分子生物學(xué)常用儀器介紹2課件

研究生實驗技能培訓(xùn)

－－分子生物學(xué)實驗常用儀器介紹實驗中心PH計種類臺式（實驗室用）PH計便攜式（實驗室用）PH計工業(yè)用PH計多功能（實驗室用）PH計pH計的校正生產(chǎn)廠家一般提供兩瓶標(biāo)準(zhǔn)溶液一瓶pH值等于6.86（混合磷酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液），用于標(biāo)定儀表零點。一瓶pH等于4（鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液），用于標(biāo)定儀表的信號輸出斜率。pH計的使用注意事項測試前，用蒸餾水沖洗電極，洗去保護(hù)液。測量電極上的玻璃探頭，小心碰撞，避免破碎。完成測試后，用蒸餾水沖洗電極，吸干，套上套管，關(guān)閉電源。METTLERTOLEDOAG285天平工作原理

天平是稱量物體質(zhì)量的衡器。常用天平都采用單杠桿結(jié)構(gòu)，運用“杠桿平衡時加在等力臂上的力相等”這一原理制成。電子天平是用電磁力平衡被稱物體重力的天平?；靖拍钊Q量天平所能稱量的最大質(zhì)量值（滿載值），常以“克”（g）為單位表示。

感量使天平指針從平衡位置轉(zhuǎn)到刻度盤一分度所需的最大質(zhì)量。因此，感量也叫做“分度值”，常以“毫克”（mg）為單位表示。（e,d)這一數(shù)值愈小，天平就愈靈敏。Max:81g/210gd=0.01mg/0.1mg

如何選擇天平用一臺實際標(biāo)尺分度值d為1mg，檢定標(biāo)尺分度值e為10mg，最大稱量為200g的Mettler電子天平，用來稱量7mg的物體，這樣是不能得出準(zhǔn)確結(jié)果的。在《JJG98-90非自動天平試行檢定規(guī)程》中規(guī)定，最大允許誤差與檢定標(biāo)尺分度值“e”為同一數(shù)量級，此臺天平的最大允許誤差為1e，顯然不能稱量7mg的物體。按其觀察對象和光路結(jié)構(gòu)可分為正立、倒置和體視顯微鏡按其光學(xué)性質(zhì)可分為明場和暗場暗場又包含相差、霍夫曼、熒光和偏光顯微鏡的分類暗視野顯微鏡在培養(yǎng)細(xì)胞活體觀察中以倒置暗場為主一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞內(nèi)微粒的運動等。細(xì)胞培養(yǎng)中顯微鏡的運用細(xì)胞數(shù)量記錄細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞動力學(xué)記錄NIKONTE2000-U

倒置熒光顯微鏡工作原理

熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍(lán)光4200入)作為激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察?；緲?gòu)造由普通光學(xué)顯微鏡加上一些附件：熒光光源激發(fā)濾片雙色束分離器阻斷濾片等熒光顯微鏡內(nèi)部構(gòu)造1觀察標(biāo)本中的自發(fā)熒光物質(zhì)或以熒光素染色或標(biāo)記的細(xì)胞和結(jié)構(gòu)2標(biāo)本中的熒光物質(zhì)在紫外線激發(fā)下產(chǎn)生各種顏色的熒光，借以研究該熒光物質(zhì)在細(xì)胞和組織內(nèi)的分布。3細(xì)胞內(nèi)的某些成分可與熒光素結(jié)合而顯熒光，如溴化乙錠與吖啶橙可與DNA綜合，進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)DNA含量測定。4熒光顯微鏡更廣泛用于免疫細(xì)胞化學(xué)研究，即以異硫氰酸或羅丹明等熒光素標(biāo)記抗體（一抗或二抗），用該標(biāo)記抗體直接或間接地與細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原結(jié)合，以檢測該抗原的存在與分布。免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。主要用途熒光的種類自發(fā)熒光（固有熒光）二次熒光Fluorescenceimage,DNAinblueandMicrotubulesingreen細(xì)胞增殖試劑盒Cy5-連接的抗-BrdU來檢測細(xì)胞增殖綠熒光目標(biāo)蛋白測定

---監(jiān)測細(xì)胞內(nèi)蛋白位移RAC-1AKT-1細(xì)胞存活，細(xì)胞增殖SMAD-2TGF-b信號傳導(dǎo)STAT-3細(xì)胞因子傳導(dǎo),leptinsignalingNFAT-C1免疫反應(yīng),前列腺素信號傳導(dǎo)途徑FYVEdomainPI(3)P傳感途徑Rac-1胞質(zhì)分裂，遷移，轉(zhuǎn)換Cytokinesis,migration,transformationPLCδ-PHPI(4,5)P2信號傳導(dǎo)途徑,adrenoreceptorfunctionMAPKAP-k2p38途徑

WU

WIBDUAL

BANDWIBAWIGWIBDAPI+FITCFITC+PI雙重染色標(biāo)本的單色和雙色觀察

1．打開燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱幾分鐘才能達(dá)到最亮點。2．使用中應(yīng)注意：末裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷。3．高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開，需經(jīng)5分鐘后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。使用注意事項GenepulserXcell電穿孔系統(tǒng)工作原理電穿孔是功能強大的將核酸、蛋白及其它分子導(dǎo)入多種細(xì)胞的高效技術(shù)。通過高強度的電場作用，瞬時提高細(xì)胞膜的通透性，從而吸收周圍介質(zhì)中的外源分子。這種技術(shù)可以將核苷酸、DNA與RNA、蛋白、糖類、染料及病毒顆粒等導(dǎo)入原核和真核細(xì)胞內(nèi)。系統(tǒng)的組成由一個主單元、2個附屬模塊（CE與PC模塊）及ShockPod電擊槽組成CE模塊（電容擴(kuò)增器模塊）與主單元配合使用可電轉(zhuǎn)化多數(shù)真核細(xì)胞（包括哺乳動物細(xì)胞和植物原生質(zhì)體）。PC模塊（脈沖增強控制器模塊）建議用于細(xì)菌和真菌的電轉(zhuǎn)化，或其它需要在小體積和高電阻樣品上施加高電壓脈沖的應(yīng)用。系統(tǒng)有3種組合。

電擊杯選擇指南0.4cm間距電擊杯寬間距、低場強、應(yīng)用于哺乳動物細(xì)胞和其它真核細(xì)胞0.2cm間距電擊杯窄間距、高場強、應(yīng)用于酵母、細(xì)菌和其它真核細(xì)胞0.1cm間距電擊杯最窄間距、極高的場強，淺底用于小體積樣品(40–80μl)應(yīng)用于酵母和細(xì)菌轉(zhuǎn)化主要用途用于哺乳動物細(xì)胞、胚胎細(xì)胞或植物原生質(zhì)體的穿孔，可有效轉(zhuǎn)移任何大小或復(fù)雜度的DNA、蛋白質(zhì)，適用于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，細(xì)菌和酵母的轉(zhuǎn)化。超低溫冷藏柜生物材料的凍存（1）0—8℃疫苗保存箱可用于儲存疫苗、藥劑、血液等

2—8℃藥品保存箱藥品保存箱是醫(yī)療行業(yè)冷藏藥品的專業(yè)設(shè)備，也可用于儲存生物制品

4℃血液保存箱醫(yī)療行業(yè)冷藏血液（全血）的專業(yè)冷藏設(shè)備，也可以用于冷藏藥物，生物制品

—25℃~—40℃低溫保存箱可用于保存血漿，生物材料，疫苗、試劑等

生物材料的凍存（2）—40℃低溫保存箱可用于特殊材料的低溫實驗、凍存血漿、生物材料、疫苗等

—60℃~—70℃超低溫保存箱保存生物材料、血漿以及特殊材料的低溫試驗

—86℃超低溫保存箱用于保存病毒、病菌、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、皮膚、骨骼、細(xì)菌、精液、生物制品，遠(yuǎn)洋制品，特殊材料的低溫試驗等

—156℃深低溫保存箱用于保存病毒、病菌、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、DNA/RNA、皮膚、骨骼、細(xì)菌、精液、生物制品臨床試驗品等。

ELX800酶標(biāo)儀主要用途用于讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，可進(jìn)行單克隆抗體篩分、抗生素靈敏度檢驗(食品安全藥物殘留快速檢測)以及其它需要進(jìn)行比色的分析。酶標(biāo)儀測定原理

在特定波長下，檢測被測物的吸光值。在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測，稱為測量波長。但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準(zhǔn)確性。在參照波長下，檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

主要性能說明

速度：30秒/96孔板

儲存：儲存55種測試項目，并能儲存最近的8個測試結(jié)果，可儲存25條標(biāo)準(zhǔn)曲線

濾光片：濾光輪可放5塊濾光片，儀器配405、450、490、630nm4塊濾光片線性：405nm，0-2.000Abs±1%

450nm，0-2.000Abs±1%

外接口：電腦接口（RS232）、打印機接口

波長范圍：400-750nm具有單、雙波長設(shè)定

吸光度范圍：0.000-3.000Abs

分辨率：0.001Abs

操作注意事項

A.使用移液器加液，移液槍頭不能混用。

B.洗板要干凈，避免交叉污染。

C.嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作，反應(yīng)時間準(zhǔn)確。

D.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成注意做好清潔工作。

E.不要在測量過程中關(guān)閉電源。

F.對于因試劑盒問題造成的測量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實際情況及時修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。

G.使用后蓋好防塵罩。

熒光定量PCR儀應(yīng)用定量檢測絕對定量：基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因食品檢測、病原體檢測相對定量：基因在不同組織中的表達(dá)差異、藥物療效考核點突變檢測與疾病相關(guān)的等位基因點突變檢測SNP檢測RealTimePCR原理

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光物質(zhì)，并實時監(jiān)測熒光信號積累的整個PCR進(jìn)程，最后通過已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知濃度的樣品進(jìn)行定量分析。RealTimePCR檢測方法

熒光染料嵌合法(SYBRGreenI)

熒光探針法

TaqManprobeCyclingprobe

MolecularBeaconprobeHybridizationprobeScorpionsprobe

AmplifluorprobeAgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio熒光染料嵌合法原理SYBRGreenI

SYBRGreenI是具有綠色激發(fā)波長的染料，能結(jié)合于任意dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的。AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio熱變性引物退火延伸反應(yīng)熒光染料嵌合法原理

RayGeneBioAgentofTaKaRaTaqMan探針法原理AgentofTaKaRa

瑞真生物

RayGeneBio

TaqManprobe為一寡核苷酸(20-24bp)5’端標(biāo)記一個熒光報告基團(tuán)(Reporter)3’端標(biāo)記一個熒光淬滅基團(tuán)(Quencher)熱變性引物和探針與模板退火延伸反應(yīng)探針報告基團(tuán)淬滅基團(tuán)探針DNA聚合酶引物RRRRTaqMan探針法原理信號強度與結(jié)合探針的DNA分子數(shù)成正比生產(chǎn)廠商儀器名稱TaKaRa公司TP800AppliedBiosystems公司ABIPRISM7700、7000、7300、7900HT、

7500FastRoche公司LightCycler?2.0、LightCycler?480

Cepheid公司SmartCycler、SmartCyclerII、SmartCycler?TD

Bio-Rad公司iCycleriQ、iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

CorbettResearch公司Rotor-gene2000、Rotor-gene3000、Rotor-gene6000

MJResearch公司Opticon、MJMiniCycler、MiniOpticonStratagene公司Mx4000?、Mx3000P?、Mx3005PTM杭州博日LINE-GENEFQD-33A、LINE-GENEFQD-66ARealTimePCR檢測系統(tǒng)

瑞真生物

RayGeneBioAgentofTaKaRaLightCycler?480

Rotor-gene6000MiniOpticonMx3005PTM

LINE-GENEFQD-66A

ABIPRISM7500iQ5Real-TimePCRDetectionSystem

TaKaRaTP800開、關(guān)機順序開機：先便宜，后貴的。關(guān)機：先貴的，后便宜。選擇生物安全柜的理由工作對象具有生物危害原代培養(yǎng)物、菌毒種以及診斷性標(biāo)本等-------具有潛在感染性的實驗材料屬于《人間傳染的病原微生物名錄》中第一、二、三和四類微生物選擇生物安全柜的理由容易產(chǎn)生氣溶膠的工作行為

對液體或半流體進(jìn)行搖動、傾注或攪拌操作時，將液體滴加到固體表面上或另一種液體中時，在對瓊脂板劃線接種、用吸管接種細(xì)胞培養(yǎng)瓶，采用多道加樣器將感染性試劑的混懸液轉(zhuǎn)移到微量培養(yǎng)板中，對感染性物質(zhì)進(jìn)行勻漿及渦旋振蕩，對感染性液體進(jìn)行離心，進(jìn)行動物操作時。