對(duì)生長(zhǎng)、分化等有很好的促進(jìn)作用。大多數(shù)的植物細(xì)胞在培養(yǎng)中都能合成所必需的維生素，但數(shù)量上不足，通常需加入一至數(shù)種維生素。主要有VBl(鹽酸硫胺素)、VB6(鹽酸吡哆醇)、B5(煙酸)、VC(抗壞血酸)、有時(shí)還使用生物素(維生素H)、葉酸（維生素M）、VB2(核黃素)等。一般用量為0.1-1.Omg／L。VB1對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用，VB6能促進(jìn)根的生長(zhǎng)，Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。Vc有防止組織變褐的作用，用量為1-100mg／L

。2023/2/513HuoXW,IMAU(3)肌醇(inositol):又叫環(huán)己六醇，在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。用于構(gòu)建細(xì)胞壁,參與細(xì)胞膜的構(gòu)建。使用濃度一般為50-lOOmg／L，適當(dāng)使用肌醇，能促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)以及胚狀體和芽的形成。對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用，對(duì)細(xì)胞壁的形成也有作用。2023/2/514HuoXW,IMAU(4)氨基酸(aminoacide)

是很好的有機(jī)氮源，可直接被細(xì)胞吸收利用。培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有時(shí)應(yīng)用水解乳蛋白（LH）或水解酪蛋白（CH），是含有約20種氨基酸的混合物，用量在10-1000mg／L之間。2023/2/515HuoXW,IMAU(5)天然復(fù)合物:1)椰乳是椰子的液體胚乳。使用濃度在10％-20％，它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。2)香蕉汁用量為150-200mg/L。對(duì)pH值的緩沖作用大,對(duì)發(fā)育有促進(jìn)作用。3)馬鈴薯(potato):用量為150-200g／L。對(duì)pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。4)水解酪蛋白:為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸，使用濃度為100-200mg／L。5)其他:酵母提取液(YE)(0.01％-0..05％)，主要成分為氨基酸和維生素類.2023/2/516HuoXW,IMAU4．植物激素(hormone)

是培養(yǎng)基中不可缺少的關(guān)鍵物質(zhì)，用量雖少，但對(duì)外植體愈傷組織的誘導(dǎo)和根、芽等器官分化起著重要的調(diào)節(jié)作用。(1)生長(zhǎng)素類(auxin)在組織培養(yǎng)中，生長(zhǎng)素主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，誘導(dǎo)根的分化和促進(jìn)細(xì)胞分裂、伸長(zhǎng)生長(zhǎng)根對(duì)生長(zhǎng)素最敏感,其次是莖和芽。作用的強(qiáng)弱依次為2,4-D＞NAA＞IBA＞IAA。生長(zhǎng)素的使用量通常為0.05-5mg/L。2023/2/517HuoXW,IMAUIAA(indoaceticacid吲哚乙酸:是生長(zhǎng)素中活力最弱的激素，對(duì)器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA(naphthaleneaceticacid萘乙酸):在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出3-4倍，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長(zhǎng)IBA(indolebutyricacid吲哚丁酸):是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸):起動(dòng)能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。生長(zhǎng)素配制時(shí)可先用少量95％酒精助溶。2，4-D可用0．1mol／L的NaOH或KOH助溶。2023/2/518HuoXW,IMAU(2)細(xì)胞分裂素類(cytokinin):主要功能是促進(jìn)細(xì)胞分裂、抑制衰老，組織內(nèi)細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值高時(shí)，可誘導(dǎo)芽的分化。常見的細(xì)胞分裂素有激動(dòng)素（KT）、異戊烯基嘌呤（2iP）、6-芐基腺嘌呤（6-BA）、玉米素（ZT）、噻重氮苯基脲（TDZ）。它們作用的強(qiáng)弱依次為TDZ＞ZT＞2iP＞6-BA＞KT。細(xì)胞分裂素的使用量通常為0.05-10mg?L-1。在培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素有三個(gè)作用：①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)，細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素相互作用，當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素／生長(zhǎng)素的比值高時(shí)，誘導(dǎo)愈傷組織或器官分化出不定芽。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。③抑制根的分化。2023/2/519HuoXW,IMAU生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例決定著發(fā)育的方向，是愈傷組織、是長(zhǎng)根還是長(zhǎng)芽。促進(jìn)芽器官的分化，應(yīng)除去或降低生長(zhǎng)素的濃度，或者調(diào)整培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素的比例。

一般生長(zhǎng)素濃度的使用為0.05-5mg／L，細(xì)胞分裂素0.05-10mg／L。2023/2/520HuoXW,IMAU(3)GA(gibberellicacid赤霉素):有20多種，生理活性及作用的種類、部位、效應(yīng)等各有不同、培養(yǎng)基中添加的是GA3，促進(jìn)幼苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)，促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株；赤霉素和生長(zhǎng)素協(xié)同作用，對(duì)形成層的分化有影響，當(dāng)生長(zhǎng)素／赤霉素比值高時(shí)有利于木質(zhì)部分化，比值低時(shí)有利于韌皮部分化；赤霉素還用于打破休眠，促進(jìn)種子、塊莖、鱗莖等提前萌發(fā)。一般在器官形成后，添加赤霉素可促進(jìn)器官或胚狀體的生長(zhǎng)。赤霉素溶于酒精，配制時(shí)可用少量95％酒精助溶。赤霉素不耐熱，高壓滅菌后將有70％-100％失效，應(yīng)當(dāng)采用過濾滅菌法加入。2023/2/521HuoXW,IMAU脫落酸（abscissicacid,ABA）抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，促進(jìn)脫落和衰老，促進(jìn)休眠。主要用于種質(zhì)資源的超低溫保存。多胺（polyamines,PA）主要包括腐胺（Put）,精胺（Spm）,亞精胺（Apd）及尸胺(Cad)是生物代謝過程中產(chǎn)生的小分子脂肪族含氮堿對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)建成及抗逆性有調(diào)節(jié)作用。2023/2/522HuoXW,IMAU4、瓊脂(agar)瓊脂是從紅藻等海藻中提取的一種高分子碳水化合物，其主要作用是使培養(yǎng)基在常溫下凝固，它不參與代謝、不提供營(yíng)養(yǎng)（但不純的瓊脂中常會(huì)有一些微量元素），在植物離體培養(yǎng)中一直被作為首選的固化劑。瓊脂的用量一般在4～10g/L之間。在離體培養(yǎng)中，增加瓊脂的用量可以克服“玻璃化現(xiàn)象”的發(fā)生。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家和加工方式有關(guān)外，還與高壓滅菌的溫度、時(shí)間、pH值等因素有關(guān)，長(zhǎng)時(shí)間的高溫會(huì)使凝固能力下降，過酸及高溫會(huì)使瓊脂發(fā)生水解，失去凝固能力。存放時(shí)間過久，也會(huì)逐漸失去凝固力，在使用中應(yīng)注意。2023/2/523HuoXW,IMAU5活性碳(activatedcarbon)與硝酸銀活性碳（AC）可吸附植物的有害泌出物，但其對(duì)物質(zhì)吸附的選擇性很低，同時(shí)也能吸附某些植物的必需化合物.活性碳的用量一般為0.5％－3％。在高壓滅菌之前加入活性碳會(huì)降低培養(yǎng)基的pH值，使瓊脂不易凝固，在培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意。2023/2/524HuoXW,IMAUAgNO3離體培養(yǎng)中的植物組織會(huì)產(chǎn)生乙烯，乙烯在培養(yǎng)容器中的積累會(huì)影響培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和分化，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致培養(yǎng)物的衰老和落葉。AgNO3中的Ag+通過競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合于細(xì)胞膜上的乙烯受體蛋白，能起到抑制乙烯活性的作用。在培養(yǎng)基中加入適量的AgNO3，有促進(jìn)愈傷組織分化器官或胚狀體的作用，能使某些原來再生困難的物種再生植株，并對(duì)克服試管苗玻璃化、早衰及落葉等有明顯效果。AgNO3的使用濃度一般為1～10mg/L。不可把培養(yǎng)物長(zhǎng)期保存在AgNO3培養(yǎng)基上2023/2/525HuoXW,IMAU6、抗氧化物(antioxide)

植物組織在切割時(shí)會(huì)溢泌一些酚類物質(zhì)，接觸空氣中的氧氣后，自動(dòng)氧化或由酶類催化氧化為相應(yīng)的醌類，產(chǎn)生可見的茶色、褐色以致黑色，這就是酚污染。這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身中毒，使培養(yǎng)的材料生長(zhǎng)停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。在木本，尤其是熱帶木本及少數(shù)草本植物中較為嚴(yán)重?？狗宇愌趸Ｓ玫乃巹┯邪腚装彼峒癡c，可用50-200mg/L的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面，或過濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其他抗氧化劑有二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。2023/2/526HuoXW,IMAU7、染色劑(stain)在進(jìn)行離體培養(yǎng)研究時(shí)通常需配制不同的培養(yǎng)基，或加入不同的植物激素，以觀察培養(yǎng)物的變化，確定最適宜的配方。除了用鉛筆或油筆標(biāo)記外，一個(gè)可行的辦法，是在培養(yǎng)基中滴加1～3滴1％的活體染色劑，如亞甲蘭、中性紅、甲基紫等，將培養(yǎng)基染成不同的淡顏色，由于染色劑用量極微，不會(huì)對(duì)培養(yǎng)物產(chǎn)生影響，利用此法能夠節(jié)約大量的標(biāo)注時(shí)間。甲基紫除供染色之外，還具有較強(qiáng)的殺菌作用，0.001％即可有效地抑制細(xì)菌和部分真菌的生長(zhǎng)。2023/2/527HuoXW,IMAU8、抗生素(antibiotic)

對(duì)于內(nèi)生菌的情況，可使用抗生素類物質(zhì)進(jìn)行抑菌，經(jīng)試驗(yàn)，甲基托布津、多菌靈、百菌清都有較好的效果，另據(jù)報(bào)道，鏈霉素、青霉素、地霉素、新霉素、夾竹桃霉素、抗菌肽等物質(zhì)都具有降低內(nèi)生菌污染的效果。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、利福平、卡那霉素、慶大霉素等，用量為5-20mg/L。大部分抗生素要求過濾滅菌。不同抗生素抑菌效果不同，需針對(duì)性選擇；通常需幾種配合使用；2023/2/528HuoXW,IMAU第二節(jié)培養(yǎng)基的種類(1)MS培養(yǎng)基

1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的特點(diǎn):無機(jī)鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變而來的。2023/2/529HuoXW,IMAU(2)B5培養(yǎng)基

1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):含有較低的銨，這可能對(duì)不少培養(yǎng)物的生長(zhǎng)有抑制作用。從實(shí)踐得知有些植物在B5培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物(3)White培養(yǎng)基

1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的。1963年又作了改良，稱作White改良培養(yǎng)基，提高了MgSO4的濃度和增加了硼素。特點(diǎn):

無機(jī)鹽數(shù)量較低，適于生根培養(yǎng)。2023/2/530HuoXW,IMAU(4)N6培養(yǎng)基

1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):成分較簡(jiǎn)單，KN03和(NH4)：S04含量高。在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。(5)KM-8P培養(yǎng)基

1974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):有機(jī)成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素，廣泛用于原生質(zhì)融合的培養(yǎng)。2023/2/531HuoXW,IMAU一培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基類型：1普通培養(yǎng)基（平衡培養(yǎng)基）：MS（MurashigeandSkoog,1962）培養(yǎng)基，無機(jī)鹽濃度高、緩沖性能好、營(yíng)養(yǎng)豐富、微量元素種類全，使用最廣泛。改良MS：LS、BL、BM、ER等。2富含硝酸鉀培養(yǎng)基：B5、N6、SH等培養(yǎng)基，硝酸鉀含量高、銨態(tài)氮含量低（某些植物生長(zhǎng)受抑制）。3中等無機(jī)鹽培養(yǎng)基：如MA、H培養(yǎng)基等，無機(jī)鹽約為MS的半量、微量元素種類少含量高、維生素種類增加（生物素、葉酸等）。4低無機(jī)鹽培養(yǎng)基：White、WS、HE等培養(yǎng)基，無機(jī)鹽含量低（MS的1/4）、有機(jī)成分低，主要用于生根。2023/2/532HuoXW,IMAU二激素選擇生長(zhǎng)素：節(jié)間伸長(zhǎng)、頂端優(yōu)勢(shì)、促進(jìn)生根等，組培中用于促進(jìn)細(xì)胞分裂、誘導(dǎo)愈傷和生根。常用的生長(zhǎng)素類激素有：2,4-D、2,4,5-T、NAA、NOA、IBA、IAA等。2,4-D、2,4,5-T主要用于誘導(dǎo)愈傷；IBA、IAA常用于生根培養(yǎng)。細(xì)胞分裂素：促進(jìn)細(xì)胞分裂、打破頂端優(yōu)勢(shì)、促進(jìn)芽分化。常用的細(xì)胞分裂素有：ZT、BAP、6-BA、2-iP、KT等。細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例及含量是激素使用的關(guān)鍵：原則上生長(zhǎng)素水平高促進(jìn)愈傷，反之利于分化。另外生長(zhǎng)素用于生根。此外選擇脫落酸或激素抑制物（AgNO3、三碘苯甲酸）等，可促進(jìn)愈傷誘導(dǎo)或芽分化。2023/2/533HuoXW,IMAUAuxin-CytokininInteractionAuxinHighLowCytokininHighLowRootformationoncuttingsFirststageofembryogenesisAdventitious(外來)rootformationCallusInitiationindicotsAdventitiousshootformationAxillaryshootproliferationinshootculturesCallusinitiationinmonocots2023/2/534HuoXW,IMAU第三節(jié)培養(yǎng)基的制備一、母液(stocks1ution)的配制和保存母液是欲配制液的濃縮液，一般母液配成比所需濃度高10-200倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。2023/2/535HuoXW,IMAU二、培養(yǎng)基的配制和保存計(jì)算所需各成分的量加水，瓊脂煮熔，一次加入大量元素，微量元素，鐵鹽，有機(jī)物，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑及其它添加物及蔗糖定容調(diào)節(jié)pH分裝封口滅菌2023/2/536HuoXW,IMAU第四節(jié)培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)一、單因子試驗(yàn)

在單因子試驗(yàn)中，由于培養(yǎng)基中其他成分都維持在一般水平上，所以只變動(dòng)一個(gè)因子，就可以找出這個(gè)因子對(duì)試驗(yàn)的影響和影響的程度。二、多因子試驗(yàn)

對(duì)培養(yǎng)基中兩個(gè)或兩個(gè)以上因素進(jìn)行研究的試驗(yàn)稱為多因子實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)可采用完全試驗(yàn)方案，也可選用正交設(shè)計(jì)方案，完全試驗(yàn)方案具有均衡完全的特點(diǎn)，各個(gè)因子的每個(gè)水平都相互搭配，構(gòu)成了所有可能的處理組合。三、逐步添加和逐步排除的試驗(yàn)方法2023/2/537HuoXW,IMAU三、逐步添加和逐步排除的試驗(yàn)方法

在植物組織分化與再生的研究中，在沒有取得可靠的分化與再生之前，往往添加各種有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，而在取得了穩(wěn)定的再生之后，就可以逐步減少這些成分。在逐步添加時(shí)是使試驗(yàn)成功，在逐步減少時(shí)是縮小范圍，以便找到最有影響力的因子，或是為了實(shí)用上的需要竭力使培養(yǎng)基簡(jiǎn)化，以降低成本和利于推廣。在尋求最佳激素配比時(shí)，也經(jīng)常用到這種加加減減的簡(jiǎn)單方法。2023/2/538HuoXW,IMAUPicturesoftissuecultureintheAfricanVioletThesepicturesshowtheeffectsofchangingthecompositionofatissueculturemediumthatwasdesignedoriginallyformicropropagationofthecommonhouseplant,theAfricanViolet(紫羅蘭).

Thecontrolmediumcontains:4.71g.l-1

MurashigeandSkoogInorganicsaltsmedium,0.5mg·l-1naphthaleneaceticacid(NAA,anauxin),0.5

mg.l-1

benzylamine

purine(BAP,acytokinin)and3%sucrose,solidifiedby1%agar.

ThisTable

summarisesthecompositionofthemedium.

Eachpictureshowstheeffectonthepatternofdifferentiationofincreasingordecreasingonecomponentofthismedium.Allareofapproximatelythesamesizeoftheoriginalexplant(1cmsquare).TheFiguresareatasimilarmagnification(放大率).2023/2/539HuoXW,IMAUControlGrowthmediumisoptimisedforregenerationofplantlets.Theexplantiscompletelycoveredwithgreenshoots,androotsaredevelopingonthelowersurface(somevisibleatthesides).2023/2/540HuoXW,IMAUNosucrose(0%)Veryfewshootshavedevelopedontheexplant.Norootsandnocallus.Sucrosereducedto1%Shootsdevelopedonedgesofuppersurface,andsomerootdevelopmenthasoccurred.NoBAP

Profuse(豐富的)developmentofrootsandareducednumberofshoots.Undifferentiatedcallu