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第三章培養(yǎng)基及其配制2023/2/51HuoXW,IMAUOUTLINE培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)2023/2/52HuoXW,IMAU第一節(jié)培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基(Medium):是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì).在離體培養(yǎng)條件下,不同種植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求.同一種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相同.沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官.在建立一項(xiàng)新的培養(yǎng)系統(tǒng)時(shí),首先必須找到一合適的培養(yǎng)基,培養(yǎng)才有可能成功.2023/2/53HuoXW,IMAU一、培養(yǎng)基的成分
培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機(jī)鹽、有機(jī)物、天然復(fù)合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。
1.水
配制培養(yǎng)基母液時(shí)要用蒸餾水,以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性,防止貯藏過程發(fā)霉變質(zhì)。
2、無機(jī)元素(inorganicnutrition)
大量元素,指濃度大于0.5mmol/L的元素,有N,P,K,Ca,Mg,S等。其作用是:2023/2/54HuoXW,IMAU(1)N:蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分。氮(N):細(xì)胞中核酸的組成部分,也是生物體許多酶的成分,氮被植物吸收后轉(zhuǎn)化為氨基酸再轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì),然后被植物利用。氮還是葉綠素、維生素和植物激素的組成成分。氮主要以銨態(tài)氮、銷態(tài)氮兩種形式被使用,實(shí)際中常常將兩者混合使用,以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的離子平衡,利于細(xì)胞的生長發(fā)育。有KN03、NH4NO3,Ca(NO3)2等。一般認(rèn)為,銨態(tài)氮的含量超過8mmol?L-1時(shí)容易傷害培養(yǎng)物,但這種情況也依植物種類、培養(yǎng)部位、培養(yǎng)類型而定。2023/2/55HuoXW,IMAU(2)P:
是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生質(zhì)、細(xì)胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。促進(jìn)對N的吸收。參與植物生命活動(dòng)中核酸和蛋白質(zhì)合成、光合作用、呼吸作用以及能量的儲(chǔ)存、轉(zhuǎn)化與釋放等重要的生理生化過程,增強(qiáng)植物的抗逆能力,促進(jìn)早熟。組織培養(yǎng)過程中需大量的磷。磷常以鹽的形式供給。
常用的物質(zhì)有KH2P04或NaH2P04等。2023/2/56HuoXW,IMAU(3)K:許多酶的活化劑。促進(jìn)器官和不定胚的分化,促進(jìn)葉綠體ATP的合成,增強(qiáng)植物的光合作用和產(chǎn)物的運(yùn)輸,能調(diào)節(jié)植物細(xì)胞水勢,調(diào)控氣孔運(yùn)動(dòng),提高植物的抗逆能力。濃度不易過大,一般為1-3mg/L為好。制備培養(yǎng)基時(shí),常以KCl、KNO3,等鹽類提供。2023/2/57HuoXW,IMAU(4)Mg、S和Ca:Mg是葉綠素的組成成分,又是激酶的活化劑;S是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分。它們常以MgS04·7H20提供。用量為1-3mg/L較為適宜。Ca是構(gòu)成細(xì)胞壁的一種成分。Ca對細(xì)胞分裂、保護(hù)質(zhì)膜不受破壞有顯著作用,常以CaCl2·2H20提供。
2023/2/58HuoXW,IMAU(5)微量元素
指小于0.5mmol/L的元素,F(xiàn)e,B,Mn,Cu,Mo,Co等。鐵是一些氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。同時(shí),它又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進(jìn)作用。在制做培養(yǎng)基時(shí)用FeS04·7H20和Na2-EDTA結(jié)合成螯合物使用,避免Fe2+氧化產(chǎn)生Fe(OH)3沉淀。2023/2/59HuoXW,IMAU硼能促進(jìn)生殖器官的正常發(fā)育,參與蛋白質(zhì)合成或糖類運(yùn)輸,可調(diào)節(jié)和穩(wěn)定細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),促進(jìn)細(xì)胞伸長和細(xì)胞分裂;錳參與植物的光合作用、呼吸代謝過程,影響根系生長,對維生素C的形成以及加強(qiáng)莖的機(jī)械組織優(yōu)良好作用;鋅是各種酶的構(gòu)成要素,增強(qiáng)光合作用效率,參與生長素的代謝,促進(jìn)生殖器官發(fā)育和提高抗逆性;銅能促進(jìn)花器官的發(fā)育;鉬是氮素代謝的重要元素,參與繁殖器官的建成。2023/2/510HuoXW,IMAU缺素癥:
當(dāng)某些營養(yǎng)元素供應(yīng)不足時(shí),愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。缺氮,會(huì)表現(xiàn)出一種花色素苷的顏色,不能形成導(dǎo)管;缺鐵,細(xì)胞停止分裂;缺硫,表現(xiàn)出非常明顯的褪綠;缺錳或鉬,則影響細(xì)胞的伸長。2023/2/511HuoXW,IMAU3.有機(jī)化合物(organiccompound)
培養(yǎng)基中若只含有大量元素與微量元素,常稱為基本培養(yǎng)基。常加入的有機(jī)成分主要有以下幾類:(1)碳水化合物(carbohydrate)最常用的碳源是蔗糖,葡萄糖和果糖也是較好的碳源,麥芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在組織培養(yǎng)中也有應(yīng)用。蔗糖使用濃度在2%-3%,常用3%,胚培養(yǎng)時(shí)采用4%-15%的高濃度,因蔗糖對胚狀體的發(fā)育起重要作用。不同糖類對生長的影響不同。從各種糖對水稻根培養(yǎng)的影響來看,以葡萄糖效果最好,果糖和蔗糖相當(dāng),麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同,高壓滅菌時(shí)一部分糖發(fā)生分解。在大規(guī)模生產(chǎn)時(shí),可用食用的綿白糖代替。2023/2/512HuoXW,IMAU(2)維生素(vitamin)
在植物細(xì)胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動(dòng),對生長、分化等有很好的促進(jìn)作用。大多數(shù)的植物細(xì)胞在培養(yǎng)中都能合成所必需的維生素,但數(shù)量上不足,通常需加入一至數(shù)種維生素。主要有VBl(鹽酸硫胺素)、VB6(鹽酸吡哆醇)、B5(煙酸)、VC(抗壞血酸)、有時(shí)還使用生物素(維生素H)、葉酸(維生素M)、VB2(核黃素)等。一般用量為0.1-1.Omg/L。VB1對愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用,VB6能促進(jìn)根的生長,Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。Vc有防止組織變褐的作用,用量為1-100mg/L
。2023/2/513HuoXW,IMAU(3)肌醇(inositol):又叫環(huán)己六醇,在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。用于構(gòu)建細(xì)胞壁,參與細(xì)胞膜的構(gòu)建。使用濃度一般為50-lOOmg/L,適當(dāng)使用肌醇,能促進(jìn)愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用,對細(xì)胞壁的形成也有作用。2023/2/514HuoXW,IMAU(4)氨基酸(aminoacide)
是很好的有機(jī)氮源,可直接被細(xì)胞吸收利用。培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸,其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有時(shí)應(yīng)用水解乳蛋白(LH)或水解酪蛋白(CH),是含有約20種氨基酸的混合物,用量在10-1000mg/L之間。2023/2/515HuoXW,IMAU(5)天然復(fù)合物:1)椰乳是椰子的液體胚乳。使用濃度在10%-20%,它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用。2)香蕉汁用量為150-200mg/L。對pH值的緩沖作用大,對發(fā)育有促進(jìn)作用。3)馬鈴薯(potato):用量為150-200g/L。對pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。4)水解酪蛋白:為蛋白質(zhì)的水解物,主要成分為氨基酸,使用濃度為100-200mg/L。5)其他:酵母提取液(YE)(0.01%-0..05%),主要成分為氨基酸和維生素類.2023/2/516HuoXW,IMAU4.植物激素(hormone)
是培養(yǎng)基中不可缺少的關(guān)鍵物質(zhì),用量雖少,但對外植體愈傷組織的誘導(dǎo)和根、芽等器官分化起著重要的調(diào)節(jié)作用。(1)生長素類(auxin)在組織培養(yǎng)中,生長素主要被用于誘導(dǎo)愈傷組織形成,誘導(dǎo)根的分化和促進(jìn)細(xì)胞分裂、伸長生長根對生長素最敏感,其次是莖和芽。作用的強(qiáng)弱依次為2,4-D>NAA>IBA>IAA。生長素的使用量通常為0.05-5mg/L。2023/2/517HuoXW,IMAUIAA(indoaceticacid吲哚乙酸:是生長素中活力最弱的激素,對器官形成的副作用小,高溫高壓易被破壞,也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解,受光也易分解。NAA(naphthaleneaceticacid萘乙酸):在組織培養(yǎng)中的起動(dòng)能力要比IAA高出3-4倍,耐高溫高壓,不易被分解破壞,所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根,并與細(xì)胞分裂素互作促進(jìn)芽的增殖和生長IBA(indolebutyricacid吲哚丁酸):是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸):起動(dòng)能力比IAA高10倍,特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高,但它強(qiáng)烈抑制芽的形成,影響器官的發(fā)育。生長素配制時(shí)可先用少量95%酒精助溶。2,4-D可用0.1mol/L的NaOH或KOH助溶。2023/2/518HuoXW,IMAU(2)細(xì)胞分裂素類(cytokinin):主要功能是促進(jìn)細(xì)胞分裂、抑制衰老,組織內(nèi)細(xì)胞分裂素/生長素的比值高時(shí),可誘導(dǎo)芽的分化。常見的細(xì)胞分裂素有激動(dòng)素(KT)、異戊烯基嘌呤(2iP)、6-芐基腺嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)、噻重氮苯基脲(TDZ)。它們作用的強(qiáng)弱依次為TDZ>ZT>2iP>6-BA>KT。細(xì)胞分裂素的使用量通常為0.05-10mg?L-1。在培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素有三個(gè)作用:①誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長,細(xì)胞分裂素與生長素相互作用,當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素/生長素的比值高時(shí),誘導(dǎo)愈傷組織或器官分化出不定芽。②促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。③抑制根的分化。2023/2/519HuoXW,IMAU生長素與細(xì)胞分裂素的比例決定著發(fā)育的方向,是愈傷組織、是長根還是長芽。促進(jìn)芽器官的分化,應(yīng)除去或降低生長素的濃度,或者調(diào)整培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的比例。
一般生長素濃度的使用為0.05-5mg/L,細(xì)胞分裂素0.05-10mg/L。2023/2/520HuoXW,IMAU(3)GA(gibberellicacid赤霉素):有20多種,生理活性及作用的種類、部位、效應(yīng)等各有不同、培養(yǎng)基中添加的是GA3,促進(jìn)幼苗莖的伸長生長,促進(jìn)不定胚發(fā)育成小植株;赤霉素和生長素協(xié)同作用,對形成層的分化有影響,當(dāng)生長素/赤霉素比值高時(shí)有利于木質(zhì)部分化,比值低時(shí)有利于韌皮部分化;赤霉素還用于打破休眠,促進(jìn)種子、塊莖、鱗莖等提前萌發(fā)。一般在器官形成后,添加赤霉素可促進(jìn)器官或胚狀體的生長。赤霉素溶于酒精,配制時(shí)可用少量95%酒精助溶。赤霉素不耐熱,高壓滅菌后將有70%-100%失效,應(yīng)當(dāng)采用過濾滅菌法加入。2023/2/521HuoXW,IMAU脫落酸(abscissicacid,ABA)抑制細(xì)胞分裂和伸長,促進(jìn)脫落和衰老,促進(jìn)休眠。主要用于種質(zhì)資源的超低溫保存。多胺(polyamines,PA)主要包括腐胺(Put),精胺(Spm),亞精胺(Apd)及尸胺(Cad)是生物代謝過程中產(chǎn)生的小分子脂肪族含氮堿對植物生長發(fā)育、形態(tài)建成及抗逆性有調(diào)節(jié)作用。2023/2/522HuoXW,IMAU4、瓊脂(agar)瓊脂是從紅藻等海藻中提取的一種高分子碳水化合物,其主要作用是使培養(yǎng)基在常溫下凝固,它不參與代謝、不提供營養(yǎng)(但不純的瓊脂中常會(huì)有一些微量元素),在植物離體培養(yǎng)中一直被作為首選的固化劑。瓊脂的用量一般在4~10g/L之間。在離體培養(yǎng)中,增加瓊脂的用量可以克服“玻璃化現(xiàn)象”的發(fā)生。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家和加工方式有關(guān)外,還與高壓滅菌的溫度、時(shí)間、pH值等因素有關(guān),長時(shí)間的高溫會(huì)使凝固能力下降,過酸及高溫會(huì)使瓊脂發(fā)生水解,失去凝固能力。存放時(shí)間過久,也會(huì)逐漸失去凝固力,在使用中應(yīng)注意。2023/2/523HuoXW,IMAU5活性碳(activatedcarbon)與硝酸銀活性碳(AC)可吸附植物的有害泌出物,但其對物質(zhì)吸附的選擇性很低,同時(shí)也能吸附某些植物的必需化合物.活性碳的用量一般為0.5%-3%。在高壓滅菌之前加入活性碳會(huì)降低培養(yǎng)基的pH值,使瓊脂不易凝固,在培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意。2023/2/524HuoXW,IMAUAgNO3離體培養(yǎng)中的植物組織會(huì)產(chǎn)生乙烯,乙烯在培養(yǎng)容器中的積累會(huì)影響培養(yǎng)物的生長和分化,嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致培養(yǎng)物的衰老和落葉。AgNO3中的Ag+通過競爭性地結(jié)合于細(xì)胞膜上的乙烯受體蛋白,能起到抑制乙烯活性的作用。在培養(yǎng)基中加入適量的AgNO3,有促進(jìn)愈傷組織分化器官或胚狀體的作用,能使某些原來再生困難的物種再生植株,并對克服試管苗玻璃化、早衰及落葉等有明顯效果。AgNO3的使用濃度一般為1~10mg/L。不可把培養(yǎng)物長期保存在AgNO3培養(yǎng)基上2023/2/525HuoXW,IMAU6、抗氧化物(antioxide)
植物組織在切割時(shí)會(huì)溢泌一些酚類物質(zhì),接觸空氣中的氧氣后,自動(dòng)氧化或由酶類催化氧化為相應(yīng)的醌類,產(chǎn)生可見的茶色、褐色以致黑色,這就是酚污染。這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身中毒,使培養(yǎng)的材料生長停頓,失去分化能力,最終變褐死亡。在木本,尤其是熱帶木本及少數(shù)草本植物中較為嚴(yán)重。抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸及Vc,可用50-200mg/L的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面,或過濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其他抗氧化劑有二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯等。2023/2/526HuoXW,IMAU7、染色劑(stain)在進(jìn)行離體培養(yǎng)研究時(shí)通常需配制不同的培養(yǎng)基,或加入不同的植物激素,以觀察培養(yǎng)物的變化,確定最適宜的配方。除了用鉛筆或油筆標(biāo)記外,一個(gè)可行的辦法,是在培養(yǎng)基中滴加1~3滴1%的活體染色劑,如亞甲蘭、中性紅、甲基紫等,將培養(yǎng)基染成不同的淡顏色,由于染色劑用量極微,不會(huì)對培養(yǎng)物產(chǎn)生影響,利用此法能夠節(jié)約大量的標(biāo)注時(shí)間。甲基紫除供染色之外,還具有較強(qiáng)的殺菌作用,0.001%即可有效地抑制細(xì)菌和部分真菌的生長。2023/2/527HuoXW,IMAU8、抗生素(antibiotic)
對于內(nèi)生菌的情況,可使用抗生素類物質(zhì)進(jìn)行抑菌,經(jīng)試驗(yàn),甲基托布津、多菌靈、百菌清都有較好的效果,另據(jù)報(bào)道,鏈霉素、青霉素、地霉素、新霉素、夾竹桃霉素、抗菌肽等物質(zhì)都具有降低內(nèi)生菌污染的效果。常用的抗生素有青霉素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、利福平、卡那霉素、慶大霉素等,用量為5-20mg/L。大部分抗生素要求過濾滅菌。不同抗生素抑菌效果不同,需針對性選擇;通常需幾種配合使用;2023/2/528HuoXW,IMAU第二節(jié)培養(yǎng)基的種類(1)MS培養(yǎng)基
1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計(jì)的特點(diǎn):無機(jī)鹽和離子濃度較高,為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適,可滿足植物的營養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高,廣泛地用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng),效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變而來的。2023/2/529HuoXW,IMAU(2)B5培養(yǎng)基
1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):含有較低的銨,這可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用。從實(shí)踐得知有些植物在B5培養(yǎng)基上生長更適宜,如雙子葉植物特別是木本植物(3)White培養(yǎng)基
1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì)的。1963年又作了改良,稱作White改良培養(yǎng)基,提高了MgSO4的濃度和增加了硼素。特點(diǎn):
無機(jī)鹽數(shù)量較低,適于生根培養(yǎng)。2023/2/530HuoXW,IMAU(4)N6培養(yǎng)基
1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):成分較簡單,KN03和(NH4):S04含量高。在國內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。(5)KM-8P培養(yǎng)基
1974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的。特點(diǎn):有機(jī)成分較復(fù)雜,它包括了所有的單糖和維生素,廣泛用于原生質(zhì)融合的培養(yǎng)。2023/2/531HuoXW,IMAU一培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基類型:1普通培養(yǎng)基(平衡培養(yǎng)基):MS(MurashigeandSkoog,1962)培養(yǎng)基,無機(jī)鹽濃度高、緩沖性能好、營養(yǎng)豐富、微量元素種類全,使用最廣泛。改良MS:LS、BL、BM、ER等。2富含硝酸鉀培養(yǎng)基:B5、N6、SH等培養(yǎng)基,硝酸鉀含量高、銨態(tài)氮含量低(某些植物生長受抑制)。3中等無機(jī)鹽培養(yǎng)基:如MA、H培養(yǎng)基等,無機(jī)鹽約為MS的半量、微量元素種類少含量高、維生素種類增加(生物素、葉酸等)。4低無機(jī)鹽培養(yǎng)基:White、WS、HE等培養(yǎng)基,無機(jī)鹽含量低(MS的1/4)、有機(jī)成分低,主要用于生根。2023/2/532HuoXW,IMAU二激素選擇生長素:節(jié)間伸長、頂端優(yōu)勢、促進(jìn)生根等,組培中用于促進(jìn)細(xì)胞分裂、誘導(dǎo)愈傷和生根。常用的生長素類激素有:2,4-D、2,4,5-T、NAA、NOA、IBA、IAA等。2,4-D、2,4,5-T主要用于誘導(dǎo)愈傷;IBA、IAA常用于生根培養(yǎng)。細(xì)胞分裂素:促進(jìn)細(xì)胞分裂、打破頂端優(yōu)勢、促進(jìn)芽分化。常用的細(xì)胞分裂素有:ZT、BAP、6-BA、2-iP、KT等。細(xì)胞分裂素與生長素的比例及含量是激素使用的關(guān)鍵:原則上生長素水平高促進(jìn)愈傷,反之利于分化。另外生長素用于生根。此外選擇脫落酸或激素抑制物(AgNO3、三碘苯甲酸)等,可促進(jìn)愈傷誘導(dǎo)或芽分化。2023/2/533HuoXW,IMAUAuxin-CytokininInteractionAuxinHighLowCytokininHighLowRootformationoncuttingsFirststageofembryogenesisAdventitious(外來)rootformationCallusInitiationindicotsAdventitiousshootformationAxillaryshootproliferationinshootculturesCallusinitiationinmonocots2023/2/534HuoXW,IMAU第三節(jié)培養(yǎng)基的制備一、母液(stocks1ution)的配制和保存母液是欲配制液的濃縮液,一般母液配成比所需濃度高10-200倍。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等。2023/2/535HuoXW,IMAU二、培養(yǎng)基的配制和保存計(jì)算所需各成分的量加水,瓊脂煮熔,一次加入大量元素,微量元素,鐵鹽,有機(jī)物,生長調(diào)節(jié)劑及其它添加物及蔗糖定容調(diào)節(jié)pH分裝封口滅菌2023/2/536HuoXW,IMAU第四節(jié)培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)一、單因子試驗(yàn)
在單因子試驗(yàn)中,由于培養(yǎng)基中其他成分都維持在一般水平上,所以只變動(dòng)一個(gè)因子,就可以找出這個(gè)因子對試驗(yàn)的影響和影響的程度。二、多因子試驗(yàn)
對培養(yǎng)基中兩個(gè)或兩個(gè)以上因素進(jìn)行研究的試驗(yàn)稱為多因子實(shí)驗(yàn),試驗(yàn)可采用完全試驗(yàn)方案,也可選用正交設(shè)計(jì)方案,完全試驗(yàn)方案具有均衡完全的特點(diǎn),各個(gè)因子的每個(gè)水平都相互搭配,構(gòu)成了所有可能的處理組合。三、逐步添加和逐步排除的試驗(yàn)方法2023/2/537HuoXW,IMAU三、逐步添加和逐步排除的試驗(yàn)方法
在植物組織分化與再生的研究中,在沒有取得可靠的分化與再生之前,往往添加各種有機(jī)營養(yǎng)成分,而在取得了穩(wěn)定的再生之后,就可以逐步減少這些成分。在逐步添加時(shí)是使試驗(yàn)成功,在逐步減少時(shí)是縮小范圍,以便找到最有影響力的因子,或是為了實(shí)用上的需要竭力使培養(yǎng)基簡化,以降低成本和利于推廣。在尋求最佳激素配比時(shí),也經(jīng)常用到這種加加減減的簡單方法。2023/2/538HuoXW,IMAUPicturesoftissuecultureintheAfricanVioletThesepicturesshowtheeffectsofchangingthecompositionofatissueculturemediumthatwasdesignedoriginallyformicropropagationofthecommonhouseplant,theAfricanViolet(紫羅蘭).
Thecontrolmediumcontains:4.71g.l-1
MurashigeandSkoogInorganicsaltsmedium,0.5mg·l-1naphthaleneaceticacid(NAA,anauxin),0.5
mg.l-1
benzylamine
purine(BAP,acytokinin)and3%sucrose,solidifiedby1%agar.
ThisTable
summarisesthecompositionofthemedium.
Eachpictureshowstheeffectonthepatternofdifferentiationofincreasingordecreasingonecomponentofthismedium.Allareofapproximatelythesamesizeoftheoriginalexplant(1cmsquare).TheFiguresareatasimilarmagnification(放大率).2023/2/539HuoXW,IMAUControlGrowthmediumisoptimisedforregenerationofplantlets.Theexplantiscompletelycoveredwithgreenshoots,androotsaredevelopingonthelowersurface(somevisibleatthesides).2023/2/540HuoXW,IMAUNosucrose(0%)Veryfewshootshavedevelopedontheexplant.Norootsandnocallus.Sucrosereducedto1%Shootsdevelopedonedgesofuppersurface,andsomerootdevelopmenthasoccurred.NoBAP
Profuse(豐富的)developmentofrootsandareducednumberofshoots.Undifferentiatedcallu
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